广西特产罗汉果专利的现状分析和对策

罗汉果是广西著名特产和出口创汇的作物之一。在对1985-2006年罗汉果专利统计的基础上进行了分析和比较,指出我国及产地广西在罗汉果专利申请方面普遍存在的问题,提出罗汉果专利保护的措施。     

罗汉果种子传播小西葫芦黄化花叶病毒的检测

为了解小西葫芦黄化花叶病毒（Zucchini yellow mosaicvirus,ZYMV）是否能通过罗汉果种子传播。本研究通过取ZYMV阳性的罹病罗汉果植株种子700粒,400粒直接播种于防虫网室中,300粒经表面消毒处理后播种于MS培养基上。最终获得213棵罗汉果实生苗。对所获得实生苗进行生物学鉴定及ZYMV特异性RT-PCR检测,均未检测到ZYMV阳性植株。结果表明ZYMV不能经罗汉果种子传播,或其传播率很低。     

西番莲罗汉果复合低糖饮料的研制

以西番莲和罗汉果为原料,对西番莲罗汉果复合低糖饮料的加工工艺及技术要点进行了研究。确定最佳配方为:罗汉果浸提液与西番莲果汁体积比为3:1,蔗糖添加量5.0%,柠檬酸添加量0.02%;确定最佳的澄清方法为冷冻一离心澄清法。     

罗汉果花提取液对亚硝酸盐清除效果研究

探索罗汉果花提取液对亚硝酸盐的清除效果,为罗汉果花的开发利用提供相关理论依据。以罗汉果花提取液对亚硝酸盐的清除率为考察指标,分别研究不同提取方法和提取溶剂所获得的提取液对亚硝酸盐的清除效果,在确定最佳提取方法和提取溶剂的基础上,通过单因素试验和正交试验对提取工艺进行优化。结果表明,采用蒸馏水作为溶剂,利用微波辅助浸提法效果较好,最佳提取工艺为：微波功率490 W,提取时间2 min,料液比1∶15（g/mL）。在此条件下,罗汉果花提取液对亚硝酸盐清除率达到56.83%。     

罗汉果鲜花粉培养条件研究

【目的】探索罗汉果鲜花粉的适宜培养条件。【方法】以不同浓度的蔗糖和硼酸复配液,在不同pH值和温度条件下,对罗汉果鲜花粉进行不同时间的组织培养,测定萌发率。【结果】罗汉果鲜花粉的适宜培养基为：蔗糖15％＋硼酸200mg／L,pH6．5。该培养基培养的鲜花粉在常温27～32℃下萌发率达77．6％,适合当天授粉使用;在冰壶或冰箱5～8℃下冷藏15d,萌发率仍有52．8％,适用于应对花期不遇和异地调粉。【结论】罗汉果花粉萌发率随培养时间的增加而下降,相对低温可使萌发率的下降显著减慢;硼酸可以促进罗汉果花粉的萌发与花粉管伸长,提高花粉的萌发率;罗汉果鲜花粉不宜在碱性环境中培养。     

罗汉果新品种‘永青1号’

 罗汉果‘永青1号’是以‘龙江青皮果’为母本,‘冬瓜果’为父本育成的优良新品种。该品种果实大,单果质量100 g,果形整齐美观,甜苷Ⅴ含量1.03%,丰产性好,抗逆性强。     

栽培罗汉果遗传多样性的RAPD分析

罗汉果(Siraitiagrosvenorii)是单性、雌雄异株的葫芦科球根多年生植物,是特产于我国南部的重要经济植物。其果实是传统中药,果实中还含有一种低热量的天然甜味剂。我们从罗汉果的主产地广西永福县、临桂县和融安县采集了13份雄株和8个品种的62份雌株栽培罗汉果样品,用21个随机引物对这75份样品进行了RAPD分析。共得到130个位点,其中92个(70.77%)是多态性的。用POPGENE软件统计了主要品种及雄株的多态位点百分率和Shannon信息多样性指数;根据样品间的Dice相似性系数,分别对雌株和雄株做了主成分分析(PCA);用UPGMA法进行了单株聚类分析。结果表明主要栽培品种青皮果、红毛果和爆棚果的遗传多样性很低,它们的品种内样品间相似性系数平均值分别为0.961、0.945和0.966,Shannon信息多样性指数分别为0.0997、0.1014和0.0571,这种遗传多样性很低的现状是由于栽培罗汉果主要采用营养繁殖方法进行繁殖的结果。而茶山果和冬瓜果具有相对较高的遗传多样性,样品间相似性系数平均值分别为0.868和0.857,Shannon信息多样性指数分别为0.1876和0.1855。雄株遗传多样性较高,样品间相似性系数平均值为0.873,Shannon信息多样性指数为0.2135。有必要扩大栽培罗汉果的遗传基础。     

罗汉果子叶高效再生体系的建立

以无菌萌发罗汉果子叶为外植体,进行罗汉果高效离体再生体系的研究。探讨了不同MS、琼脂含量、不同激素浓度配比、种子萌发时间和活性炭在罗汉果种子萌发、子叶诱导不定芽及试管苗生根方面的影响。结果表明：1／4 MS、0．5％-0．6％的琼脂含量比较适合罗汉果种子萌发,萌发率达89．2％;降低无机盐和蔗糖浓度有利于罗汉果试管苗的生根;最适生根培养基为1／2 MS＋IBA0．5mg／L＋1．5％蔗糖;罗汉果子叶直接诱导不定芽最适合培养基为1／2MS＋6-BA1．0mg／L＋IBA0．1mg／L,分化率达94．8％,平均每块子叶出芽10个;培养基中添加低浓度（0．2％）活性炭有利于生根,但不利于子叶不定芽的诱导;子叶不定芽的分化率还受种子萌发时间的影响,萌发时间以2—4d为宜;试管苗经过炼苗2～4d能极大提高移栽成活率,达91．7％。     

罗汉果葡萄糖基转移酶基因的克隆及原核表达

 从罗汉果（Siraitia grosvenorii）转录组中获得一条与罗汉果甜苷Ⅴ生物合成相关的葡萄糖基转移酶（UDPG）的unigene片段,以罗汉果授粉后70 d的果实RNA为模板,利用RACE和RT-PCR技术克隆UDPG全长基因,将克隆得到的SgUDPG1基因连接到原核表达载体pEASY-E1上,构建融合表达载体,转化到大肠杆菌BL21（DE3）,通过IPTG诱导表达,重组蛋白纯化,SDS-PAGE检测表达产物以及Western-blotting和质谱鉴定蛋白产物。结果表明,获得了1条SgUDPG1,全长为1 959 bp,开放阅读框ORF为1 365 bp,编码1条454 aa的肽链,理论分子量为51.2 kD,等电点为5.39,具有植物中次生代谢产物糖基转移酶特有的保守结构域PSPG-box motif。SgUDPG1在授粉后50 d和70 d的果实中表达逐渐升高,是对照授粉后3 d的5.16倍和13.12倍,与果实中甜苷Ⅴ含量呈相同趋势。此基因的ORF可以在大肠杆菌中表达,并且可以纯化出比理论分子量大5.3 kD的融合蛋白,通过Western-blotting和质谱鉴定,确定该蛋白属于罗汉果葡萄糖基转移酶。     

罗汉果生产技术研究的思路与发展对策

探讨了罗汉果生产技术研究思路，提出选育、引进优良品种，培育茎尖脱毒壮苗，建立种薯基地，采用容器无土栽培、平地栽培、设施栽培，施用天敌真菌、接种VA菌根真菌防治根结线虫等技术建议。