胸膜肺料放线杆菌溶血毒素特性鉴定及免疫原性研究

本文报道了胸膜肺炎防线杆菌（APP）血清型7型菌株深－8株分泌的溶血素。研究证明该株至少可分泌两种溶血素，一种为热稳定的溶血素，另一种为热不稳定的溶血素。本研究没有对热稳定的溶血素进行提纯分析，而对热不稳定的溶血素经过盐析及凝胶过滤层析提纯后，进行SDS－PAGE分析，表明该溶血素为分子量65kDa的蛋白。本研究利用纯化的65kDa的溶血素蛋白与APP所有型的阳性血清做交叉中和实验和琼脂扩散实验及动物实验，证明该溶血素蛋白具有一定的免疫原性及保护力，但其诱导的免疫反应对同源菌株的攻击只能提供部分保护。     

猪胸膜肺炎放线杆菌外膜蛋白(OMP)5′末端保守区基因的克隆、表达及其免疫活性研究

以猪胸膜肺炎放线杆菌血清7型25-4株基因组DNA为模板,PCR方法扩增外膜蛋白(OMP)5′末端保守区基因片段(OMPc),酶切及核苷酸序列分析鉴定后,与原核表达载体质粒pGEX-6P-1进行连接,构建成重组表达载体pGEX-OM-Pc,转入大肠杆菌BL21中,以IPTG进行诱导,SDS-PAGE电泳分析发现,转化了重组质粒的菌株所表达的融合蛋白相对分子量为34 kD,与实际预测相符,命名为GST-OMPc.GST亲和层析柱进行纯化,ELISA方法对纯化蛋白进行检测.结果表明:纯化蛋白GST-OMPc能够与兔抗猪胸膜肺炎放线杆菌血清7型的阳性血清反应.OMPc蛋白的成功表达为其功能的研究打下基础.     

胸膜肺炎放线杆菌感染对猪外周血T淋巴细胞亚群及增殖影响

为研究感染APP对猪外周血免疫功能影响,将24头健康杜洛克、长白猪和约克夏三元杂交(DLY)仔猪按性别、体重分为2组,分别用生理盐水(对照组CG)和含3.8×107CFU.mL-1猪放线杆菌(APP)稀释液(试验组TG)喷雾鼻腔。结果表明,TG猪血液中白细胞总数(WBC)、中性粒细胞数(GRA)、中间细胞数(MID)均极显著升高(P<0.01),淋巴细胞数(LYM)却极显著降低(P<0.01)。TG猪外周血CD3+T细胞降低(P>0.05),CD3+CD4+T细胞极显著降低(P<0.01),CD3+CD8+T细胞及CD4+/CD8+值显著降低(0.010.05)。结果表明,感染放线杆菌后,猪整体防御机能和呼吸道粘膜局部免疫功能增强,而机体整体免疫功能下降。     

猪传染性胸膜肺炎放线杆菌的血清型鉴定与药敏试验

从江苏泰州地区疑似猪传染性胸膜肺炎发病猪采集病料,经细菌分离培养得到了3株分离株TZA1、TZA2和TZA3株。经形态学检查、CAMP试验、生化试验和血清型鉴定,确定TZA1株和TZA2株为血清1型,TZA3株为血清3型。药敏试验显示,3株分离菌株对恩诺沙星、阿齐霉素、头孢唑肟高度敏感。     

感染猪放线杆菌(Ⅰ型)对猪红细胞免疫功能的影响

将24头健康DLY仔猪按性别、体重随机分为2组,采用鼻腔喷雾法一组接种生理盐水(对照组CG),另一组含3.8×107 cfu·mL-1猪放线杆菌(APP)的稀释液(试验组TG),研究感染APP对猪血常规指标和红细胞免疫功能的影响。结果表明,猪感染APP后,血液中的白细胞总数(WBC)、中性粒细胞数(GRA)、中间细胞数(MID)均极显著升高(P<0.01),淋巴细胞数(LYM)却极显著降低(P<0.01);TG的E-C3bRR(红细胞C3b受体花环)极显著高于CG组(P<0.01),E-ICR(红细胞免疫复合物花环)低于CG组,差异不显著(P>0.05)。试验表明,感染放线杆菌猪的防御能力增强,但其免疫力下降,并且红细胞免疫功能及清除循环血液中免疫复合物的作用增强。     

猪胸膜肺炎放线杆菌Apx毒素的分子生物学与致病机理

猪传染性胸膜肺炎是由胸膜肺炎放线杆菌(App)引起的猪的一种呼吸道传染病.到目前为止,APP已经被分离鉴定出了15种血清型(1～15).15种血清型的APP能产生属于RTX毒素家族的4种Apx毒素,分别为ApxⅠ、ApxⅡ、ApxⅢ和ApxⅣ.ApxⅠ操纵子包含有ApxⅠ C、A、B、D 4个基因;ApxⅠ毒素含有13个富含甘氨酸的重复区.ApxⅡ操纵子仅包括结构基因ApxⅡA和激活基因ApxⅡC,而无分泌基因;ApxⅡ蛋白含有8个甘氨酸的序列重复.ApxⅢ操纵子与ApxⅠ操纵子相同,具有一个完整的操纵子;ApxⅢ在N～末端有3个疏水区,在C末端部分有13个富含甘氨酸的区域.Apx毒素的致病机理为先由没有活性的前体蛋白转变为有活性的ApxA蛋白,再由有活性的ApxA蛋白侵害细胞.     

几种动物病原菌对替米考星耐药性的体外诱导

在测定替米考星对鸡毒支原体、多杀巴氏杆菌和猪胸膜肺炎放线杆菌的最小抑菌浓度基础上,采用药物浓度递增法体外诱导3种病原菌对替米考星的耐药性。结果鸡毒支原体经9次传代对替米考星产生了高水平耐药,多杀巴氏杆菌经7~9次传代对替米考星产生了高水平耐药,猪胸膜肺炎放线杆菌经14次传代对替米考星的耐受浓度未发生明显变化;鸡毒支原体和多杀巴氏杆菌替米考星诱导耐药株对红霉素、阿奇霉素、泰乐菌素、吉他霉素和林可霉素表现交叉耐药。研究结果提示,替米考星较易诱导鸡毒支原体和多杀巴氏杆菌产生耐药性,兽医临床应合理应用。     

胸膜肺炎放线杆菌ApxIA毒素蛋白免疫原性分析

为鉴定胸膜肺炎放线杆菌（Actinobacillus pleuropneumoniae，APP）ApxIA毒素蛋白N端疏水区和C端Ca^2＋结合区的免疫原性，参照apxIA基因序列（D16582）设计4条引物，用于扩增APP血清10型参考菌株（D13039）基因组DNA中长约3．2kb的apxIA基因及其N端（1．4kb）和C端（1．8kb）基因片段，经克隆测序后分别插入原核表达载体pET-32a中进行表达，表达的融合蛋白大小分别约为125Ku、65Ku和80Ku。表达产物免疫小鼠后的攻毒保护试验结果显示，ApxIA表达蛋白对APP血清10型（D13039）攻毒可提供完全保护，而对APP血清1型（4074）攻毒仅能提供部分保护，与提纯的Apx1毒素蛋白免疫保护效果相当；ApxIA-N端表达蛋白免疫保护活性显著高于ApxIA-C端表达蛋白，提示ApxIA蛋白免疫活性位点多位于N端，在Apx1毒素蛋白的保护性抗原活性中发挥更重要作用。     

猪传染性胸膜肺炎放线杆菌的分离鉴定、致病性与药敏试验

从湖北省几个猪场具有严重呼吸道症状的疑似病例中,采集了肺脏、扁桃体、关节液及心包液等病料,进行了细菌的分离培养及菌落形态观察、染色镜检、生化试验、PCR检验、血清型鉴定、药敏试验及致病性试验.结果表明,分离到的8株细菌为猪传染性胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae,APP).血清型分型鉴定结果为1型的6株,3型的2株.药敏试验结果显示,分离的菌株对头孢类、先锋霉素类表现较高的敏感性,为猪场用药提供了科学参考.     

猪胸膜肺炎放线杆菌荚膜多糖基因的原核表达及其产物的细胞毒性

参考GenBank中猪胸膜肺炎放线杆菌（App）血清2型荚膜多糖基因的序列分别设计了3对特异性引物，通过PCR分别扩增了CpsA、CpsB、CpsC3个基因，获得长约1137、429、1146bp的片段，将其分别克隆到pMD18-T中，经酶切鉴定和序列分析获得了阳性克隆子；再将CpsA、CpsB、CpsC分别插入原核表达载体pGEX-KG后，转化BL21，在IPTG诱导下获得高效表达，经Western-blotting检测证实，表达产物CpsC有生物学活性，CpsA、CpsB无活性；将3种表达产物等量混合，做10倍递进稀释后，与分离出的猪嗜中性粒细胞作用，37℃、50mL／L CO2培养箱中温育4h后加入底物液，测定D492nm值。结果表明，App荚膜多糖对猪嗜中性粒细胞无毒性作用。