鸡白介素18成熟蛋白的发酵工艺及其对新城疫疫苗的免疫增强作用

为探讨重组鸡白介素18（mChIL-18）毕赤酵母工程菌在5L发酵罐中大规模发酵的工艺及其对新城疫疫苗的免疫增强作用,复苏工程菌GS115/pPIC9K-mChIL-18于YPD培养基,在其D600值达到5.2左右时转入发酵罐中,采用分批补料方式对毕赤酵母工程菌进行高密度发酵。控制和优化各种发酵条件,经历84h结束发酵。将发酵液离心,用6×His镍柱对上清中的表达产物进行纯化,并将纯化后的mChIL-18用脂质体包被后和新城疫疫苗一起对鸡群免疫。结果显示,毕赤酵母工程菌在5L发酵罐采用甲醇诱导补料批式发酵,在pH5.5,溶氧值20%～30%,温度28℃,诱导72h,mChIL-18的表达产量为560mg/L,发酵上清经纯化后纯度可达70%以上;用0.2mL的mChIL-18脂质体能够显著增强机体的免疫力,其中HI抗体效价和淋巴细胞亚群CD4＋、CD8＋含量均显著高于对照组。这表明mChIL-18毕赤酵母工程菌在5L发酵罐高密度发酵成功,并能显著增强新城疫疫苗的免疫效果,为IL-18在生产实践得到更好的应用奠定了基础。     

RP-HPLC法测定杜仲增免液中松脂醇二葡萄糖苷的含量

试验旨在建立测定杜仲增免液中松脂醇二葡萄糖苷含量的RP-HPLC法。以Inersustain^® C18（250 mm×4.6 mm,5 μm）为色谱柱,乙腈-0.2%磷酸（15：85）为流动相,流速1.0 mL/min,柱温35℃,紫外检测波长277 nm。以乙酸乙酯作为提取溶剂,在所建立的色谱条件下测定供试品溶液,以理论塔板数和分离度作为系统适用性指标。对对照品松脂醇二葡萄糖苷溶液进行线性回归,确定线性范围,考察分析方法的精密度、稳定性、重现性,并进行加样回收试验。结果显示,用所建立的方法测定供试品溶液中松酯醇二葡萄糖苷理论塔板数为8 588,分离度为3.046。松脂醇二葡萄糖苷对照品溶液在6~192 μg/mL浓度范围内线性关系良好,相关系数为0.9996;精密度试验结果显示松脂醇二葡萄糖苷对照品溶液峰面积相对标准偏差（relative standard deviation,RSD）为0.74%;重现性和稳定性试验结果显示供试品溶液中松酯醇二葡萄糖苷峰面积RSD分别为4.50%和2.69%;平均加样回收率为98.74%,RSD为0.65%（n=9）;在所建立的色谱条件下,供试品中松脂醇二葡萄糖苷的平均含量为0.124~0.127 mg/mL。结果表明,应用该方法测定杜仲增免液中松脂醇二葡萄糖苷的含量,系统适用性好,精密度高,重现性和稳定性好,回收率高,快速简便、准确可靠,可作为杜仲增免液中松脂醇二葡萄糖苷含量测定方法。     

鸡IL-18真核表达载体的构建及其对新城疫疫苗免疫增强作用的研究

利用首次从鸡新城疫疫苗接种的鸡胚脾细胞中扩增出的鸡IL 18 全基因,构建IL 18 真核表达载体(pcDNA3 IL18),并观察其对新城疫疫苗的免疫增强作用。结果表明,同时接种pcDNA3 IL18 质粒和活疫苗的免疫鸡在接种后35 d内,特别是15 d之后所产生的HI抗体效价和T、B淋巴细胞增殖反应均高于单纯疫苗免疫组及pcDNA3 空白质粒和疫苗联合免疫组。其中,HI抗体效价在15 d 时差异显著(P<0 05),在30 和35 d时差异极显著(P<0 01); T淋巴细胞增殖反应在15 d后均表现为差异显著(P<0 05〉或极显著(P<0 01);而单纯疫苗组与空白质粒和疫苗联合免疫组之间的各测定指标则无明显的差异(P>0 05)。在35 d时进行攻毒, pcDNA3 IL18和疫苗联合免疫组的保护率为83.3%,而单纯疫苗免疫组、空白质粒和疫苗联合免疫组鸡的保护率则分别只有61.5%和66.7%。说明该pcDNA3 IL18真核表达质粒在鸡体内得到了表达,表达产物不仅能够显著增强新城疫疫苗所诱导的细胞免疫和体液免疫反应,而且还可以明显提高疫苗的保护率。     

重组鸡IL-18对新城疫疫苗免疫增强作用的研究

将200只1日龄鸡随机分为4组,每组50只鸡,分别为空白对照组,新城疫疫苗组,新城疫疫苗+重组IL-18组,新城疫疫苗+空载体对照组。所有免疫组鸡均于8日龄免疫接种相应疫苗,并分别于免疫后的第3,7,14,21,28天和第35天对各组鸡随即抽取4只,对其血清的抗体效价、外周血的T淋巴细胞转化水平和γ干扰素含量进行测定。免疫18 d后每组鸡随机取20只进行动物攻毒保护试验。结果表明重组鸡IL-18蛋白不仅能够显著增强新城疫疫苗所诱导的细胞免疫和体液免疫反应,而且还可以明显提高疫苗的保护率     

羧甲基葡聚糖注射剂药效学研究

试验旨在研究羧甲基葡聚糖（CMG）注射剂药效,从而为临床动物疾病防制提供试验依据。试验选取小鼠作为试验动物,进行急性毒性试验及体内抗金黄色葡萄球菌、无乳链球菌及大肠杆菌感染试验。另外,采用MTT方法测定了CMG对奶牛淋巴细胞转化率影响,并对CMG注射剂进行了奶牛临床初步应用试验。结果表明,小白鼠对CMG最大耐受量在240 mg/只以上,且在4 mg/只浓度下对金黄色葡萄球菌、无乳链球菌及大肠杆菌感染的保护率分别为60%、62.5%、87.5%;CMG能明显提高奶牛淋巴细胞转化率,临床应用试验组比空白对照组隐性乳腺炎发病率下降26.8%。本试验结果表明,CMG注射液可作为潜在新型兽用免疫增强剂在动物临床应用。     

党参总皂苷纳米乳对小鼠免疫功能的影响

【目的】研究党参总皂苷纳米乳(total saponins of Codonopsis pilosula nanoemulsion,TSCP-NE)对小鼠免疫功能的影响,为TSCP-NE作为免疫增强剂用于保健品或药品提供理论依据。【方法】将小鼠分为空白对照组、模型对照组、空白纳米乳组、TSCP水溶液组、TSCP-NE高中低剂量组,空白对照组和模型对照组小鼠灌胃蒸馏水,空白纳米乳组小鼠灌胃空白纳米乳,TSCP水溶液组灌胃200 mg/kg TSCP,TSCP-NE高中低剂量组分别灌胃200,100,50 mg/kg TSCP-NE,连续灌胃14 d(1次/d),用药量0.01 mL/g。除空白对照组外,其余各组小鼠在给药第1天皮下注射氢化可的松(HY),连续注射7 d,制备免疫抑制小鼠,检测分析免疫抑制小鼠细胞免疫(血清IL-2和IFN-γ含量、ConA诱导脾细胞增殖活性)、体液免疫(血清溶血素水平)和非特异性免疫(NK细胞杀伤活性、单核巨噬细胞吞噬活性)相关指标。【结果】TSCP-NE为透明淡黄色O/W纳米乳,平均粒径为60.67 nm,粒径多分散值为0.347,折光率、pH值、粘度、浊点分别是1.340 6,6.79,4.38×10~(-3)(Pa·s),60.5℃。50～200 mg/kg TSCP-NE能显著提高免疫抑制小鼠血清IL-2和IFN-γ水平、脾T细胞增殖刺激指数、NK细胞杀伤率、血清溶血素半数溶血值(HC_(50))、单核巨噬细胞廓清指数和吞噬指数;TSCP-NE免疫增强作用具有量效依赖性,随着给药剂量增加,免疫增强作用明显增大,且其作用显著强于同剂量TSCP水溶液。【结论】TSCP-NE能增强TSCP对细胞免疫、体液免疫和非特异性免疫的调节功能,可以作为免疫增强剂用于保健品或药品。     

阿魏根粗多糖对鸡脾脏和外周血淋巴细胞体外增殖作用的影响

为研究新疆阿魏多糖（FSP）对鸡外周血T淋巴细胞和脾脏B淋巴细胞增殖作用的影响。本研究用水提醇沉法得到阿魏总多糖（FSP_t）和3种分级多糖（FSP₃₀、FSP₅₀、FSP₇₀）,并通过苯酚-硫酸法和红外光谱对FSP进行检测。通过MTT法测定各级FSP的安全浓度及其对鸡外周血T淋巴细胞及脾脏B淋巴细胞的增殖能力。结果显示,提取的FSP均具有多糖的特征峰,为多糖类化合物。外周血T淋巴细胞增殖试验表明,除FSP₅₀外,所有多糖在一定浓度下均能单独和协同PHA刺激T淋巴细胞增殖,其中FSP_t的增殖作用较强。脾脏B淋巴细胞增殖试验表明,除FSP₅₀外,所有多糖在一定浓度下均能单独和协同LPS刺激B淋巴细胞增殖,其中FSP₇₀和FSP_t增殖作用较强。综上所述,各级FSP中,FSP_t对脾脏B淋巴细胞和外周血T淋巴细胞的增殖作用最强,可以作为进一步研究的材料。     

中药复方提取物对免疫抑制雏鸡IBD疫苗的免疫增强效果

为探索中药复方提取物(由黄芪、女贞子、枸杞子、菟丝子按质量比2∶2∶1∶1制备而成)对免疫抑制雏鸡的免疫增强效果,将180羽3日龄SPF雏鸡随机均分为对照组、模型组、阳性药物组、中药复方提取物高、中、低剂量组,试验组雏鸡连续3 d每天肌肉注射环磷酰胺90 mg/kg,建立鸡免疫抑制模型,对照组注射等量的生理盐水,中药复方提取物高、中、低组每天分别在饮水中添加10.0、5.0、2.5g/L的中药复方提取物,阳性药物组每天添加200 mg/L的黄芪多糖粉,连续添加7 d。试验期38 d。结果显示:饮水中添加10.0、5.0 g/L中药复方提取物,免疫抑制雏鸡末体质量、日均增体质量和脾脏指数均显著高于模型组的(P0.05);添加14 d后,雏鸡血清IgM含量开始高于对照组,并维持在较高水平;21 d后,血清中IgA、IFN–γ和中剂量组的IgG含量显著高于模型组的(P0.05);在接种传染性法氏囊(IBD)疫苗后7 d,雏鸡传染性法氏囊病毒抗体效价提高,接种14 d后,还能维持较高的抗体效价水平,IBD疫苗的免疫效果增强。可见,在本试验条件下,在饮水中添加10.0、5.0 g/L的中药复方提取物能有效提高免疫抑制雏鸡的生长性能,改善其免疫功能,增强IBD疫苗的免疫保护效果。     

鸡IL-18对IBDV多聚蛋白DNA疫苗的免疫增强作用研究

    为进一步评价鸡IL-18的免疫增强作用,用鸡白细胞介素18(IL-18)的真核表达质粒(pCI-IL-18)与传染性法氏囊病病毒(IBDV)多聚蛋白DNA疫苗分别免疫SPF鸡,14日龄时首免,2周后二免,二免后5周用IBDV标准强毒株BC6/85攻击.研究发现,鸡IL-18能显著促进T、B淋巴细胞的增殖反应,增强IBDV多聚蛋白DNA疫苗诱导的中和抗体水平及其对强毒攻击的保护力.结果提示,鸡IL-18(200 μg)对IBDV多聚蛋白DNA疫苗具有显著的免疫增强作用(P＜0.05).     

Determination of Pinoresinol Diglucoside in Eucommie ulmoides Immunoenhancement Liquids by RP-HPLC

The assay was aimed to determine the content of pinoresinol diglucoside (PDG) in Eucommie ulmoides immunoenhancement liquids. The chromatographic conditions were as follows:Inersustain^® C18 column (250 mm×4.6 mm,5 μm) was under column temperature of 35℃, the mobile phase consisted of acetonitrile-0.2% phosphoric acid(15:85)with a flow rate of 1.0 mL/min,and the UV detection wavelength was 277 nm. Ethyl acetate was used as extraction solvent. In order to determine PDG of the test solution under the chromatographic conditions, the number of theoretical plates and resolution were used as system suitability indicators. Linear regression on reference substance (PDG),linearity range and the precision, stability, and reproducibility of the analysis method, the recovery test of adding samples were all determined. The results showed that under the content determination method, the number of theoretical plates of PDG in the test solution was 8 588, and the resolution was 3.046. PDG performed good linear relation at the linear range between 6 and 192 μg/mL, and the related coefficient was 0.9996. The precision experiments showed that the relative standard deviation (RSD) of reference substance solution was 0.74%. The RSD of reproducibility and stability of PDG in the test solution was 4.50% and 2.69%, respectively. The average recovery was 98.74% with RSD 0.65% (n=9). Under the chromatographic conditions established above, the contents of PDG in the test sample were between 0.124 and 0.127 mg/mL. The conclusion was that the RP-HPLC method performed well system suitability, precision, reoroducibility, stability, and high recovery rate. Meanwhile this method was quick, simple and reliable. It could be used to determine the content of PDG in Eucommie ulmoides immunoenhancement liquids.