志贺氏菌的耐药性研究及防治对策

志贺氏菌能感染雏鸡，主要引起雏鸡拉脓血样粪便，该菌耐药性在兽医领域报道较少，本试验通过药敏试验，试管二倍稀释法测定三代头孢抗生素诱导志贺氏菌后可产生多重耐药性。     

豪猪源福氏志贺菌的分离鉴定及喹诺酮类耐药基因检测

为调查四川省某规模化豪猪养殖场中豪猪大面积腹泻死亡的原因,本研究采集病死豪猪的肠道内容物和肺脏等病料样品进行细菌的分离纯化,通过培养特性观察、革兰染色镜检、生化鉴定、16S rRNA基因的克隆测序进行鉴定,并对分离菌株进行致病性、耐药性分析,对其喹诺酮类耐药基因进行PCR检测并测序分析。结果显示,分离得到1株革兰阴性菌,该分离株符合福氏志贺菌的培养特性和生化特性,并且其16S rRNA基因序列与福氏志贺菌该基因序列的同源性为99%;对小鼠具有较强致病性;药敏试验结果显示分离株具有多重耐药性,仅对丁胺卡那敏感,对喹诺酮类、四环素类、头孢类、氨基糖苷类、青霉素类和氯霉素类药物均表现为耐药;分离株的DNA促旋酶Ⅱ和拓扑异构酶Ⅳ的喹诺酮耐药决定区均有突变,且携带有质粒介导的喹诺酮耐药基因qnr A和qnr S。本研究是国内首次关于豪猪源福氏志贺菌病的报道,为豪猪养殖中该细菌性疾病的诊断防治等相关研究提供参考。     

鸡源福氏志贺氏菌的分离鉴定及药敏试验

为了对新郑某养鸡场鸡群严重腹泻进行病原确切诊断并提供防治依据,采集病料进行了细菌分离鉴定和药敏试验.经细菌分离培养、抹片染色镜检、生化试验,初步鉴定出5株鸡源志贺氏茵.用分离菌株攻毒后的发病比例为2/5～4/5,死亡比例为1/5～3/5.由此表明5个分离茵株均具有一定的毒力.血清学试验鉴定结果表明,5个分离菌株均为鸡源...     

福氏志贺菌mdoC基因对其在洗菜水中生长及生物膜形成的影响

【目的】研究福氏志贺菌mdoC基因对细菌在不同洗菜水中生长及生物膜形成的影响。【方法】以福氏志贺菌野生型和敲除mdoC基因的opgC突变体为出发菌株,采用生长曲线法和结晶紫染色法,在低渗透压及正常渗透压的菠菜、芹菜、生菜及白菜洗菜水中,研究福氏志贺菌野生型和opgC突变体生长及生物膜的产生能力。【结果】在不同洗菜水中,福氏志贺菌opgC突变体生长速率明显较野生型慢,加盐提高渗透压之后,野生型和opgC突变体稳定生长期均提前。野生型和opgC突变体的生物膜产量在菠菜水、生菜水和白菜水中有显著区别;提高渗透压之后,福氏志贺菌野生型在菠菜水中的生物膜产量显著提高,而在生菜水和白菜水中生物膜产量显著下降,opgC突变体在菠菜水、生菜水和白菜水中生物膜产量均显著提高。【结论】低渗条件下,福氏志贺菌mdoC基因的缺失显著地延缓了细菌生长。提高渗透压后,在菠菜、生菜和白菜洗菜水中,mdoC基因的缺失促进了生物膜的形成。     

止痢灵在去污染小鼠体内不同时间对痢疾杆菌F13株R质粒消除作用的影响

以中药止痢灵作为Ｒ质粒消除剂，用携带Ｒ质粒的福氏痢疾杆菌Ｆ１３株作为靶细菌，在去污染小白鼠动物模型内，研究止痢灵对痢疾杆菌Ｒ质粒的消除作用，并观察止痢灵在不同作用时间（４８、７２和９６ｈ）对Ｒ质粒消除率的影响。其中，以４８ｈ的消除率１０．６３％为最高，７２ｈ的消除率为３．３３％，９６ｈ为４．６７％。细菌丢失耐药性，可表现为多重或单一种耐药性的丧失。     

鸡福氏志贺菌SHV-12型ESBLs基因的扩增、原核表达及酶特性研究

对5株鸡福氏志贺菌产SHV-12型ESBLs基因进行重组表达并优化表达条件,观察了表达蛋白的底物水解特性和抑制剂的抑酶特性.结果表明:构建的重组质粒经EcoR I和Xhol I双酶切后,可切下目的条带.重组质粒转化BL21后所表达的重组蛋白有超广谱β-内酰胺酶活性.SHV-12原核表达的最佳条件是IPTG浓度为0.5 mmol/L、温度37℃、诱导时间5 h;SHV-12型ESBLs亲和力最强的底物是头孢噻呋钠,Km值为1.29μmol,较难水解的底物是头孢曲松钠,Km值为24.13 μmol;它唑巴坦、舒巴坦对头孢曲松钠的抑酶保护率分别为21.01%、25.51%,对头孢噻呋钠的抑酶保护率分别为34.99%、35.49%.     

菌株Shigella flexneri FB5响应氟磺胺草醚蛋白质组学分析

为明确氟磺胺草醚降解菌的蛋白质组学相关机理,针对实验室前期筛选得到的高效降解菌Shigella flexneri FB5,在明确菌株对氟磺胺草醚高效降解的基础上,研究进行了蛋白提取和双向电泳试验。结果发现氟磺胺草醚诱导下菌株差异蛋白点13个,使用质谱技术对它们进行鉴定。通过生物信息学比对得到其功能,并对目标蛋白的基因进行PCR扩增与测序。结果表明:研究得到氟磺胺草醚诱导下菌株两个相关基因,测序后发现基因F3序列与E.coli结合蛋白dps基因同源性是100%,基因F6序列与沙门氏菌肠溶亚种血清变型索菲亚菌S1635外膜蛋白基因和E.coli SYW004外膜蛋白基因A相似度是87%,同时对这两个基因所在家族功能进行分析,并且推测出基因的理化性质。     

福氏志贺菌主动外排基因acrB的克隆与序列分析

以福氏志贺菌2a型菌株基因组为模板,经PCR扩增得acrB基因,将该基因克隆到pMD18-T Vector载体,将重组质粒进行PCR和酶切鉴定及序列测定.结果表明:测定序列与Genbank收录的福氏志贺菌参考序列同源性为99.7%,与大肠杆菌的acrB基因序列比较分析,序列同源性在98%~99%之间,说明志贺菌主动外排基因acrB在碱基序列和编码的氨基酸序列上均与大肠杆菌有很高的同源性,它可能是志贺菌引起多重耐药的主要原因.     

福氏志贺菌2型多重PCR检测方法的建立

为构建一种快速、高效、特异性强的检测与鉴定福氏志贺菌的多重PCR方法,本试验以不同血清型志贺菌中的特有基因ipaH、gtrⅡ、gtrⅩ和R002为扩增目标来设计相对应的引物,在同一PCR体系中对福氏志贺菌进行检测。通过一系列探索及对反应条件的优化调整,最终建立了可在多种细菌中快速检测出福氏志贺菌2型（2a和2b）的方法。结果表明,应用多重PCR可快速、高效、准确的对福氏志贺菌进行验证和鉴别,对于预防实验室菌种污染和志贺氏菌病的临床诊断与治疗有着重要意义。     

香连丸抗菌作用试验研究

[目的]分析香连丸药效成分（黄连、木香、吴茱萸）不同配方的抗菌作用。[方法]以黄连、木香、吴茱萸为供试药物,志贺氏痢疾杆菌、福氏痢疾杆菌、宋内氏痢疾杆菌、金黄色葡萄球菌为供试菌种,研究3种药物不同配方对4种细菌的抗菌作用。[结果]木香、吴茱萸、木香＋吴茱萸对4种细菌均无抗菌作用,各配方供试药液对宋内氏痢疾杆菌均无抗菌作用;黄连＋木香、吴茱萸＋木香对志贺氏痢疾杆菌和福氏痢疾杆菌的抗菌作用较黄连＋木香＋吴茱萸弱;黄连＋木香对金黄色葡萄球菌具有杀菌和抗菌作用,而黄连＋吴茱萸、黄连＋木香＋吴茱萸对金黄色葡萄球菌的抗菌作用均较弱。[结论]丸剂加味香连丸的药效最佳。