60Co辐射诱变姬松茸突变株J3子实体不同部位的氨基酸分析研究

测定并比较了60Co辐射诱变姬松茸突变株J3与原菌株J1子实体不同部位的氨基酸含量.结果表明,除菌柄和盖皮外,姬松茸突变株J3子实体其它部位的必需氨基酸、儿童氨基酸、硫氨酸、支链氨基酸、鲜味氨基酸、芳香族氨基酸和甜味氨基酸均高于原菌株J1.姬松茸突变株J3子实体中谷氨酸含量占氨基酸总量的比例分别比原菌株J1、α-酪蛋白和卵清蛋白提高34.88%、56.68%和122.32%.     

Bcl-2 antisense oligodeoxynucleotide increases the sensitivity of HL60 and K562 cells to daunorubicin

AIM:To investigate whether the bcl-2 antisense oligonucleotide increases the sensitivity of HL60 and K562 cell lines to daunorubicin.METHODS:IC50 for HL60 and K562 was determined with MTT method, the expression levels of Bcl-2 protein were assayed by immunofluorescence using fluoresce isothiocyanate labeling. In addition, apoptosis was detected by morphological observation and flow cytometric analysis of DNA fragmentation.RESULTS:It was found that the two oligonucleotides directed against the coding region and the translation initiation of bcl-2 mRNA, combined respectively with daunorubicin, inhibited expression of bcl-2 protein, increased apoptosis in HL60 and K562 cells, and decreased IC50 of daunorubicin significantly (P＜0.05). Compared to the antisense oligonucleotide directed against the translation initiation of bcl-2 mRNA, the antisense oligonucleotide directed against the coding region showed stronger effects in the aspects of increasing the sensitivity of HL60 cells to daunorubicin (P＜0.05).CONCLUSIONS:These two antisense sequences in the translation initiation and the coding region of bcl-2 mRNA increased the sensitivity of HL60 and K562 cell lines to daunorubicin in a sequence-specific manner.     

The mechanism of apoptosis induced by homoharringtonine in HL-60 cells

AIM: To study the signal transduction pathway of apoptosis initiation induced by homoharringtonine in HL-60 cells. METHODS: After establishing the model of apoptosis initiation induced by homoharringtonine in HL-60 cells, at the point of apoptosis initiation, molecular caspase-3, Bcl-2, Bax and Fas/FasL were measured with flow cytometry and transmission electron microscope. ERK2 and P38 expression in HL-60 cells were detected by using immunohistochemistry. RESULTS: The model of apoptosis initiation induced by homoharringtonine was established in HL-60 cells. At the point of apoptosis initiation, upregulation of caspase-3 and decrease in Bcl-2/Bax were observed. However, the expression of Fas/FasL did not significantly change. ERK2 expression decreased and P38 expression increased. CONCLUSIONS: Caspase-3, Bcl-2, Bax and mitogen activated protein kinase pathways were involved in signal transduction of apoptosis initiation induced by homoharringtonine in HL-60 cells.     

黄原胶-N-乙烯基吡咯烷酮辐射接枝共聚物的制备及结构特性研究

为提高黄原胶分子的应用性能,以60Co-γ为辐射源,对黄原胶和N-乙烯基吡咯烷酮进行共辐射接枝处理,制备黄原胶-N-乙烯基吡咯烷酮共聚物(XG-g-NVP),并研究反应条件对接枝率和单体利用率的影响及共聚物的结构表征。结果表明,当辐射吸收剂量为10k Gy,黄原胶浓度12g·L-1,NVP/XG质量比8∶1,4-甲氧基酚阻聚剂添加量为NVP单体质量的0.01%时,最佳接枝率为543.3%,单体利用率为67.9%。红外光谱表明接枝反应发生在NVP乙烯基部位,扫描电镜图显示共聚物形貌由片层状逐步过渡到颗粒状;XG-g-NVP的抗高温及抗剪切能力相比黄原胶有所提高,且黏度值在高温、高剪切力时仍保持恒定值,因此,改性后的黄原胶结构及热稳定性提高。通过对黄原胶分子接枝改性,使其具备了更多优良的性能,为改性黄原胶的进一步应用奠定了理论基础。     

椿树辐射诱变育种初报

以椿树种子为材料,用60Co γ射线进行了0、30、50、75、100、150和200Gy辐照处理,研究辐照对椿树种子发芽及幼苗生长的影响,以期获得耐盐突变体。结果表明：辐照抑制了种子的萌发,成苗率下降,幼苗生长受到抑制,且随着剂量的增加,抑制作用增强;椿树种子的半致死剂量为50Gy,适宜辐照剂量是50~75Gy。辐照后的植株经0.5% 的海盐筛选,共获得9株耐盐能力提高的变异株。     

苏云金芽胞杆菌Bt9875杀虫晶体蛋白可诱导Caspase和Bcl-2家族参与调控HL-60细胞凋亡

研究Caspase家族与Bcl-2家族参与调控苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)Bt9875杀虫晶体蛋白对人急性髓细胞性白血病细胞HL-60的影响.本实验采用MTT法检测了杀虫晶体蛋白诱导HL-60细胞凋亡后的Caspase家族的活性和Caspase凋亡酶抑制剂对杀虫晶体蛋白诱导HL-60细胞凋亡的影响;采用Western blot检测了杀虫晶体蛋白诱导多聚ADP-核糖聚合酶(PARP)降解、Bcl-2/Bax调控和细胞色素C的释放.研究结果表明,杀虫晶体蛋白作用HL-60细胞后,激活了Caspase-3、Caspase-8和Caspase-9,在48 h内Caspase家族抑制剂(Z-VAD-FMK)、Caspase-3抑制剂(z-DEVD-FMK)和Caspase-9抑制剂(Z-LEHD-FMK)均可显著抑制杀虫晶体蛋白诱导的细胞凋亡;杀虫晶体蛋白可明显上调促凋亡蛋白Bax的表达,同时下调抗凋亡蛋白BCl-2的表达,并观察到胞浆中细胞色素C的释放.初步证明了Bt9875杀虫晶体蛋白诱导的HL-60细胞凋亡是由Caspase家族和Bcl-2家族共同调控的,线粒体途径在诱导细胞凋亡过程中起着重要作用.     

天祝白牦牛HSP60基因的克隆及其在下丘脑-垂体-睾丸中的表达定位研究

热休克蛋白60(HSP60)不仅在细胞保护方面发挥作用,也参与雄性动物生殖生理的调控。为研究HSP60基因序列特性及其在天祝白牦牛下丘脑-垂体-睾丸轴(HPT-axis)上的表达情况,探寻其在白牦牛睾丸发育、精子发生过程中的作用机制,本研究采用RT-PCR和RACE技术获得白牦牛HSP60基因全长cDNA序列,采用生物信息学方法分析HSP60蛋白的理化性质、结构及不同物种之间的同源性等,并利用qPCR、Western blotting、免疫组化法分析HSP60在白牦牛下丘脑-垂体-睾丸轴中的表达及定位。结果表明,白牦牛HSP60基因cDNA全长为2 300 bp,开放阅读框为1 722 bp,编码572个氨基酸;其理论分子量为60.977k Da、等电点为5.69,编码的蛋白为非跨膜可溶性蛋白。氨基酸序列比对结果显示,白牦牛HSP60氨基酸序列与牛、瘤牛、绵羊、藏羚羊、骆驼、白犀牛、兔和黑猩猩的氨基酸序列同源性高、进化水平相近。HSP60基因及蛋白在白牦牛的下丘脑、垂体及睾丸组织中均有表达,其中下丘脑及垂体组织表达量显著高于睾丸,下丘脑和垂体之间差异不显著。免疫组化结果显示,HSP60蛋白定位表达于白牦牛下丘脑组织的室旁核大细胞、室旁核小细胞和神经角演网、垂体组织的腺细胞、睾丸组织的精原细胞、精母细胞、支持细胞和间质细胞,而精子细胞中表达较弱。通过对健康成年白牦牛HSP60在下丘脑-垂体-睾丸轴的表达与定位检测,推断HSP60参与雄性白牦牛生殖轴调控,并参与睾丸发育与精子发生。本研究结果为进一步研究HSP60对雄性生殖调控奠定了基础。     

60Co-γ射线诱变小麦品质突变体的筛选及分子标记检测

为了探索小麦品质性状的物理诱变效应,用300Gy的60Co-γ射线辐射小麦品种河科2号的干种子,对M3代234个株系的蛋白质含量、湿面筋含量、沉降值、硬度和产量性状进行变异分析和SSR分子鉴定,以超过均值±2×标准差确定变异株系.结果表明,在M3代群体中,蛋白质含量有13个株系发生正向变异,5个株系发生负向变异;湿面筋含量有8个株系发生正向变异,3个株系发生负向变异;沉降值有6个株系发生正向变异,3个株系发生负向变异;硬度有2个株系发生正向变异,9个株系发生负向变异;产量有5个株系发生正向变异,4个株系发生负向变异.相关分析表明,M3群体蛋白质含量、湿面筋含量、沉降值呈极显著正相关,表现出平行变异的趋势.初步筛选出蛋白质含量和湿面筋含量符合国家强筋小麦标准(蛋白质含量≥15％,湿面筋含量≥35％)的株系8个.经SSR分子标记检测,与控制小麦蛋白质含量的基因存在连锁的2个特异引物Xbarc164和Xgwm161在以上8个变异株系都呈现多态性标记,表明这些株系与蛋白质含量相关的基因可能发生了变异.