表达抗流感病毒基因重组慢病毒滴度测定及感染效率分析

分别将靶向禽流感病毒(AIV)多靶点siRNA和鸡Mx基因克隆到p201慢病毒表达载体,采用鸡β-actin启动子替换p201慢病毒载体CMV启动子构建重组慢病毒载体p201-β-Mx-siRNA。并将其与辅助包装质粒共转染293T细胞,72h后收集细胞上清,实时荧光定量PCR测定重组慢病毒(rLV-MX-siR-NA)与对照组重组慢病毒(rLV-GFP)CT值,两者比较确定rLV-MX-siRNA滴度。rLV-Mx-siRNA以MOI=4感染猪胎儿成纤维细胞(PEF)并传代培养,提取后代细胞RNA检测外源基因转录以及应用间接免疫荧光试验检测鸡Mx蛋白的表达。结果表明,rLV-Mx-siRNA浓缩后滴度与已知滴度的rLV-GFP相等,为2×108 TU/mL,感染PEF效率>95%。感染rLV-Mx-siRNA的细胞传至第5代和第10代检测到外源基因转录以及鸡Mx蛋白的表达。表达鸡Mx基因和靶向AIV多靶点siRNA重组慢病毒滴度的测定与感染效率的分析,其结果为研究抗AIV转基因猪及其抗AIV的体外评价奠定了基础。     

甘氨酰谷氨酰胺对猪离体骨骼肌卫星细胞增殖和分泌IGF-1的影响

为探讨甘氨酰谷氨酰胺(Gly Gln)对猪离体骨骼肌卫星细胞增殖和分泌IGF 1的作用,取10日龄仔猪的半腱肌和背最长肌,将分离出的半腱肌卫星细胞和背最长肌卫星细胞分别按2×10 5mL-1密度接种于培养板上,采用浓度为0 6、1 2和2 4mmol/L的Gly Gln处理离体培养的猪半腱肌和背最长肌卫星细胞,观察Gly Gln对离体骨骼肌卫星细胞增殖和分泌IGF 1的影响.结果表明:用上述浓度的Gly Gln处理细胞,对离体培养的猪半腱肌卫星细胞的增殖有显著促进作用(P <0 0 5 ) ,而对离体培养的猪背最长肌卫星细胞的增殖有极显著的促进作用(P <0 0 1) ;同时发现:添加0 6mmol/LGly Gln对猪背最长肌卫星细胞分泌IGF 1有显著的促进作用,提示:不同浓度的Gly Gln对猪离体骨骼肌卫星细胞的增殖均有促进作用,但不同部位的骨骼肌卫星细胞对Gly Gln的反应性不同     

美拉德反应修饰改善猪血浆蛋白抗氧化肽功能特性的研究

研究主要探讨美拉德反应修饰对猪血浆蛋白抗氧化肽功能特性的影响。采用D-半乳糖对猪血浆蛋白抗氧化肽进行美拉德修饰,蛋白质和糖的比例为1??3(W/W),在90℃水浴中分别加热0、1和6 h,得到美拉德反应产物(MRPs),测定其溶解性、表面疏水性、乳化性及乳化稳定性、起泡性及起泡稳定性。结果表明,经美拉德反应修饰后猪血浆蛋白抗氧化肽的功能特性有明显改善,其溶解性、乳化及乳化稳定性、起泡及起泡稳定性均随反应时间增加而逐渐增大(P0.05),表面疏水性则随反应时间增加而降低(P0.05)。同时,MRPs功能特性随体系中p H的改变而显著变化(P0.05)。因此,采用美拉德修饰改善猪血浆蛋白抗氧化肽功能特性,可使其广泛应用于食品加工业。     

内蒙古地区猪圆环病毒Ⅱ型感染的血清学调查

本实验应用酶联免疫吸附实验（ELIsA）方法对内蒙古地区部分未经PCV-2免疫的猪场猪只780份血样进行抗体阳性检测,结果显示,不同猪场均有PCV-2感染,PCV-2抗体平均阳性率为38．6％（301／780）,经产母猪阳性率为38．3％（51／133）,后备母猪阳性率为38．7％（46／119）,种公猪阳性感染率为23．5％（8／34）,哺乳仔猪阳性率为42．8％（80／187）,断奶仔猪阳性率为40．9％（70／171）,育肥猪阳性率为33．8％（46／136）。结果表明,内蒙古地区养猪场普遍存在猪圆环病毒II型（pcv-2）感染？     

猪特异性脂肪细胞膜蛋白的研究进展与应用前景

猪的特异性脂肪细胞膜蛋白的表达可能涉及到脂肪细胞的分化与生长的调节 ,缺乏该蛋白可能导致肥胖症。本文概述了国外对该膜蛋白的研究进展 ,并阐述了应用前景     

巴马小型猪对高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒的敏感性评价

为评价巴马小型猪对高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)的敏感性,本研究选择PRRSV抗体阴性的16头巴马小型猪和17头本地二元杂交猪作为研究对象,分别分为低剂量接毒组、高剂量接毒组、对照组1和对照组2,低剂量、高剂量接毒组肌肉注射接种PRRSV NVDC-JXA1强毒株,对照组1和接毒组混合饲养,对照组2分开饲养作为空白对照。接毒后每天测量体温,观察精神、食欲、死亡等情况,死亡动物剖检病变,攻毒后每隔7d采血用RT-PCR法检测病原,连续观察21d。结果绝大部分猪体温升高到41℃以上,且有3个以上温次,所有接种及混养动物都死亡,巴马小型猪死亡时间在8d~17d,二元杂交猪在7d~13d,死亡动物出现肺充血、出血、实变,扁桃体、淋巴结、肝脏、肾脏、皮下有出血等症状,病原RTPCR检测为阳性,说明攻毒动物死于HP-PRRS,表明巴马小型猪对PRRSV NVDC-JXA1强毒株非常敏感,可用于PRRS活疫苗的检验。     

7株猪圆环病毒2型福建分离株全基因组序列分析

根据已发表的猪圆环病毒2型(PCV2)基因序列,分段设计2对PCV2特异性引物,用PCR方法扩增近年从福建省部分发病猪场分离鉴定的7株PCV2的全基因序列并进行比对分析.结果表明:7株PCV2基因组全长1767 bp,与GenBank上发表的17株PCV2参考毒株的同源性为94.7%-99.5%;7株PCV2分离株之间的全基因同源性高达98.4%-99.5%;7株PCV2 ORF2编码蛋白均具有很强的亲水性和抗原性,其核苷酸及推导的氨基酸同源性高达98.9%-99.7%和97.9%-99.6%,与参考毒株的同源性分别为91.1%-99.7%和85%-100%,存在一定的差异.可见,7株PCV2在基因水平上差异不显著,在地域分布上也没有明显差异.     

猪嵴病毒VP1基因序列测定与分析

[目的]对猪嵴病毒(PKV) VP1基因进行测序与同源性分析,确认其可能来源,为今后的生物学特性分析及仔猪腹泻防治工作提供科学依据.[方法]采用RT-PCR对GXPKV-1毒株VP1基因进行克隆,运用DNASTAR软件包中Megalign程序对测序获得的VP1基因进行核苷酸序列及其推导氨基酸序列同源性分析.[结果]GXPKV-1毒株ⅥP1基因全长762 bp,共编码254个氨基酸,与GenBank已公布的13株参考毒株VP1基因的核苷酸同源性为74.1%~85.4%,推导氨基酸同源性为81.1%~93.3%.根据VP1基因推导氨基酸序列进行系统发育进化分析,发现GXPKV-1毒株与Gansu-2012、JS1419等国内参考毒株同属于同一亚群,而与瑞士分离株Swine-S-1-2007、泰国分离株THA-2008、美国分离株H24-2012-USA及四川分离株CHN-SC-2011-02等的亲缘关系较远.[结论]猪嵴病毒GXPKV-1毒株起源于国内流行毒株的传播,在新的环境下虽然其VP1基因核苷酸发生变异,但由于同义翻译,推导氨基酸的同源性仍然较高,说明碱基突变并未引起蛋白结构的改变.     

精液品质及其体内和体外受精能力的相关性研究

本试验研究了公猪精液的精子密度、活率和畸形率等精液品质指标与其在自然交配、人工输精和体外受精中受精能力之间的关系。研究表明,现有的精液品质评价参数可以反映该公猪在自然交配或人工输精后对体内卵母细胞的受精能力,但相似品质的精液在体外受精能力上差异显著(P<0.05),现有的精液质量评价参数不能反映其体外受精能力。