差异表达基因分离技术研究进展

研究不同细胞或同类细胞在不同发育阶段、不同生理状态下(正常状态、发育、衰老、损伤及疾病)差异基因的表达状况,将有助于了解调控细胞分化的机制,为分析生命活动过程提供重要信息。而分离与克隆差异表达的基因是了解这些生命过程的基础。1990年以来,出现了mRNA差异显示技术、代表性差异分析、抑制性削减杂交、cDNA微阵列技术等多种分离差异表达基因的手段,本文对以上方法的优缺点、发展趋势及其应用前景作了简要综述。     

青年专家文库——宋长绪

宋长绪,男,1965年生,博士,研究员，广东省农科院兽医研究所猪病研究室主任。广东省农科院第1届和第3届中青年学科带头人。1993年在西北农业大学兽医系获硕士学位．1996年在华南农业大学获得博士学位．1996年分配到广东省农业科学院兽医研究所工作。     

表达序列标签（ESTs）及其应用

表达序列标签(ESTs)是指从(ESTcDNA文库中随机挑取克隆并对其3’或5’端进行单轮自动测序所获得的短cDNA库列，一般长度为300～500bp。要有效获取ESTs，必须对cDNA文库进行预处理，处理方法有衰减杂交法、均一化法和差异显示法。在dbEST中收录了大量各种生物的ESTs。ESTs广泛应用于鉴定基因、发现新基因、电子克隆、构建遗传学图谱、制备DNA芯片、分子标记、研究基因的差异表达及检验病原微生物等方面。     

鸡13号染色体比较图谱的改进（完善）

鸡13号染色体(GGA13)与人类5号染色体(HSA5)的一部分构成比较图谱。用GGA13特异性微卫星标记扫瞄Wageningen鸡细菌人工染色体(BAC)文库。所选BAC克隆最终被测序，57个STS位标被用来构建克隆重叠群。在GGAl3上衷情共检测到了204个BAC克隆，这些克隆约20％是重叠的。基因检测采用双向式方法院。首先从已经不定位的鸡BAC亚克隆序列开始，通过BLAST数据库工具，检测人类和小鼠折同源基因。第2步在人在HSA5q23-q35区域寻找与鸡同源的人类基因。接着用荧光原位杂交(FISH)或SNP方法将鸡的同源基因定位。本研究的比较图谱改进之处在于，使GGAl3上定位的基因数从14增加到20；GGAl3染色体定位的基因有人类HSA5q23-q35，小鼠Mull、Mull3、Mul8染色体上的同源基因。     

cDNA Cloning and Sequence Analysis of Rice Sbel and Sbe3 Genes

Two starch-branching enzyme (SBE) in rice, is known to be a key enzyme in amylopectin biosynthesis. The cDNA of two SBE(starch-branching enzyme) genes SheI and Shed encoding SBE Ⅰ and SBE Ⅲ (two major isoforms in rice) were cloned by an improved RT-PCR technique, from a template cDNA libray, derived from the total mRNAs extracted from the immature seeds of a japonica rice Wuyunjing 7. DNA sequence analysis showed that the size of the cloned SheI and Shed cDNAs were 2490 and 2481 bp long, respectively, including their entire coding sequences. Comparison analysis indicated that the nucleotide sequence of She3 was the same as that of shed (Genbank Accession No. D16201) as reported previously. There were only four base-pairs difference,which resulted in changes of two deduced amino acids between the cloned She1 cDNA and the reported she1 (Genbank Accession No. D11082). The cloned SheI and Shed cDNAs make it possible to improve rice starch quality through genetic engineering.     

立足优势突出特色——对建立河西学院文库的实践与思考

立足河西学院人才与资源优势,从实际出发阐述了建立学校文库的意义和作用,并提出了建立文库的几点建议和措施。     

鹅IGF-I基因cDNA的克隆、分析与原核表达

从GenBank中读取鸡、鸭、鹌鹑、火鸡等的胰岛素样生长因子-I(IGF-I)基因序列进行分析并设计引物,运用RT-PCR法从五龙鹅的总RNA中克隆了IGF-I基因的完整编码区序列(GenBank登录号为DQ662932).运用生物信息学技术对序列进行分析,结果显示:五龙鹅JGF-I基因的编码区长462 bp,与鸭和鸡基因序列同源性分别为99.6%和98.1%;分子进化树进一步揭示了五龙鹅与鸭、鸡及其他动物的进化关系;同源建模分析发现该基因有3个α-螺旋组成.克隆鹅IGF-I基因表达序列,然后连接到pET-32a载体上进行原核表达.经SDS-PAGE分析发现原核表达产物约为28 ku的融合蛋白,Western杂交分析表明,重组蛋白为目的蛋白.     

猪外周血单个核细胞cDNA酵母表达文库的构建及与猪瘟病毒E2蛋白相互作用细胞蛋白的筛选

为研究猪瘟病-毒(CSFV)蛋白与宿主细胞蛋白之间的相互作用,本研究通过SMART技术合成猪外周血单个核细胞(PBMC)双链cDNA,以携带与载体pGADT7-Rec重组位点同源序列的特异引物经long-distance PCR扩增双链cDNA.纯化双链cDNA并与载体pGADT7-Rec共转化酵母菌株Y187,经同源重组构建PBMC cDNA酵母表达文库.以CSFV E2蛋白为诱饵进行酵母双杂交筛选,得到阳性克隆根据序列比对分析结果,进一步进行共转化验证.结果显示筛选到17个与CSFV E2蛋白相互作用的宿主细胞蛋白,基因注释(GO)分析表明这些蛋白分别参与免疫、代谢、细胞生长与增殖、生物调节等过程,为研究它们与CSFV E2的相互作用奠定了基础.     

关于高校图书馆文库文献收集的问题

概括了高校文库文献收集工作的内容以及当前文库文献收集存在的问题,提出争取领导的支持,变图书馆行为为学校行为;把握时机,拓展收集渠道;设立专项经费,开展有偿征购;提高人员素质,培养敬业精神是加强文库文献收集的主要措施.