猪瘟病毒石门株动物传代脾毒与组织培养细胞毒E2基因序列的分析

根据已发表的猪瘟病毒基因组序列,设计合成了2对引物,以脾毒和细胞毒总RNA为模板,利用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)、套式聚合酶链式反应(nPCR)及测序技术,对多次动物传代和致细胞病变的猪瘟病毒主要囊膜糖蛋白E2基因的核苷酸序列进行了测定,用DNAstar软件比较分析了E2基因的核苷酸和氨基酸序列的同源性。结果发现,脾毒和标准石门株核苷酸序列的同源性为99.4%,氨基酸序列的同源性为99.0%;细胞毒与标准石门株核苷酸序列的同源性为98.3%,氨基酸序列的同源性为96.7%。由此说明,猪瘟病毒经猪体多次传代和组织培养致细胞病变后,均能保持遗传的稳定性。     

不同生物型BVDV感染宿主细胞后差异基因分析

为深入研究牛场中普遍存在的持续性感染,探讨不同生物型牛病毒性腹泻病毒（bovine viral diarrhea virus,BVDV）转化的分子机制,本试验将致细胞病变型BVDV （CP型BVDV）和非致细胞病变型BVDV （NCP型BVDV）感染MDBK细胞,观察细胞变化,感染后12~72 h期间每间隔12 h收集1次细胞,同时对24、48 h收集的细胞进行转录组学分析。结果显示,不同生物型BVDV感染宿主细胞24 h后,与感染NCP型BVDV的细胞相比,感染CP型BVDV的MDBK细胞中上调差异表达的基因2 849个,下调差异表达的基因3 347个,48 h后,上调差异表达的基因2 933个,下调差异表达的基因2 831个。对差异基因的GO功能分析结果表明,差异基因参与的分子功能主要有催化活性、结合活性、酶调节活性、分子转导活性和蛋白结合转录因子活性等;Pathway显著性富集分析结果显示,差异表达基因主要参与细胞自噬、细胞凋亡、免疫调节因子等相关的信号通路。本试验结果可为进一步揭示病毒致病的分子机制、控制BVDV和研制其候选疫苗奠定基础。     

多次传代和致细胞病变猪瘟病毒石门株E2基因序列分析

根据已发表的猪瘟病毒基因组序列，设计合成了2对引物，以脾毒和细胞毒总RNA为模板，利用反转录聚合酶链式反应（RT—PCR）、套式聚合酶链式反应（nPCR）及测序技术，对多次动物传代和致细胞病变的猪瘟病毒的主要外膜糖蛋白E2基因的核苷酸序列进行了测定，用DNA star软件比较分析了E2基因的核苷酸和氨基酸序列的同源性。结果发现，脾毒和标准石门株的核苷酸序列同源性为99．4％，氨基酸序列同源性为99．0％，细胞毒标准石门株的核苷酸序列同源性为98．3％，氨基酸同源性96．7％。由此说明猪瘟病毒经猪多次传代和致细胞病变后均保持遗传的稳定性。     

水泡性口炎病毒感染BHK-21细胞的超微结构改变

应用起薄切片技术对水泡性口炎病毒（VSV）在BHK-21细胞上的形态发生和早期发育进行了观察。结果表明，VSV能导致BHK-21细胞圆缩．胞浆严重空泡化，线粒体嵴断裂及空泡化；病毒在细胞浆内复制．增殖．在细胞膜上以出芽方式获得囊膜而成热。     

3种禽类呼肠孤病毒血清学相关性及致细胞病变差异分析

本研究旨在研究3种不同疾病型禽类呼肠孤病毒间的抗原性关系及病毒的培养特性。作者通过血清中和试验测定了禽呼肠孤病毒(ARV S1133株)、番鸭呼肠孤病毒(MDRV 9710株)、新型鸭呼肠孤病毒(NDRV NP01株)3种禽类呼肠孤病毒的血清学相关性,统计抗原相关性R值;并应用部分禽胚原代细胞及哺乳动物传代细胞对这3种病毒的培养特性进行了初步研究。结果表明,3种病毒株之间的R值很小,抗原相关性较低;三者具有广泛的细胞亲嗜性,能在多种细胞中增殖,并产生细胞病变,但病毒致细胞病变特征有所差异,ARV和NDRV均以巨融合为主,而MDRV则以细胞圆缩坏死为主。上述结果表明导致禽类不同疾病的ARV、MDRV和NDRV三者之间的抗原相关性较低,病毒的细胞培养特性也不同,细胞病变类型的差别提供了一种初步鉴别禽类呼肠孤病毒的方法。     

3种藏药复方抗ORFV作用研究

将岩青、轮叶棘豆等3种藏药材按一定比例配成复方,采用乙醇提取法进行提取,将浓缩药液用细胞维持液配制成1g／L的药液,并根据对兔肾细睁（PRK）安全浓度的测定结果,稀释成不同梯度浓度,分别与脓疱皮炎病毒（ORFV）加入到已培养24h的单层PRK中,通过M1TI’法测定OD值,分析其对ORFV病毒增殖的影响。经回归分析,复方药液在7．81—62·5mg／mL浓度范围内,药物浓度与活细胞存在线性关系,对病毒增势有显著的抑制作用（P〈0·05）。表明藏药材复方药液具有抗脓疱皮炎病毒感染的作用。     

我国1株鹦鹉幼稚病毒的细胞培养特性

为进一步研究鹦鹉幼稚病病毒（ＢＦＤＶ）的分子生物学特性奠定基础,对ＢＦＤＶ湖北分离株进行了２种原代细胞的适应性培养。首先在鹦鹉胚成纤维细胞盲传至第５代后再过渡到鸡胚成纤维细胞培养,建立了ＢＦＤＶ的适应细胞培养体系。观察了３种不同温度对细胞病变（ＣＰＥ）的影响,结果表明,ＢＦＤＶ在３８．５℃培养４８～９６ｈ可产生明显的ＣＰＥ。再将该培养液做免疫扩散试验结果出现明显的免疫复合物沉淀线,抗体中和试验显示     

一株牦牛源牛病毒性腹泻病毒毒株的分离鉴定及其遗传特性分析

通过病毒分离培养技术,从牦牛血清中分离获得一株致细胞病变的牛病毒性腹泻病毒(BVDV),命名为GSTZ毒株。经电镜观察,GSTZ毒株的直径在50～60 nm。按Karber法测算,该病毒滴度为5.0×10^6.5 mL^-1[以组织半数感染量(TCID₅₀)计]。利用反转录PCR(RT-PCR)测定GSTZ毒株的完整开放阅读框(ORF),全长11 691 nt,将其与参考毒株ORF在核酸序列和同义密码子使用模式等方面进行分析,确定GSTZ毒株在遗传学特性上属于基因1型家族成员。在GSTZ毒株的完整ORF中,A+U的出现频率要高于G+C,而且,病毒同义密码子的使用模式体现出对U/A结尾同义密码子使用偏嗜性高的遗传学特征。GSTZ毒株明显降低了使用含有CpG二联核苷酸的同义密码子的频率。这有助于降低病毒对宿主细胞免疫系统的刺激强度,从而促进病毒的复制增殖。研究成果可为进一步研究BVDV的相关分子机制提供试验材料,并为BVDV不同基因型的抗原关系分析与BVDV疫苗的研制奠定基础。     

猪肺炎霉形体及其膜致细胞病变的研究

采用培养的兔肾原代单层细胞，接种猪肺炎霉形体及其膜部分，观察其致细胞病变情况，当霉形体接种量为５～１５μｇ／ｍｌ菌体蛋白时，无细胞病变作用，而接种量为２０～３０μｇ／ｍｌ菌体蛋白时，均有致细胞病变作用；当霉形体膜接种量为５～２５μｇ／ｍｌ膜蛋白时，无细胞病变作用，接种量达３０～５０μｇ／ｍｌ膜蛋白时，均可使细胞病变。随着接种量的加大和作用时间的延长，致细胞病变的程度增强。