优氯净对苏云金杆菌伴孢晶体消毒效果及机理的研究

苏云金杆菌(Bacillus thuringiensis,简称BT菌)的伴孢晶体被优氯净液处理后,在相差显微镜下观察,失去暗蓝色光泽,呈暗黑色,难溶于碱性缓冲液。虽能溶于昆虫的胃液,却失去致病性。用扫描电镜和SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳进一步研究,结果表明:优氯净能破坏伴孢晶体蛋白的一级和立体结构,使晶体蛋白失活,达到消毒的目的。消毒能力测定结果表明:1毫升0.03％有效氯优氯净液在3分钟内能消毒50微升BT菌液(3μg伴孢晶体/μl菌液)。消毒BT菌污染桑叶,用0.01％有效氯优氯净液浸泡3分钟即可。考虑到生产上的安全性,我们建议用0.05％有效氯优氯净消毒3—5分钟。     

苏云金杆菌小试生产发酵影响因子的研究

利用 1 0L全自动发酵罐对苏云金杆菌小试生产的发酵条件进行了研究。结果显示 ,不同的温度、pH值、培养基成分及接种方式对发酵产量和发酵周期均有影响 ;在培养基配方中存在葡萄糖时 ,葡萄糖单独灭菌对提高苏云金杆菌发酵产量是重要的。初步生物测定显示 ,发酵上清中存在一些杀虫增效因子 ,建议配制苏云金杆菌制剂时尽可能加以利用。     

苏云金芽孢杆菌cry基因在大肠杆菌中表达产物和生物活性

研究了几种Bt cry基因于大肠杆菌(Escherichia coli)中表达产物在pH 10.0的50mmol/L碳酸钠和20mmol/L乙醇胺溶解液中的溶解性 ,发现同样的Cry蛋白在碳酸钠中的溶解度大于乙醇胺。通过胰蛋白酶消化 ,明确Cry1Ca7、Cry1Ia8酶解产物为 38kD多肽 ;Cry1Ie1、Cry1Cb2、Cry2Ab4酶解产物为 41kD多肽 ;Cry1Ac酶解产物为60kD多肽。采用FPLC层析方法对 6种原毒素及其酶解后得到的毒素多肽进行了分离纯化 ,比较了原毒素和毒素的杀虫活性的差异。其结果表明 ,Cry1Ac的原毒素和毒素对棉铃虫初孵幼虫的校正死亡率均为 100% ,Cry2Ab4的原毒素的毒力高于其酶解毒素。     

对鳞翅目害虫有活性的cry1C基因的克隆和表达

在鉴定苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis，简称Bt)Btc001菌株cry基因型的基础上，构建了Btc001菌株质粒DNA HindⅢ片段的文库，并利用聚合酶链式反应-限制性酶切片段多态性(PCIR-RFIP)方法筛选出含有crylC6全长基因的13．5kb大片段，酶切分析得到该片段的物理图谱，BamHI和EcoRI切完成了6．5kb含全长基因的亚克隆，并对这条6．5kb片段亚克隆、测序，序列在国际核酸序列数据库(GenBank)登记(AY007686)，并由Bt杀虫晶体蛋白基因国际命名委员会命名为cry1Cb2基因。根据序列设计了一对用于扩增全长基因的引物S581CB和S381CB，扩增产物插入表达载体pET-21b中，诱导后在大肠杆菌BL21(DE3)中获得高效表达。表达产物对小菜蛾(Plutella xylostella)表现出较高活性，LC50达到7．9μg/ml。     

苏云金杆菌高效生产菌株的筛选

从灯蛾罹病死亡幼虫中分筛筛选出苏云金杆菌ＢａｃｉｌｌｕｓｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓＳＢ－１菌株，从引进的Ｂ．ｔ．菌种中筛选出ＳＢ－８菌株。该两株菌经发酵试验，生产性能良好，对抗药性强的台湾、泰国和深圳品系的小菜蛾毒力较高。田间试验表明杀虫效果好。     

Toxicity of Bacillus thuringiensis Crystal Toxins to Field Populations of Rice Leaf Folder, Cnaphalocrocis medinalis （Guenee） and Establishment of Baseline Susceptibility to Cry1Ab

Eight insecticidal crystal proteins of Bacillus thuringiensis, CrylAa, CrylAb, CrylAc, CrylB, Cry2Aa, CrylC, CrylDa and Cry 1Ea were assessed for toxicity against 1 st instar larvae of rice leaf folder, Cnaphalocrocis medinalis （Guenee） at 48 HAT and 72 HAT. Bioassay results depicted CrylAa was the most toxic （LCso 2.35 ppm） followed by CrylBa （LCso 8,50 ppm） and CrylAb （LCso 8.73 ppm） at 48 HAT, whereas, at 72 HAT CrylAb proved to be highly toxic （LC50 0.50 ppm） followed by CrylAa （LCso 4.07 ppm）, CrylAc （LCso 4,84 ppm） and CrylBa （LCso 6.42 ppm）. Toxins Cry2Aa, CrylCa, CrylDa and CrylEa did not resulted in any mortality at 48 HAT and 72 HAT, respectively. Baseline estimates for CrylAb against 1st instar larvae of C. medinalis sampled from seven geographical locations revealed variation in LC50＇s from 0.37 ppm to LC50 16.25 ppm at 48 HAT and LC50 0.50 ppm to LC50 6.49 ppm 72 HAT, respectively with relative resistance ratios of 44-fold and 13-fold at 48 HAT and 72 HAT over the susceptible population.     

苦楝果实提取物对Bt-8010和Bt-7216的抑菌活性

将采摘的苦楝果实烘干、粉碎,以甲醇为溶剂,用超声波法提取苦楝果实的提取物,配成不同浓度的苦楝果实提取液,用于测定2种生物农药Bt_8010和Bt_7216的抑菌圈和抑菌率。结果表明:苦楝果实提取液浓度越高,其抑菌程度越大。其中,对Bt_7216的抑菌活性较大,Bt_8010次之。高浓度的苦楝提取物与生物农药(Bt)混用会降低Bt的药效。     

杀线虫苏云金芽胞杆菌NBIN-863高含量悬浮剂的研制

目前我国微生物农药原药生产技术已达到甚至超过发达国家水平,但制剂技术却存在较大差距,主要体现在剂型结构不合理、制剂质量差、农药助剂种类及品种少、剂型加工工艺总体水平还比较落后等方面。苏云金芽胞杆菌(Bt)等功能微生物产品的市场容量及应用效果与剂型是密切相关的。为了明确新型生物杀线剂NBIN-863的最佳施用剂型,特开展此试验。通过对防腐剂、分散剂、悬浮剂等不同助剂的选择,研制了一种高含量Bt悬浮剂(5.2×10⁹～7.9×10⁹ CFU/mL)。配方优化试验表明,在Bt发酵液中加入0.4%防腐剂山梨酸钾、1.0%分散剂硅酸镁铝、4.0%悬浮剂木质素磺酸钙,用盐酸调节p H至4.5,54℃热储前芽胞数最高为7.9×10⁹ CFU/mL,对秀丽隐杆线虫活性最高,LC₅₀为2.83 mg/L,对黄瓜根结线虫田间防效达68.64%。综合各指标,尤其是对秀丽隐杆线虫的半致死浓度,杀线虫NBIN-863悬浮剂(7.9×10⁹CFU/mL)效果最好,不仅流动性好,而且耐贮藏,是防治作物根结线...