海水养殖源弧菌耐药性调查与分析

对2010年收集自上海、江苏、海南等地海水养殖区域内的184株弧菌进行了耐药率测定和分析,绘制了其对常见药物的耐药谱。结果显示,所有弧菌对喹诺酮类、氯霉素类、磺胺类、氨基糖苷类、β-内酰胺类、大环内酯类及利福霉素类等常见药物均有不同程度的耐药,对抗生素耐药率分别为新生霉素64.7%、复方新诺明57.6%、恩诺沙星54.3%、利福平54.3%、卡那霉素45.7%,对诺氟沙星、氯霉素类和红霉素的耐药率则维持在较低水平,分别为8.2%、10.3%和9.2%;菌株交叉耐药和多重耐药现象严重,对1种以上药物产生耐药的菌株占总数的100%;对2种以上药物产生耐药的菌株占总数的93.5%;对3种以上药物耐药的菌株占80.4%;对4种以上药物耐药的菌株占49.5%;对5种以上药物耐药的菌株占26.6%;对6种以上药物耐药的菌株亦有3.8%。由此可见,水产细菌的耐药性十分严重,已成为当前渔业细菌性疾病防控的突出问题。     

河蟹工厂化育苗期间水及蟹体中异养细菌的研究

研究了中华绒螯蟹（Erocheir sinensis),工厂化育苗期间沉淀池水,培育池水和蟹苗体内的异养菌暨弧菌（Vibrio)数量的变化与优势菌株属的组成,以及细菌数量的变化与消毒剂,COD,总氨氮,pH值等环境因子的关系,结果表明,育苗水中细菌繁殖速度快,细菌属的组成较简单,弧菌属为优势属,其出现频次占45％,异养细菌的数量与COD和总氨氮含量呈正相关,与pH值呈负相关。     

过硫酸氢钾干预下对虾养殖系统中水质指标和菌群结构变化分析

摘要：该文通过水质理化因子监测、虾体和水体中可培养细菌和弧菌检测及高通量测序方法,系统解析过硫酸氢钾（PMS）干预下对虾养殖池塘水体环境指标和菌群结构的变化情况。结果表明：施用0.2 g/L PMS对对虾养殖水体中低含量氨氮也具有一定改善作用,泼洒PMS 24h和72h后的水温、溶解氧、pH、盐度、亚硝酸盐无显著差异。PMS泼洒后对虾肝胰腺内可培养细菌和弧菌数量分别由3.13×106 CFU/g和1.98×106 CFU/g降低至4.30×105 CFU/g和1.09×105 CFU/g,弧菌占比由63.36%降低至25.35%;水体中可培养细菌和弧菌数量分别由2.70×104 CFU/mL和6.00×103 CFU/m降低至8.50×103 CFU/mL和1.20×103 CFU/mL,弧菌占比由22.22%降低至14.11%,PMS可显著降低虾体和水体中可培养细菌数量及弧菌占比。对水体菌群结构进行高通量测序分析表明,放线菌门、拟杆菌门、蓝藻门和变形菌门为主要优势菌门,泼洒PMS前后（PB1/PA1）,腈基降解菌科、PeM15、DS001、Llumatobacteraceae、微杆菌科、红细菌科相对丰度显著升高（P<0.05）,巴纽尔斯菌科、腐螺菌科、Stappiaceae相对丰度显著降低（P<0.05）,对比泼洒PMS前后3天的变化趋势表明,泼洒PMS后池塘优势菌相对丰度发生显著变化且菌群结构PCoA指数偏离度较低。相关研究结果为评判PMS在水产养殖中的防控作用及其科学使用提供数据支撑。     

噁喹酸在凡纳滨对虾体内药动学和对弧菌的体外药效

采用高效液相色谱法,研究了复方噁喹酸粉药饵投喂在凡纳滨对虾体内药动学和组织中消除规律,同时检测了噁喹酸对对虾源弧菌的最小抑菌浓度(MIC),建立了药动/药效(PK/PD)关系,提出了用药方案和休药期建议。结果显示,复方噁喹酸粉拌饵投喂给药,噁喹酸给药剂量为30 mg/kg(体质量),凡纳滨对虾血浆噁喹酸浓度—时间关系曲线均符合一级吸收二室开放动力学模型。血淋巴中噁喹酸达峰浓度(Cmax)、达峰时间(Tmax)、曲线下面积(AUC0-24)和消除半衰期(t1/2z)分别为14.70 mg/L、2 h、244.6 mg/(L·h)和18.56 h;肌肉、肝胰腺和鳃的峰浓度(Cmax)分别为4.11、17.20和7.01 mg/kg,消除半衰期(t1/2z)分别为10.71、12.31和16.75 h。噁喹酸对132株弧菌的MIC主要分布在0.15~1.25μg/m L,MIC50和MIC90分别为0.62和1.25μg/m L。PK/PD相互关系参数Cmax/MIC90和AUC0-24/MIC90分别为11.76和195.7。研究表明,噁喹酸以30 mg/(kg体质量)剂量药饵给药,凡纳滨对虾能很好地吸收噁喹酸,可以有效地防治弧菌引起的细菌性疾病。     

氟苯尼考对六种海洋致病弧菌的体外抗菌活性研究

测定了氟苯尼考等4种抗菌药对6种常见海洋致病弧菌的最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC)。测试结果显示,氟苯尼考对6株弧菌的MIC值范围为2～4μg／mL,氯霉素为1～32μg／mL,土霉素为4～128μg／mL,恩诺沙星为0．125～1μg／mL;对多数弧菌氟苯尼考与氯霉素的抗菌活性相似。氟苯尼考对6株弧菌的MBC／MIC值范围为2-4,而氯霉素为2～16,表明氟苯尼考的杀菌效果优于氯霉素。对照药物恩诺沙星、土霉素的MBC／MIC值分别为1-2和2-8,恩诺沙星显示出优良的抗菌和杀菌活性。随着接种菌量增加,所测3种抗菌药的MIC随之升高;当接种量达到10^7ufu／mL时．药物对多数弧菌显示出微弱的作用。     

蛭弧菌在大菱鲆养成中的应用研究

[目的]用蛭弧菌促进大菱鲆的生长,提高存活率,消除养殖水体中的弧菌。[方法]采用20 d的换水周期,以不添加蛭弧菌的养殖池为对照组（B组）,往水体中添加蛭弧菌的养殖池为蛭弧菌添加组（C组）,以生产性的养殖池作为参照（A组）,以成活率、增重率、体重平均日增长量、体长增长率、体长平均日增长量、肥满度为判断依据,确定蛭弧菌对大菱鲆生长的影响;对换水前后各组养殖水体中所含弧菌数进行检测。[结果]蛭弧菌添加组大菱鲆的生长指标和存活率显著高于生产组和对照组（P〈0.05）;与生产组相比,蛭弧菌添加组大菱鲆的成活率提高了13.23%,增重率、体重平均日增长量、体长增长率、体长平均日增长量、肥满度分别提高了663%、130.35mg、28.09%、31.82μm、4.99。蛭弧菌添加组的弧菌数明显减少。[结论]蛭弧菌能够提高大菱鲆的成活率,促进其生长发育,并能有效控制养殖水体中弧菌数。     

3种中毒性弧菌融合毒素基因的表达与免疫学性质研究

为构建3种中毒性弧菌多联融合毒素基因及重组表达载体,制备多联融合毒素的血清抗体,本试验采用柔性Linker序列（Gly₄Ser）对目的基因进行串联（tdh-vvhA-ctB）,构建重组表达质粒pET-22b（+）-TVC并在原核表达载体内进行表达,将表达蛋白纯化后免疫动物制备多联融合毒素血清抗体,利用琼脂扩散试验和酶联免疫吸附试验验证抗体的特异性与敏感性。结果表明,试验成功构建了多联融合毒素重组表达质粒pET-22b（+）-TVC,并在原核表达载体内成功表达,表达量为11.38%,表达蛋白主要为包涵体,少量为可溶性蛋白,基因序列全长2 196 bp,编码731个氨基酸,蛋白分子质量为81.7 ku,测序结果与设计序列同源性为99.6%。ELISA和琼脂扩散试验表明,融合毒素TVC与3种目标中毒性弧菌均发生反应,与多种非目标菌均不反应。本试验成功构建了多联融合毒素基因的表达质粒并制备了抗血清,为利用重组毒素的方法检测目标毒素,进而建立更广谱的食物中毒菌快速检测方法奠定基础。     

Expression and Immunological Character Research of Three Kinds of Food-poisoning Vibrio Poly-recombinant Toxin Gene

In this study,tdh-vvhA-ctB was constructed using the flexible Linker sequence (Gly₄Ser) in order to construct three kinds of food-poisoning Vibrio poly-recombinant toxin gene and recombinant expression vector. The recombinant expression plasmid pET-22b(+)-TVC was constructed and expressed in prokaryotic expression vector. The animals were immunized using the expressed protein after purification to get serum antibody. The specificity and sensitivity of the antibody were verified by agar diffusion test and enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA).The results showed that the recombinant expressing plasmid pET-22b(+)-TVC was constructed and expressed successfully in prokaryotic expression vector, the expression level was 11.38%. The expressed protein was mainly inclusion body and a small amount of soluble protein. The gene length was 2 196 bp, encoding 731 amino acids with molecular weight of 81.7 ku. The results were 99.6% homologous to the designed sequence. Agar diffusion reaction and ELISA tests indicated the poly-recombinant toxin TVC could product different immune intersect reaction with other food-poisoning Vibrios but not react with some no-objective bacteria. Expression plasmid of poly-recombinant toxin gene was constructed and serum antibody was prepared successfully. It might be used to check the objective toxin based on the poly-recombinant toxin gene and established the board-spectrum, quick, special detecting way to lay the theoretical and technical basis.     

冬季菲律宾蛤仔育苗系统几类主要细菌数量变化

试验结果表明:水中异养细菌为2.3×103-1.1×105cfu/m l,其变化趋势与温度变化一致;弧菌为5.0×103-6.6×103cfu/m l,其变化趋势与温度变化不一致,规律性不强。沉淀池泥中异养细菌为7.6×104-6.7×105cfu/g,弧菌为1.6×103-5.4×103cfu/g,反硝化细菌为2.5×102-3.2×104MPN/g,反硫化细菌为35-4.9×105MPN/g;温度高时,沉淀池泥中反硫化细菌占总异养菌比例最高,反硝化细菌次之,弧菌最小。从异养细菌的数量来看,沉淀池水质达到富营养化水平。因此,温度一旦升高,水中细菌会急剧增加,造成水质恶化,产生有毒的H2S、NO2-等物质,不利于菲律宾蛤仔的生长。