农杆菌介导的蝴蝶兰基因转化系统的建立

 针刺后的蝴蝶兰‘White Hikaru’的类原球茎(PLB)，与含绿色荧光蛋白基因( )和潮霉素磷酸转移酶基因(^p￡)的pCAMBIA 1300一SmGFP的根瘤农杆菌LBA4404 共培养，培育出了转基因的蝴蝶兰。经绿色荧光蛋白检测和Southern印迹，证实了再生植株中含cop基因和hpt基因。     

狗蔷薇PaWUS基因的超量表达诱导转基因烟草根尖形成不定芽

WUSCHEL是植物干细胞命运的决定基因,在植物发育过程中WUSCHEL基因的表达决定着干细胞的形成和器官的发生.从狗蔷薇的类原球茎中克隆出其同源基因；经过对其进行蛋白质序列比对和系统发育分析,将其命名为Ra WUS基因.构建在XVE系统下的化学调控的表达载体.在该系统下,Ra WUS基因的超量表达能诱导转基因烟草根尖形成不定芽；同时显微观察表明,根部的皮层中有圆球形的分生组织干细胞团的产生.结果表明:Ra WUS基因的过量表达能够促使根的皮层中薄壁细胞转变成为分生组织干细胞而形成不定芽在根尖异位发生,说明其能够在植物的根尖中诱导茎尖分生组织干细胞的活性和发育的可塑性.     

大花蕙兰幼苗叶片诱导类原球茎

以大花蕙兰无菌幼苗叶片为外植体,成功诱导类原球茎(PLB).叶片部位是影响诱导的关键,只有叶片基部片段能成功诱导出PLB.不同激素配比以及外植体来源对PLB诱导有重要的影响.低浓度的2,4-D和较高浓度的6-BA对于拟球茎诱导PLB具有显著的促进作用.当2,4-D浓度高于0.6 mg/L时,PLB诱导受到显著抑制.较高的2,4-D水平可能有利于PLB诱导初始阶段,但不利于PLB诱导中后期的进一步发育.不同基因型有不同的最佳激素组合.添加0.2 mg/L的NAA对大花蕙兰PLB诱导没有显著影响,但在有的基因型中对PLB诱导有促进作用.以叶片基部片段诱导大花蕙兰PLB是可行的,为转基因研究提供了再生技术基础.     

霍山石斛类原球茎诱导及其发育过程研究

 以霍山石斛试管苗带节茎段为材料, 诱导产生类原球茎, 并研究类原球茎发育过程。结果表 明, 霍山石斛类原球茎诱导的适宜培养基为Knudson + 2, 4-D 0.1 mg·L ^{- 1} + KT 0.05 mg·L ^{- 1} , 诱导率为25.50%。以固体静置、固液双层静置、液体静置、液体振荡4种不同培养方式进行增殖培养, 其中液体振荡培养方式更适于类原球茎快速增殖。类原球茎通过胚状体发生途径形成, 类似于合子胚的发育, 即经历原胚、心形胚、鱼雷形胚和子叶胚, 最后发育为成熟胚。类原球茎发育进程大致可分为类原球茎形成期、类原球茎肥大期、茎叶分化期、茎叶形成期以及茎叶伸长期等阶段。     

蝴蝶兰种子无菌播种诱导增殖原球茎试验研究

利用不同激素浓度及添加物对蝴蝶兰未成熟胚有效原球茎进行诱导研究.结果表明:进行无菌播种采收未开裂的果荚比已开裂的要有利的多,采摘最佳时间为授粉后120 d;原球茎增殖效果最佳的激素组合是BA 3.0+NAA 0.2;200 mL/L椰乳对蝴蝶兰PLB增殖的影响效果最好,其次为香蕉和马铃薯.     

送春与多花兰杂种的非共生萌发与快速繁殖

用地生兰送春和附生兰多花兰进行种间杂交,对杂交种子进行非共生萌发和快速繁殖研究.结果表明:胚龄7个月、0.1 mol/L KOH处理10 min的种子萌发率最高;种子萌发后原球茎的增殖以Z4 (KC+BA 0.4 mg/L+NAA 0.6 mg/L+KT 0.2 mg/L ) 培养基为最好,增殖系数可达到12.8;在原球茎增殖和分化成苗过程中加入活性碳能够有效地防止切口褐化.     

植酸对霍山石斛类原球茎悬浮培养细胞生长和多糖合成的影响

研究了植酸对霍山石斛类原球茎悬浮培养细胞生长、多糖合成和培养基中主要营养成分消耗的影响,并分析了细胞中可溶性还原糖、可溶性蛋白质、丙二醛含量以及过氧化物酶和多酚氧化酶的活性。结果表明,植酸能抑制过氧化物酶和多酚氧化酶的活性,提高细胞活力,从而促进细胞生长和多糖合成,以2.5g/L浓度的植酸效果最好,培养36d时,类原球茎干重为29.4g/L,多糖产量为2.06g/L。动力学分析表明,添加2.5g/L的植酸还有利于碳、氮、磷等营养物质的吸收。     

文心兰高效再生体系的建立

[目的]建立文心兰高效再生体系,为利用转基因技术进行品种改良提供科学依据.[方法]以文心兰柠檬绿的无菌苗叶片为材料,探讨不同植物生长调节剂配比对其原球茎诱导的影响,开展增殖、生根及移栽研究,建立其高效稳定的再生体系.[结果]影响文心兰原球茎诱导的3种植物生长调节剂主次排序为萘乙酸(NAA)>噻苯隆(TDZ)>6-苄氨基嘌呤(6-BA),在1/2MS培养基中添加0.5 mg/L NAA、0.5 mg/L 6-BA和0.3 mg/L TDZ的诱导率最高,达48.0%.培养基中活性炭含量及碳水化合物种类对文心兰原球茎增殖的影响存在明显差异,不同活性炭含量处理间的原球茎增殖系数存在显著差异(P<0.05,下同),添加1.0 g/L活性炭较添加0.5 g/L活性炭的增殖系数显著升高,不同碳水化合物种类间的原球茎增殖系数排序为海藻糖>麦芽糖>蔗糖,最佳增殖和分化培养基为1/2MS+4.0 mg/L 6-BA+0.4 mg/L NAA+1.0 g/L活性炭+20 g/L海藻糖.添加10%椰子水的文心兰幼苗生根数显著高于添加10%香蕉汁和10%苹果汁,每株平均生根量接近4.00条,即生根效果最佳的培养基为1/2MS+0.8 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA+10%椰子水.移栽过程中根部用水苔包裹后再移至椰糠中,保证光照、水分适宜,适当添加缓释肥,移栽成活率可达100%.[结论]利用海藻糖或麦芽糖作为碳源的文心兰原球茎增殖效果较优,生根数和生根质量优势明显;不同植物生长调节剂配比、碳源和有机物的添加对文心兰组织培养具有明显的促进效果.     

虎雪兰玻璃化超低温法脱毒技术的研究

以兰属花卉虎雪兰组培原球茎为试材,采用玻璃化超低温法对兰花病毒脱除进行了研究,以期为虎雪兰玻璃化超低温法脱毒体系的建立提供参考依据。结果表明:在蔗糖浓度0.5 mol·L-1预培养4 d,然后在蔗糖0.6 mol·L-1加载液冰上处理50 min,之后转入PVS2溶液冰上玻璃化处理120 min,再液氮冷冻40 min,37℃水浴解冻3 min,最后卸载液(1/2MS+1.2 mol·L-1蔗糖)卸载20 min,待恢复培养后,原球茎成活率可达到65%以上,随机检测不同处理样品的脱毒率可达97%。