膜联蛋白B1在猪囊尾蚴免疫逃避作用的研究进展

膜联蛋白是一类有效的内源性调节蛋白,在Ca²⁺存在的条件下与膜磷脂结合,参与细胞活动的多种功能,其与肿瘤发生、自身免疫性疾病、病毒和寄生虫感染等密切相关。作为膜联蛋白家族成员Annexin B1具有独特的氨基酸残基结构,与不同种属的寄生虫入侵特异性宿主密切相关。本文主要阐述了膜联蛋白的种类及膜联蛋白B1在猪囊尾蚴感染宿主机体过程中免疫逃避的作用,旨在探索其猪囊尾蚴感染的免疫逃避机制。深入对膜联蛋白B1和囊尾蚴之间相互关系的进一步了解,以及膜联蛋白B1在寄生虫免疫中更深入的研究,对寄生虫免疫逃避的生物学意义和寄生虫病诊断治疗提供了相关的策略。     

未成熟与成熟猪囊尾蚴蛋白双向电泳的图谱分析

为从蛋白质水平揭示猪带绦虫入侵中间宿主家猪的免疫逃避机制,应用双向电泳技术分析未成熟与成熟猪囊尾蚴蛋白质表达差异,进行双向电泳图像软件分析.结果表明:未成熟猪囊尾蚴与成熟猪囊尾蚴蛋白的双向电泳凝胶上分别有(217±13)个、(241±17)个蛋白斑点,未成熟猪囊尾蚴表达上调2倍以上的蛋白有6个,下调2倍以上的蛋白有2个...     

双向电泳结合蛋白质印迹技术分析猪囊尾蚴乳酸脱氢酶

为了研究猪囊尾蚴乳酸脱氢酶(LDH)的表达,试验选择四川省雅江县呷拉乡猪带绦虫病患者,给其口服槟榔-南瓜子驱虫,收集、制备虫卵悬液(8万个/mL),再给3头20日龄三元杂交乳猪猪灌胃虫卵悬液,每头1 mL,40 d后收集、制备猪囊尾蚴蛋白,进行双向电泳(2-DE)分析,将凝胶蛋白斑点转移至聚偏氟乙烯膜(PVDF膜),用自制的大鼠抗猪带绦虫LDH血清作为一抗、健康大鼠血清作为阴性对照进行蛋白质印迹(Western-blotting)分析。结果表明:双向电泳凝胶共检测到(207±9)个蛋白质斑点,相对分子质量(Mr)为14 400～94 000,等电点(pI)为3.0～10.0;试验组特异性抗原抗体阳性杂交斑点为1个,阴性对照未见阳性杂交斑点;将Western-blotting检测的抗原抗体阳性杂交斑点与原双向电泳凝胶斑点进行比对,找到对应蛋白斑点,经ImageMaster 2D Platinum 5.0软件分析后初步确定该蛋白斑点的pI/Mr为7.03/35 368,与猪带绦虫LDH的pI/Mr理论推导值接近,说明猪囊尾蚴表达LDH。     

猪带绦虫不同发育阶段的cDNA合成及含量测定

本文以猪带绦虫成熟虫卵、孵化激活的六钩蚴以及人工感染的囊尾蚴为原始材料，采用Promega试剂盒法分别分离提取总RNA和mRNA，反转录合成cDNA，并用a-^32P CTP掺入法放射测定其含量。实验表明：合成的猪带绦虫虫卵、六钩蚴和囊尾蚴的cDNA含量高，均可达2500ng，片段大小在300bp以上，可满足构建不同发育阶段cDNA基因文库的需要。     

肉兔常见寄生虫病的防治

寄生虫有着复杂的生活史,与之相对应的兔寄生虫病更是种类繁多,对此类疾病处理不当会造成严重的损失。文章综述了生产中兔寄生虫病的常见类型及各种病症的流行特点、临床症状,并结合实际经验对其提出了预防及治疗措施。     

猪囊尾蚴dUTPase基因的克隆、表达及其产物的酶学活性分析

【目的】克隆、表达猪囊尾蚴dUTPase基因并分析其酶学活性。【方法】通过RT-PCR的方法克隆猪囊尾蚴dUTPase基因,将其与pET载体连接并在原核系统中高效表达;表达产物经Ni柱纯化后进行酶学活性测定。【结果】序列分析表明猪囊尾蚴dUTPase基因与六钩蚴的dUTPase基因核苷酸同源性为100%,而且其氨基酸序列中同样存在5个保守基序。SDS-PAGE显示在21kD附近出现与目的蛋白大小相符的特异条带,表达产物经纯化后dUTPase的含量为2.863mg·mL-1。酶学活性试验证实重组dUTPase能特异性降解dUTP,同时EDTA可以抑制dUTPase的活性;而Mg2+可以增强猪囊尾蚴dUTPase的活性。【结论】成功克隆表达了猪囊尾蚴dUTPase基因并鉴定了它的酶学活性,为进一步研究dUTPase在猪囊尾蚴中的生物学功能奠定了基础,同时也为抗猪囊尾蚴病的药物设计和开发提供了研究基础。     

酶标葡萄球菌A蛋白染色法用于猪囊尾蚴病诊断的初步研究

用自制的猪囊尾蚴头节“颗粒性抗原”,以HRP—SPA作为第二抗体,进行间接免疫酶染色诊断猪囊尾蚴病。检测61份猪囊尾蚴病血清,阳性59份,检出率为96.6％;健康猪血清69份、细颈囊尾蚴病和肺丝虫病猪血清各10份,均为阴性。此法简便易行,快速、准确,适于基层使用。     

从江及都匀地区牛带绦虫试验感染猪牛后从囊尾蚴寄生部位鉴别虫种

目的 观察从江及都匀牛带绦虫感染牛、猪的寄生部位分布及其形态鉴别虫种。方法 取贵州从江县及都匀市牛带绦虫病人虫体的3节孕节(约30000～40000虫卵)直接喂养14日龄约克种乳猪2头和17日龄荷兰乳牛犊2头，于62日龄、67日龄剖杀，观察囊尾蚴分布、形态、测量大小．观察成熟情况。结果 都匀牛带绦虫试验感染猪、牛，其囊尾蚴寄生在肝脏。从江牛带绦虫试验感染牛，其囊尾蚴寄生在全身肌肉，感染猪则仅寄生在肝脏。从江及都匀牛带绦虫感染猪牛后，两者囊尾蚴寄生部位不同。都匀牛带绦虫感染的猪囊尾蚴原头节有两圈类似小钩的点状结构，而从江牛带绦虫感染猪后原头节无小钩。结论 根据从江及都匀牛带绦虫感染牛、猪后囊尾蚴的寄生部位及其原头节小钩的差异，可以证实都匀牛带绦虫是亚洲牛带绦虫。     

猪带绦虫囊尾蚴病特异性抗原筛选的研究进展

旨在为猪带绦虫囊尾蚴病免疫诊断方法和有效防治措施的建立奠定理论基础。阐述了猪带绦虫囊尾蚴病流行与危害及诊断和防控中存在的问题,回顾了利用cDNA文库筛选、噬菌体展示文库筛选、噬菌体肽库筛选技术和双向电泳免疫印迹筛选等几种技术对猪带绦虫囊尾蚴病特异性抗原的筛选,并将筛选到的特异性抗原进行简要介绍,分别阐明各抗原组分在该病诊断、预防和致病机理中作用及可能潜在的价值。通过猪带绦虫囊尾蚴病特异性抗原筛选说明,开展该病大规模、无渗漏抗原筛选研究,是解决虫体感染过程中不同发育时期免疫诊断、疫苗研制问题的关键。其研究重要性不但对该病本身的诊断和防控具有重要的意义,同时也为寄生虫病的诊断和防控提供新的思路。     

猪囊尾蚴西昌分离株线粒体cox1和nad1基因的序列测定与种系发育分析

应用PCR技术对3个猪囊尾蚴西昌分离株的线粒体细胞色素C氧化酶第Ⅰ亚基(cox1)基因全序列和烟酰胺腺嘌呤二核苷酸还原酶第一亚基(nad1)基因部分序列进行扩增,分析其遗传变异,并用Mega 5.0程序NJ法绘制种系发育树,探讨不同地区来源的猪囊尾蚴种系发育关系。测序结果显示,猪囊尾蚴的cox1基因全序列长度为1 620bp,nad1基因部分序列长度为796bp。cox1和nad1基因序列均存在一定的遗传变异,且cox1基因序列的变异高于nad1序列。种系发育分析结果显示,所有猪囊尾蚴分离株构成一个分支,3个西昌分离株均属于猪带绦虫亚洲基因型。结果表明,cox1和nad1基因均可用于猪带绦虫的分子分类,为猪带绦虫病/猪囊尾蚴病的分子诊断奠定了基础。