三叶青突变体的理化成分评价与分子鉴定

为探究三叶青品种泽青1号是否产生药理成分突变,对26份三叶青样本的可溶性多糖、总酮、总皂苷、总酚、蛋白质、矿物质及游离氨基酸进行了理化评价与相关性分析,并检测了其ITS序列的位点突变情况。结果筛选出103、107、109、112、113、125、126、127、130、131、132等优异突变体。泽青1号突变体类群与其23个近缘崖爬藤属种间同源性为49%、平均遗传距离为0.54、组间距离为0.993;泽青1号突变体间同源性为93%~99%、配对距离为0.006 40~0.116 96、组内距离为0.060 70,成功构建了基于ITS种属鉴定的突变体DNA条形码。本研究初步筛选出11个具有多元化定向育种应用价值的突变体,为解决三叶青种质资源稀缺、退化的问题提供了材料基础;同时基于ITS分子标记成功鉴定并区分泽青1号突变体类群与其他近缘崖爬藤属物种,筛选出突变类群的突变位点,为三叶青突变体种质资源评价提供了技术支撑。     

超声波辅助法提取三叶青原花青素工艺的研究

以三叶青块根为原料提取原花青素。通过使用超声波辅助法提取原花青素,以葡萄籽原花青素作为分析标品,利用香草醛-盐酸法绘制原花青素含量标准曲线,并对三叶青原花青素含量进行初步定量分析。单因素提取试验分析结果表明,乙醇体积分数、料液比、浸提时间和浸提温度4因素对三叶青原花青素的提取率影响较大,可作为后续工艺优化的主要控制因素。正交试验分析结果显示了最优提取工艺条件为乙醇体积分数为50%,料液比为1∶20,浸提温度为40℃,浸提时间为20min,此条件下的原花青素提取率可达最高。     

不同光照强度对林下栽培三叶青块根产量及总黄酮含量的影响

[目的]提高林下栽培三叶青单株块根产量和总黄酮含量。[方法]选择光照强度差异较大的5个地块,研究不同光照强度对林下栽培三叶青块根产量和总黄酮含量的影响。[结果]林下栽培三叶青随着光照强度的增强,三叶青单株块根产量明显提高,块根中总黄酮含量随着光照强度的增强而增加。[结论]建议种植地光照强度在2 000 lx以上,三叶青块根产量和总黄酮含量较高。     

独活总香豆素类成分的纯化工艺研究

利用大孔吸附树脂对独活(Heracleum hemsleyanum Diels)中的总香豆素类成分进行纯化。采用静态与动态吸附-解吸相结合的方法,以解吸量及解吸率为主要指标对工艺条件进行优化,确定了最佳纯化工艺条件。结果表明,采用LX-36型大孔吸附树脂纯化效果较好,其最佳工艺条件为上柱药液浓度相当于原药0.1 g/m L,上柱药液p H为2.5~5.5,吸附速率为5 BV/h,上样量相当于树脂量的50%,解吸液乙醇体积分数为95%,解吸速率为1 BV/h,解吸液用量为5 BV,经LX-36型大孔吸附树脂分离纯化后的独活干浸膏中总香豆素的含量由原来的8.42%升高到27.09%。表明LX-36型大孔吸附树脂适于独活总香豆素的初步纯化。     

蛇附子对肉鸡细胞因子及免疫器官发育的影响

为研究蛇附子对肉鸡免疫功能的影响,选用150只7日龄三黄肉鸡,随机分为5组(Ⅰ—Ⅴ组),每组30只鸡。Ⅰ组为对照组,饲喂基础饲粮;Ⅴ组在基础饲粮中添加10 mg/kg的盐酸左旋咪唑;Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组分别在基础饲粮中添加0.5%、1%、2%的蛇附子。分别在给药5 d、10 d、20 d后测定肉鸡血清中细胞因子白介素1(IL-1)、白介素4(IL-4)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、肿瘤坏死因子γ( TNF-γ)含量及免疫器官指数。结果显示,日粮中添加蛇附子可以提高肉鸡血清IL-1、IL-4、TNF-α、TNF-γ的含量和免疫器官指数。其中, IL-1、IL-4以添加1%的蛇附子在给药20 d后提高幅度最大,分别较对照组提高了56.99%( P<0.05)和74.60%( P<0.05)。 TNF-α、TNF-γ以添加2%的蛇附子组提高幅度最大, TNF-γ在给药10 d后较对照组提高了99.50%(P<0.05),TNF-α在给药5 d后提高了60.02%(P<0.05)。脾脏指数、胸腺指数、法氏囊指数以添加1%的蛇附子组提高幅度最大,脾脏指数、胸腺指数在给药20 d 后提高116.67%( P <0.05)、27.27%(P<0.05);法氏囊指数在给药10 d后较对照组提高了60.00%(P<0.05)。可见,蛇附子具有提高肉鸡免疫功能的作用。     

不同产地林下三叶青多糖指纹图谱研究

建立三叶青多糖指纹图谱评价体系,对三叶青进行来源鉴别和质量控制。以不同产地三叶青为材料,用PMP柱前衍生化-HPLC法和化学计量学分析,测定三叶青多糖图谱及其单糖含量和组成比例。建立了不同产地三叶青多糖图谱及其共有模式,并确定了葡萄糖、鼠李糖、阿拉伯糖等8个单糖色谱峰。各批样品之间相似度较高,在0.934~0.997之间。根据主成分因子得分发现遂昌的多糖质量最好,温州的次之。经测定其单糖组成,得到甘露糖、葡萄糖、半乳糖和阿拉伯糖的含量较高,分别为9.094%、11.451%、56.695%和11.030%,其中半乳糖是三叶青多糖的主要组成成分。本研究建立了三叶青多糖指纹图谱并测定出其中单糖组成及其含量,该方法稳定可靠,可用于三叶青的来源鉴别和质量控制。     

立体栽培模式对三叶青植株生长的影响

[目的]研究立体栽培对三叶青植株生长的影响。[方法]针对三叶青大田平作栽培生长后期茎蔓匍匐在地、重叠郁蔽严重,导致位于下层的茎叶提前衰败死亡而严重影响生长的问题,借鉴立体农业的栽培技术原理,设计立体、平作等栽培模式试验,研究采用立体栽培技术对三叶青的生长效应。[结果]采用立体限根栽培技术能有效改善三叶青田间通风、透气、透光条件,显著提高植株抗病性,降低根腐病发病率,减少死苗率,提高三叶青地下块根产量和品质。[结论]立体限根栽培对降低三叶青病害、提高植株生长、提高单株产量具有很好的促进效果。     

广西濒危珍稀中药材三叶青资源调查研究

采用实地调查和走访调查相结合的方法,对广西的三叶青资源状况进行调查.结果表明:三叶青主要分布于广西的桂北与桂西海拔较高的山谷、灌丛、林间等荫凉的地方;其群落结构由乔木、灌木、草本组成,有50多种伴生植物;由于生态的破坏和不合理的采挖,目前广西资源储量约为24 441.20 kg,分布面积和储量迅速减少,市场需求持续强劲.建议应重视和加强三叶青野生资源保护,进行人工种植,保证三叶青资源的可持续利用.     

三叶青种质资源遗传多样性的随机扩增多态性DNA分析

利用RAPD技术对64个三叶青种质资源样本进行遗传多样性分析,从40对引物中筛选出10对引物进行批量PCR实验。结果表明:64个三叶青样本的观测等位基因数(Na)为1.666 7~2.000 0,有效等位基因数(Ne)为1.247 9~1.701 3,Nei's基因多样性指数为0.167 0~0.398 4,Shannon多样性指数(I)为0.262 8~0.583 0,平均多态位点为7.5,平均多态百分数为93.145%;在遗传相似系数0.720 56处,可以将64个三叶青样本分成11大类;在遗传相似系数0.697 04处,则可将64个三叶青样本分成4大类;聚类分析的结果与种源的地理距离存在不一致性,这可能与种质资源库的地形、气候等自然因素有关。表明所测三叶青种质资源遗传多样性丰富,具有一定的开发利用价值,可为合理保护三叶青的基因资源及其遗传改良提供科学依据。     

三叶青高效快繁技术体系的建立

[目的]研究三叶青快繁技术.[方法]以药用植物三叶青组培苗的节部为外植体,研究了植物生长调节剂对三叶青增殖和生根的影响.[结果]在含有6-BA 0.5 mg/L+ NAA 0.1 mg/L的MS培养基中,三叶青增殖倍数最大;而三叶青的最佳生根培养基为MS+IBA 0.5 mg/L.生根的三叶青经过驯化后移栽到含有蛭石、草炭、珍珠岩(3:6:1)的混合基质中,一个月后成长为健康植株.[结论]该研究建立的三叶青高效快繁体系,为解决三叶青的人工栽培所需种苗提供了技术支撑.