昆明鼠卵母细胞的孤雌发育及对其干扰核移植试验的预防措施

本文着重研究了在昆明鼠细胞核移植过程中，卵母细胞孤雌发育的激活原因、形成过程，并提出了一些防止其干扰细胞核移植的措施。     

6株牛传染性鼻气管炎病毒BICP4基因序列的同源性分析

牛传染性鼻气管炎病毒的立即早期启动基因IER4.2编码感染细胞蛋白BICP4基因。各种疱疹病毒的BICP4基因的Ⅰ，Ⅲ，Ⅴ区变异性较大，并为其特征区。为了比较分离自不同牛种，不同部位的5种病毒株BICP4蛋白I区基因的差异性，本文根据已发表的IBBV K22毒株重复序列IRs中BICP4的基因序列设计了一特异性引物，对各毒株进行PCR扩增，均得到约540bp的片段，将其克隆，测序并连同K22株进行同源性比较。结果表明，6株病毒的核苷酸序列及氨基酸序列同源性均在98%以上，说明这些毒株重复序列中的早期基因高度保守，在一定程度上也显示出IBRV的高度保守性。     

单克隆抗体ELISA检测犊牛粪便中冠状病毒抗原

用两株单克隆抗体混合后包被ＥＬＬＩＳＡ微孔板，加牛冠状病毒抗原，加经白陶土处理过的兔抗牛冠状病毒免血清，再加上辣根氧化物酶标记的羊抗兔ＩｇＧ抗体，加底物质显色间接ＥＬＩＳＡ检测牛冠状病毒抗原获得成功。用此方法检测细胞培养的牛冠状病毒上清液，其敏感度高出血凝试验（ＨＡ）８倍，从武汉市附近３个奶牛场采集犊牛腹泻粪便１０５份，用单抗ＥＬＩＳＡ检测牛冠状病毒抗原，共检出阳性３６份，并与血凝及血凝抑制试验，     

切割取样对胚胎发育的影响

体视显微镜下,采用徒手持金属刀片和自制的玻璃切割针分别对小鼠和牛胚胎进行切割取样,并对取样后的胚胎进行体外培养48h,其发育率分别为76.7%(46/60)和80%(16/20),两者差异不显著(P>0.05);奶牛新鲜胚胎切割取样后,胚胎移植妊娠率47.1%(8/17),比对照组妊娠率59.0%(23/39)差异显著(P<0.05)。冷冻-解冻胚胎切割取样后移植妊娠率42.9%(6/17)虽然也比对照组50%低,但是差异不显著(P>0.05)。     

不同浓度CO2对牛卵母细胞体外成熟和受精的影响

对牛卵巢卵泡内卵母细胞在不同浓度的CO2培养箱内体外成熟、体外受精后的卵裂率及胚胎体外发育进行了研究。结果显示,含5%小牛血清(CS)的TCM-199内的卵母细胞在2%CO2条件下培养20h后,达到第二次减数分裂期(MⅡ期)的卵子数明显高于在5%CO2条件下培养的卵母细胞数(P<0.05)。两种浓度的CO2条件下培养的牛卵母细胞体外受精后的卵裂率无明显差异,2%CO2浓度下培养的卵母细胞的囊胚发育率高于5%CO2浓度下培养的卵母细胞。     

Nuclear transfer in loach (Paramisgurnus dabryanus Sauvage) by cell-to-cell electrofusion

To study nuclear transfer in the loach (Paramisgurnus dabryanus Sauvage), blastula and gastrula cells were fused with UV-inactivated oocytes by cell-to-cell electrofusion. To facilitate nuclear transfer, blastula and gastrula cells were cultured or incubated at 4 °C in different solutions. TC-199 medium supplemented with 20% calf serum was the best culture solution, and effectively retained the totipotence of blastula or gastrula cells for up to 10 days. It was found that gastrula cells incubated at 4 °C had the same totipotence as blastula cells. The optimal UV dosage for inactivation of the oocyte chromatin was 180–240 mJ cm⁻². Electrofusion was carried out in a cone-shaped fusion chamber, which permitted the recipient oocyte and the donor blastula cell to contact one another. The electrofusion procedure resulted in a 10% success rate of normal-appearing fish. Genetic analysis indicated that the nuclear material originated from the donor cell (blastomere) and the oocyte pronucleus did not take part in development.     

Cumulus Oophorus Expansion of Bovine Oocytes Cultured in vitro: A SEM and TEM Study

Bovine cumulus-oocyte complexes (COCs) were aspirated from antral follicles (3–6 mm in diameter). COCs with a compact multilayered cumulus investment were cultured for 9, 13 and 24 hours, respectively, and processed for scanning or transmission electron microscopy after different periods of culture including a 0 hour control group. In all 0 hour control COCs initial formation of cumulus cell projections, blebs and microvilli were observed. The start of cumulus-oocyte disconnection in cattle was observed after 9 hours of in vitro culture. These connections were almost completely discrupted after 13 hours, when a continuous production of extracellular matrix was observed. The full expansion of corona radiata cells was not observed even after 24 hours. Some cumulus oophorus cells were bound together with junctions of the zonula adherens type after 24 hours when extracellular matrix was found only in deeper layers. The full expansion of corona radiata cells was not the prerequisite for disconnection of cumulus-oocyte complex. Inhalt: Kumulus oophorus Expansion von in vitro kultivierten Rinderoozyten: Eine SEM und TEM Untersuchung Kumulus-Oozyten-Komplexe (COC) von Rindern wurden aus antralen Follikeln aspiriert (Durchmesser 3–6 mm). COC's mit kompakten mehrschichtigen Kumulus wurden für 9, 13 und 24 Stunden kultiviert und für die Scanner- oder Transmissionselektronenmikroskopie vorbereitet. Verschiedene Kulturzeiten incl. einer 0-Stundengruppe als Kontrolle wurden untersucht. In allen Kontroll COC's wurden beginnende Formationen yon Kumuluszellprojektionen, Bläschen und Mikrovilli beobachtet. Nach 9-stündiger in vitro Kultur begann die Lösung zwischen Kumulus und Oozyte. Die Verbindungen waren nach 13 Stunden vollständig unterbrochen, wobei eine kontinuierliche Produktion extrazellulärer Matrix beobachtet wurde. Eine vollständige Expansion der Corona radiata Zellen wurde auch nicht nach 24 Stunden beobachtet. Nach 24 Stunden waren einige Cumulus Oophorus Zellen über Verbindungen des Zonula adherens Typs verknüpft, wobei extrazelluläre Matrix nur in den tieferen Zellschichten gefunden wurde. Eine vollständige Kumulusexpansion ist keine Voraussetzung für die Auflösung des Kumulus-Oozyten-Komplexes.     

牛腔前卵泡的简易机械分离方法

采用两种机械法分离牛腔前卵泡。方法一 (M -1) ,皮肤移植刀切割、剪碎、过滤镜下直接捡卵法。方法二 (M -2 ) ,皮质片剪碎、离心、悬浮、过滤镜下捡卵法。M -1平均每卵巢采卵数为 46 9个± 18 2个 ,M -2为 6 8 4个± 12 5个 ;处理时间M -1为 2 5 4min± 6 7min ,M -2为 46 3min± 16 8min ,两种方法采集腔前卵泡数量及处理时间均存在显著差异。平均每小时采集卵泡数分别为 99 5和 87 2个 ,M -1多于M -2。两种方法获得腔前卵泡大小分布规律也有明显差异 ,M -1采集腔前卵泡直径为 6 0～ 15 0 μm ,绝大部分是次级卵泡 ,而M -2获取腔前卵泡则偏小。总的看来 ,M -1处理时间短 ,回收效率高 ,方法简便 ,且分离卵泡直径较大 ,适于体外培养 ,是机械分离牛腔前卵泡的一种理想方法。     

昆明鼠卵母细胞的去核及其去核率的观察

本文研究昆明鼠卵母细胞的去核方法，并通过对去核卵母细胞的固定染色，显示其中期Ⅱ染色体，由此观察统计其确定的去核率。