Regulation of MMP-2 and TIMP-3 expression by uPA signal transduction system in human bone giant cell tumor

AIM: To study effects of urokinase-type plasminogen activator (uPA) signal transduction on expression of matrix metalloproteinase-2 (MMP-2) and tissue inhibitor of matrix metalloproteinase-3 (TIMP-3) in giant cell tumor of bone (GCT). METHODS: Expression of uPAR, MMP-2 and TIMP-3 in GCT tissue was detected by immunohistochemistry. Phosphorylation level of mitogen-activated protein kinase (p44) in uPA/uPAR signal pathway in cultured GCT cells was detected by immunoprecipitation. The expression of MMP-2 and TIMP-3 in cultured cells after treatment with uPA-ATF or anti-uPAR antibody was also detected by Western blotting. RESULTS: 1) Urokinase-type plasminogen activator receptor (uPAR) was positive on the cell membrane and in cytoplasm of some mononuclear stromal cells (MSCs) and multinucleated giant cells (MGCs); 2) MMP-2 was positive in the cytoplasm and on the cell membrane of almost all of MSCs and some of MGCs. The polar distribution of MMP-2 in the cytoplasm of MGCs was especially obvious; 3) The expression of TIMP-3 of some MSCs and MGCs in GCT was much lower than MMP-2. The positive signal also showed a prominent polarity; 4) After treatment with uPA-ATF, the phosphorylation level of p44 in GCT cultured cells was much higher than the control. Addition of anti-uPAR antibody in the cells remarkably down-regulated the phosphorylation level of p44 as compared with the control group, suggesting that uPA-ATF participates cell signal transduction and this reaction can be inhibited by anti-uPAR antibody; 5) uPA-ATF cell signal pathway up-regulated expression of MMP-2 and TIMP-3, while anti-uPAR antibody down-regulated the expression of MMP-2 and TIMP-3. CONCLUSION: These results demonstrate for the first time that uPA-ATF directly regulates the expression of MMP-2 and TIMP-3 by signal transduction pathway, and the over-expression of MMP-2 and TIMP-3 may play an important role in local osteolysis of GCT.     

绿僵菌生防制剂助剂的筛选

使用绿僵菌油剂防治草原蝗虫曾收到很好的防效。实验对绿僵菌油剂助剂中介质油、增活剂、紫外保护剂进行筛选。结果表明,用色拉油与煤油的混合油,作为绿僵菌孢子粉喷洒介质比较理想;增C,50mg/kg为最佳的增活剂及浓度;UV-14∶10为最佳的紫外保护剂和紫外保护剂与孢子粉的配比。用该油剂对蝗虫进行室内生物测定,求得LT50为5.23d。     

不同活化剂对两种富硒土壤上烤烟生长及吸收累积硒的影响

【目的】探明4种活化剂对富硒水稻土和赤红壤上烤烟生长、生物量以及各部位吸收累积硒的影响,为富硒烟叶生产提供理论依据。【方法】以云烟87为试验材料,采用土壤盆栽试验,设置4种不同成分的硒活化剂处理,分别为活化剂A(T1)、活化剂B(T2)活化剂C(T3)和活化剂D(T4),以不添加活化剂为对照。【结果】在水稻土上,T4处理提高了移栽30 d和75 d烤烟的株高、叶片数、最大叶面积和茎围,移栽30 d烤烟上述指标比CK提高幅度分别为9.34%、15.38%、40.56%和13.81%。移栽75 d烤烟上述指标比CK提高幅度分别为19.83%、1.04%、37.78%和14.66%。在赤红壤上,T4处理提高了移栽30 d烤烟的最大叶面积和茎围,4种活化剂处理均提高了移栽75 d烤烟的农艺性状(株高、叶片数、最大叶面积、茎围),其中T4处理提高烤烟的株高和叶片数幅度最大,T1处理提高烤烟的最大叶面积和茎围幅度最大。T4处理显著提高两种富硒土壤上移栽75 d烤烟的总生物量,水稻土上总生物量提高幅度为30.44%,赤红壤上总生物量提高幅度为22.08%。4种活化剂处理均有利于提高两种富硒土壤上烤烟后期各部位硒累积量及总累积量。在水稻土上,烟株硒总累积量表现为T3T2T4T1CK。在赤红壤上,烟株硒总累积量表现为T4T2T3T1CK,并且赤红壤上烟株的硒总累积量明显高于水稻土。【结论】烤烟各指标受土壤类型的影响,在水稻土上活化剂对烤烟的生长影响较大,但是对硒吸收累积的效果赤红壤优于水稻土。整体上,T4处理对促进烟株的生长、生物量提高及吸收累积硒的效果最优,可作为贺州烟区天然富硒烟叶生产的优良活化剂。     

SN—924酶激活剂在大豆上的应用效果分析

在大豆上应用ＳＮ－９２４酶激活剂，可加快幼苗生长，增加叶片叶绿素含量和光合速率；单株结荚率提高１０％，产量增加１２％。     

Fusion Expression and Purification of Marek’s disease virus Tegument Protein VP16 and Its Antibody Preparation

马立克氏病病毒(Marek’s disease virus ,MDV)UL48基因编码的蛋白与单纯疱疹病毒1型(Herpes simplex virus ,HSV)衣壳蛋白VP16为同源物，将其克隆入pET-32a载体中，获得pET-VP16, 转化Escherichia coli BL21感受态细胞，经IPTG诱导表达，SDS-PAGE电泳显示:融合蛋白获得可溶性表达，表达蛋白的相对分子量约为67 kD；将表达的融合蛋白过His·Bind柱，获得纯化的蛋白，将该蛋白免疫家兔，制备多克隆抗体。通过间接ELISA和Western blot鉴定制备的多克隆抗体的效价和特异性，结果表明，该抗体具有较高的特异性，间接ELISA效价大于2×10－5。     

侧金盏花CBF转录激活因子基因片段的克隆

[目的]探索CBF转录激活因子基因在侧金盏花中是否存在。[方法]以侧金盏花基因组DNA为模板,根据拟南芥CBF基因序列的保守区设计1对特异性引物,通过PCR扩增获得1个DNA片段,将其克隆到pUCm-T载体中,转化大肠杆菌TG1,筛选阳性克隆并对其进行测序鉴定。[结果]测序结果显示通过PCR扩增获得的基因片段长448 bp。在GenBank中检索,该序列与从拟南芥和其他作物中克隆的CBF同源基因序列同源性较低,说明是一个新的基因片段,初步认定该片段是侧金盏花CBF基因片段。[结论]该研究为进一步克隆侧金盏花CBF转录激活因子基因全长序列、鉴定其生物学意义奠定了基础。     

植物激活蛋白对白术根腐病和斑枯病的诱抗效果及其对产量的影响

植物激活蛋白能显著提高白术对病害的抗性。试验表明700~1300倍液植物激活蛋白喷施白术叶面,隔30 d喷1次,对白术根腐病和斑枯病的诱抗效果分别达53.9%~81.2%和39.7%~63.3%。植物激活蛋白能显著提高白术商品性和产量,白术的单术重量增加35%以上,白术产量提高46%以上。6月初使用700倍激活蛋白,间隔30 d,整个生长期使用5次对白术抗病增产效果最好,对斑枯病诱抗效果达63.3%,增产129.93%。     

UK114基因的克隆和表达载体的构建

本研究采用PCR法扩增得到重组UK114 cDNA序列,将其克隆于T-easy载体并进行了序列测定与分析。结果表明该序列全长1 017 bp,有一个开放的阅读框(40 nt~450 nt),可编码137个氨基酸(14.2 kDa),与UK114的序列比较,同源性为91%,突变的86个核苷酸中都为无义突变,开放阅读框中仅有一个核苷酸突变。此外,本实验构建了pBV114表达载体,选择阳性克隆提取质粒进行酶切,琼脂糖检测获得约1 kb和3.7 kb的两个片段。     

基因活化剂对紫色甘薯块根产量的影响

基因活化剂使用浓度(A)设3个水平375×(A1)、750×(A2)、1 500×(A3)稀释液;使用时间(B)设4个水平浸渍种苗基部1 h(B1)和1次(B2)、2次(B3)、3次(B4)叶面追肥,收获时测定块根鲜重.结果表明A1,A2,A3的块根产量分别比对照提高38.60%,61.70%和42.54%,B1,B2,B3和B4的块根产量分别比对照提高38.74%,64.33%,47.37%和40.06%,与对照差异均达显著水平(P＜0.05).A2B2为最佳水平组合,平均块根产量比对照提高89.77%,且与所有水平组合之间都有显著差异(P＜0.05).用750倍的基因活化剂浸渍种苗基部1 h再追肥1次,可显著提高紫色甘薯的块根产量.     

植物激活蛋白对水稻抗性相关基因转录水平的影响

 在cDNA芯片分析结果的基础上，对从交链孢真菌（Alternaria spp.）中提取的新型植物激活蛋白对水稻抗病相关基因转录水平的影响进行了研究，同时检测了抗病防御相关酶活性和稻瘟菌抗性的变化。结果表明，水稻幼苗经 2 g·ml-1激活蛋白喷雾处理后，NPR1基因从第天时转录水平开始提高，第3天和5天时转录活性继续增强；EIN2基因的转录在第1天、3天时转录水平显著提高，第5天时又有所回复，但仍高于对照；CTR1的转录在第1天时虽无影响，但第3天和第5天转录水平明显降低，而PR4 的转录在各检测时段均未表现明显变化。5 d后叶片的稻瘟菌病情指数和平均每叶病斑数开始显著降低，14 d时对稻瘟菌的诱抗效果最为明显。叶片苯丙氨酸解氨酶（PAL）活性在处理后1 d迅速增加，7 d和9 d时活性增加达到高峰期； -1,3-葡聚糖酶活性在处理后3 d开始增加，5 d时增幅最大，随后增幅降低，14 d时略低于对照水平；几丁质酶活性在处理后前3 d低于对照，5 d后活性平稳增加，14 d时降至略低于对照的水平。