锯缘青蟹苗池微生态环境影响因素的初步探讨

通过对锯缘青蟹苗池微生态环境和水质环境的全过程检测,探讨了总菌数、弧菌数及弧菌数/总菌数的消长规律,并对苗种培育阶段涉及的各种外源因素及控制苗池微生态环境的相关手段的有效性作了初步的探讨。结果表明:苗池水体中总菌数在Z1~Z2少量添加水不换水阶段,呈相对稳定状态,进入Z3后总菌数逐渐增加,最高达3.5×106cfu/m l;弧菌数在Z1培育阶段出现2×102cfu/m l激增至5×104cfu/m l的峰值,第二峰值出现在Z5阶段,达6×105cfu/m l;弧菌数/总菌数比值在育苗起始时仅为0.4%,之后迅速升至30%~40%,在Z5阶段,由于弧菌数量急剧上升,达到50%的高比值;NH4-N与COD检测值在育苗过程中变动较大,两者与弧菌数/总菌数比值呈正相关关系。现行育苗方式中对苗池微生态环境产生影响的主要因素是苗种培育密度,海水、饵料的处理方式和抗生素;净化功能菌和蛭弧菌应用于育苗水体具有抑制弧菌繁殖的效果。     

Assessment of dietary lecithin and cholesterol requirements of mud crab, Scylla serrata, megalopa using semi-purified microbound diets

The effects of varying dietary lecithin and cholesterol levels on growth, development and survival of mud crab, Scylla serrata, megalopa were evaluated using six semi‐purified, microbound diets formulated to be iso‐energetic and containing three levels of supplemental lecithin (0, 20 and 40 g kg⁻¹ diet dry weight) and two levels of supplemental cholesterol (0 and 7 g kg⁻¹ diet dry weight). Fifteen megalopa were reared individually in each treatment and the nutritional value of diets was assessed on basis of mean dry weight and mean carapace width of newly settled first crab stage, as well as development time to the first crab stage and overall survival. A significant interaction between supplemental dietary lecithin and supplemental dietary cholesterol was found for final mean dry weight of newly settled crabs, and highest survival (60%) was recorded for megalopa fed diets containing the highest levels of dietary lecithin (39.7–44.1 g kg⁻¹) (diet 5 and 6) regardless of whether diets were supplemented with cholesterol; this rate of survival was identical to that of megalopa fed live Artemia nauplii. The results indicate that supplemental dietary cholesterol may not be essential for mud crab megalopa when fed diets containing sufficient levels of supplemental dietary phospholipids.     

青蟹的营养需求研究及其配合饲料研制

青蟹属（Scylla）有锯缘青蟹（Scylla serrata），拟穴青蟹（S．paramamosain），紫螯青蟹（S．tranquebarica）和榄绿青蟹（S．olivacea）等4个种。我国以拟穴青蟹占绝对优势，它有个体大、生长快、适应性强、肉味鲜美、营养丰富等特点，已成为具有重要经济价值的海水养殖蟹类之一。     

江蓠与新对虾、青蟹混养试验

细基江蓠繁枝变种与新对虾，青蟹混养试验结果表明：（１）细基江蓠繁枝变种生长的最适温，盐度分别为１７－３０℃和１７－２９‰，这一温，盐度范围也适合新对虾和青蟹的生长；鱼塘海水的温，盐度变化与沿海不同，因此，移植野生江蓠到鱼塘养殖时要考虑这一特点。（２）江蓠在不同的生长季节的最适生长水层是不同的。（３）江蓠的主要有效氮是ＮＨ４＾＋，而新对虾，青蟹的排泄物可分解出大量的ＮＨ４＾＋。这样，江蓠与新对虾，青     

锯缘青蟹促雄腺发育的组织学研究

采用组织切片技术，以OlympusBH-2型显微镜对锯缘青蟹(Scylla serrata)促雄腺的发育进行观察。结果显示，促雄腺附着于射精管近末端，发育过程可分为4期：Ⅰ期促雄腺短小，腺细胞数量少；Ⅱ期促雄腺呈明显的索状；Ⅲ期促雄腺体积达到最大，一些部位膨大增生；Ⅳ期促雄腺不再生长，腺体急剧退化。腺细胞具有2种类型：A型细胞，核圆、异染色质少、胞质染色浅；B型细胞，核扁平、异染色质多，细胞染色深、界限不清晰，有时细胞质消失。促雄腺发育过程中，A、B型细胞数量、比例发生变化。B型细胞为A型细胞完成分泌后的存在形式，B型细胞比例反映了促雄腺分泌活动的状况。锯缘青蟹促雄腺发育和精巢成熟具有一定的相关性。     

拟穴青蟹卵泡抑素相关蛋白基因的克隆和表达分析

卵泡抑素相关蛋白(follistatin related protein,FRP)是一种细胞外基质糖蛋白,该蛋白参与细胞增殖、迁移、组织重塑、胚胎发育、细胞间相互作用等多种生理过程。迄今甲壳动物FRP的研究尚未见诸报道。实验采用RACE技术首次克隆了拟穴青蟹FRP基因部分cDNA序列。该序列长度1 948 bp,FRP肽段含有484个氨基酸残基,包括KAZAL-FS结构域、EFh结构域和两个Ig结构域。系统进化树显示拟穴青蟹FRP基因的分子进化地位与其生物学分类地位一致。半定量PCR及荧光定量PCR结果表明,FRP基因在拟穴青蟹的胸神经团、脑和卵巢中表达。FRP基因在卵巢发育各期的表达量各不相同,卵巢未发育期最高,据此我们推测FRP具有抑制卵巢发育的作用。     

锯缘青蟹卵巢发育的组织学观察

根据锯缘青蟹卵巢的外部形态和内部组织学特征,卵巢发育可以划分为六个时期:未发育期、发育早期、发育期、将成熟期、成熟期和排卵后期。在发育早期,多数卵母细胞胞质中有多个嗜酸性液泡,这种结构在其他十足类卵母细胞中较少见。少数个体在发育早期发生卵母细胞全面退化,这种现象可能是缺乏交配或饥饿造成的。     

拟穴青蟹GRP78基因的克隆与应激表达

葡萄糖调节蛋白78(glucose regulated protein 78 ku,GRP78)是热休克蛋白70家族成员之一,在调节蛋白质折叠和维持内质网稳态过程中起着分子伴 侣作用。采用RT-PCR、RACE等技术,首次从拟穴青蟹获得了GRP78的cDNA全长序列。该序列全长2 284 bp,开放阅读框(ORF)为1 962 bp,编码653个氨基酸残基。 同源分析显示,该基因编码的蛋白含有HSP70家族的签名序列,C末端为内质网蛋白滞留信号KDEL,与其他物种具有很高相似性。实时荧光定量PCR结果表明,GRP78 基因在拟穴青蟹多个组织中均有表达。第一期仔蟹在不同的温度和盐度下暴露12 h后,GRP78基因表达量随环境温度升高而增加;在高盐(30)条件下GRP78表达量 较高,进而推测拟穴青蟹GRP78参与蛋白质折叠和环境胁迫的应答。     

利用AFLP技术筛选锯缘青蟹性别差异DNA片段

采用高盐和酚氯仿异戊醇 (PCI)结合法提取DNA ,利用AFLP技术 ,应用 5 2个引物组合 ,检测了锯缘青蟹 (Scyllaser rata)雌雄基因组DNA的多态性 ,筛选与锯缘青蟹性别相关的分子标记。实验中共扩增出 4 312条带 ,筛选出候选差异DNA片段 74 8条。这些差异DNA片段的获得 ,为研究锯缘青蟹性别的分子标记奠定了基础     

拟穴青蟹幼蟹耗氧率和窒息点的研究

在盐度20、温度28.0±0.2℃条件下,采用密封流水方法进行了拟穴青蟹幼蟹耗氧率和窒息点的研究。结果表明:拟穴青蟹Ⅴ期幼蟹的平均耗氧率高于Ⅵ期幼蟹,Ⅴ期幼蟹的窒息点也高于Ⅵ期幼蟹。其中,当蟹苗体质量为1.00±0.22 g时,耗氧率为0.437 2±0.083 mg/(g.h),耗氧量0.423 7±0.080 mg/(ind.h),窒息点为0.716 0±0.017 mg/L;当蟹苗体质量为1.81±0.30 g时,耗氧率为0.381 6±0.081 mg/(g.h),耗氧量0.671 7±0.140 mg/(ind.h),窒息点为0.698 7±0.011 mg/L。实验发现,拟穴青蟹幼蟹的耗氧率和耗氧量具有比较明显的昼夜变化规律,其峰值出现在20∶00及02∶00左右,谷值出现在08∶00及16∶00。研究结果可为拟穴青蟹养殖生产中制定合理的苗种放养密度和养殖工艺提供参考依据。