导入AGPase基因的转基因可育水稻及其经济性状的研究

以农杆菌介导法将淀粉合成关键酶AGPase(腺嘌呤二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶）基因导入云南地方优质水稻合系35，38，39，41，42中，获得了大量的可育转基因植株。PCR扩增检测，外源基因已稳定整合进水稻基因组中。大量的农艺性状及淀粉含量研究表明，转基因水稻种子的千粒重比对照明显提高，但总淀粉含量没有显著变化。     

中国葡萄野生种对葡萄根癌病的抗性

通过田间接种鉴定，系统研究了中国葡萄属１３个种和变种的２６个株系对葡萄根癌病的抗性，筛选出高抗株系１０个。其中燕山葡萄（♀）因扦插容易生根，可用自根苗作为抗葡萄根癌病砧木进行嫁接试验，其余可用作抗葡萄根癌病的育种资源     

桃树根癌病防治技术探讨

桃树根癌病是公认最难防治的土传细菌病害之一。在对该病进行较系统研究的基础上,采用多种抗菌药剂、多种方法进行了室内、外药敏测定与防治试验,显示出异菌氰、次氯酸钠、乙蒜素、妥布霉素、环丙沙星、庆大霉素及其混用对防治桃树根癌病菌有明显防效。     

农杆菌介导的马铃薯茎段遗传转化体系优化研究

以甘肃主栽品种的茎段为外植体,研究了不同转化条件(菌液浓度、感染时间、预培养及共培养时间)对转化效率的影响,以及选择压和培养基对抗性出芽的影响,初步建立了马铃薯品种“陇薯3号”和“台湾红皮”的遗传转化体系并获得了转化植株。卡那霉素生根筛选和PCR鉴定结果表明,再生的转化植株假阳性率比较高,要获得预期的转基因植株群体需加大遗传转化工作中转基因植株的数量。     

农杆菌侵染小麦的优化方案

本实验选用优质高产小麦品种洛阳8716和绵阳19幼胚愈伤作为受体材料,以pCAMBIA3301为载体,GV3101,EHA105,LBA4404农杆菌为供体材料进行侵染过程的优化研究.采用3种菌株,4个浓度梯度:OD600=0.2,0.5,0.7,1.0;3个时间参数:10 min,30 min,60 min;一共36个处理,每个处理4个重复.结果显示,农杆菌GV3101和EHA105,OD600 1.0×10 min和OD600 0.5×30 min两个侵染处理结果比较好,瞬时表达率达到50%-70%.以小麦幼胚愈伤组织为受体,预培养3～5 d,在24±1℃下,共培养3～4 d和350 mg/L羧苄青霉素除菌及5 mg/L PPT筛选处理后,转化效果较好,平均转化率为0.45%.     

毛白杨85号高效遗传转化系统的建立

在建立以毛白杨85号( Populus tomentosa 85)叶片为外植体的再生系统基础上,从预培养时间、浸染菌液浓度、浸染时间、共培养时间及添加AS(乙酰丁香酮)5个方面,以卡那霉素抗性植株作为转化率的衡量指标,研究了各因素对毛白杨85号遗传转化率的影响,建立了高效的遗传转化系统。筛选的高效转化系统为：农杆菌活化菌液用MS液体培养基稀释10倍,浸染5min,共培养4d。毛白杨85号叶盘转化率可达40.0%。该研究为利用叶盘法开展毛白杨85号基因转化培育抗逆新品种奠定了良好基础。     

豇豆胰蛋白酶抑制剂转基因棉花的获得

利用根癌农杆菌（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｓ）介导法将豇豆胰蛋白酶抑制剂（Ｃｏｗ－ｐｅａＴｒｙｐｓｉｎＩｎｈｉｂｉｔｏｒ,ＣｐＴＩ）基因转移进入棉花（ＧｏｓｙｐｉｕｍｈｉｒｓｕｔｕｍＬ．）。棉花幼苗的下胚轴与携带有ＣｐＴＩ基因和Ｎｐｔ－Ⅱ基因的根癌农杆菌共培养,在选择培养基上诱导出了卡那霉素抗性（Ｋｍｒ）愈伤组织。选择Ｎｐｔ－Ⅱ阳性的胚性愈伤组织在胚状体诱导培养基上进行胚状体诱导,继而在分化培养基上进行植株分化,最终获得了再生棉花植株。经Ｎｐｔ－Ⅱ分析、ＰＣＲ及Ｓｏｕｔｈｅｒｎ检测证明,外源ＣｐＴＩ基因和标记基因（Ｎｐｔ－Ⅱ基因）存在于转化棉株及其后代中。抗棉铃虫（Ｈｅｌｉｏｔｈｉｓａｒｍｉｇｅｒａ）生物活性检测表明转基因植株后代具有明显的抗棉铃虫能力。     

草莓果实外源基因瞬时表达系统的建立

将东北红豆杉紫杉烷13α-羟基化酶(Taxane13α-hydroxylase,13OH)基因全长cDNA正向插入到pCAMBI-A1304,构建其植物表达载体pCT13OH;将水稻小RNA169d(microRNA169d,miRNA169d)基因前体(precursor)全长DNA正向插入到pCAMBIA1305.1,构建其植物表达载体pCO169d。用电击法把它们导入根癌农杆菌GV3101,获得有关工程菌株。用1mL无菌注射器分别将这2种工程农杆菌悬浮液注射到草莓(Fragaria×ananassa)授粉后1周、2周、3周的果实中,发现授粉后2周果实适宜注射,可用于瞬时表达。对授粉后2周的果实进行不同注射部位、根癌农杆菌不同活化时期和根癌农杆菌悬浮液不同注射量试验,以蒂部注射、根癌农杆菌活化12h和0.5mL悬浮液注射量的效果最好,与结构基因13OH和调节基因miRNA169d相融合的GUS基因都得到表达,瞬时表达成功。     

根癌农杆菌介导豇豆胰蛋白酶抑制剂基因转入苹果主栽品种

研究建立起一套简单、高效的苹果遗传转化系统。利用根癌农杆菌介导的叶圆片转化法将高效启动的豇豆胰蛋白抑制剂基因（ＣｐＴｌ）转入富士、齐纳金、王林、嘎拉等苹果主栽品种中,经卡那霉素抗性、ＰＣＲ、点杂交、Ｓｏｕｔｈｅｍ杂交检测证明了４个品种均获得转化再生植株,现已移栽成活。