金针菇杂交菌株的同工酶标记与菌株特性

采用垂直平板板聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＰＡＧＥ）法，利用酯酶同工酶谱和可溶性蛋白ＰＡＧＥ表型的差异，对金针菇的杂交后代作了遗传分析和鉴定。结果表明，金针菇杂交亲本及其后代抽工酶箐型表现明显的多型性。４个杂交菌株的同工酶亲本有较明显的差异。２处生化（ＥＳＴ，ＰＲＯ）标记在杂交菌株中均表现有不同程度的遗传互补性，并有新的酶带产生。结合同工酶酶谱和标记杂合位点数目对杂种优势可进行早期预测和栽培验证。     

雪莲类PEBP基因在毕赤酵母中的表达及鉴定

为了构建雪莲类PEBP基因真核表达载体,在毕赤酵母中表达并鉴定.将雪莲类PEBP基因开放阅读框序列克隆到真核表达载体pPIC9k上,转化到毕赤酵母(Pichia pastoris)GS115细胞内,利用筛选到的Muts(methanol utilization slow)重组酵母株进行表达,经SDS-PAGE分析,表达产物置于低温条件下进行抗冻试验.结果在培养基上清液中含有一明显的特异性蛋白条带,大小为20 kD,与预期相符,上清液抗冻检测表明PEBP具有一定的抗冻性,表明该基因在毕赤酵母GS115中得到了表达.该研究成功构建了真核表达载体pPIC9k-PEBP,获得了表达产物,并为进一步研究雪莲类PEBP基因的抗冻功能打下基础.     

天山雪莲叶片全长cDNA文库的构建

以天山雪莲(Saussurea involucrataKar.et Kir)幼嫩叶片为研究材料,利用CreatorTMSMARTTMcD-NA Library Construction技术构建了天山雪莲叶片全长cDNA文库,原始文库滴度达3.93×105cfu/mL,文库插入片段多在1 000 bp左右。随机挑取10个克隆进行测序,通过生物信息学初步分析表明,100%为全长cDNA,大部分可以在GenBank中找到同源序列。天山雪莲叶片全长cDNA文库的构建为雪莲基因资源保存和植物抗寒机理的研究奠定了基础。     

新疆雪莲生境与规范化种植技术研究

为促进雪莲种植技术在新疆地区顺利推广,中药材产业的顺利发展,以及高山地区的生态顺利恢复,开展了雪莲在新疆地区的生物学特性研究、生态作用分析和规范化种植技术研究,形成了较为系统的雪莲规范化种植技术体系,主要包括育苗、移栽、田间管理及病虫害防治等方面的内容。     

藏雪莲水提取物对小白鼠组织中一氧化氮含量的影响

[目的]研究藏雪莲水提取物对小白鼠组织中一氧化氮含量的影响,为藏雪莲抗缺氧机制的研究提供参考。[方法]将100只小白鼠随机分为高剂量组、中剂量组、低剂量组和对照组,连续24 d分别灌服不同剂量的藏雪莲水提取物和生理盐水,然后处死小白鼠快速采取肝、肺、心肌和骨骼肌,测定各组织内一氧化氮的含量。[结果]结果表明,高剂量组的肝、肺和骨骼肌和中剂量组的肝中一氧化氮含量中显著高于对照组和低剂量组,差异极显著(P<0.01);中剂量组的肺和骨骼肌中一氧化氮含量高于对照和低剂量组,差异显著(P<0.05);对照组的心肌中一氧化氮含量高于各药物组,差异极显著(P<0.01)。[结论]藏雪莲能够提高小白鼠肝、肺和骨骼肌中一氧化氮的含量,降低心肌中的含量。     

天山雪莲根边缘细胞特异蛋白BCsp基因的克隆及转化

根据石河子大学农业生物技术重点实验室天山雪莲cDNA文库单克隆测序结果,发现编号为123的单克隆具有1个843 bp的完整的ORF,编码281个氨基酸。B1astx分析表明该cDNA编码的蛋白与豌豆根边缘细胞特异蛋白具有很高的同源性,且具有相同的结构域,命名为BCsp(暂无登录)。以cDNA文库单克隆为模板,通过PCR克隆得到BCsp。以中间载体pUCCRNAi和植物表达载体pCAM2300-35S-Ocs为基础,成功构建了植物RNAi表达载体pCAB,转化天山雪莲愈伤组织获得转基因雪莲苗。     

新疆天山雪莲组培快繁技术的建立

[目的]探讨新疆天山雪莲组培快繁技术。[方法]以新疆雪莲切除根部的无菌苗,或无菌苗的真叶,或者直接采集野生的新疆雪莲幼嫩部位作外植体,进行愈伤组织诱导培养及丛生芽分化、丛生芽增殖继代培养、生根培养和组培苗移栽试验。[结果]新疆天山雪莲外植体在MS+NAA 2 mg/L+6-BA 0.5 mg/L和MS+6-BA 1.0+NAA 0.1 mg/L+2,4-D 0.1 mg/L培养基上可诱导产生大量的丛生芽;在MS+6-BA 0.5 mg/L+NAA 2.0 mg/L和MS+6-BA 0.5 mg/L+NAA 0.01 mg/L培养基上交替培养,丛生芽继代快速增殖率达1.0∶3.5;组培苗在MS+NAA 0.2 mg/L培养基上诱导生根,生根率达83%;生根的雪莲组培苗经炼苗和移栽后成活,生长健壮。[结论]该研究建立的快繁技术为雪莲野生资源保护和产业化发展开拓了一条有效途径。     

新疆雪莲体外直接器官发生的快繁研究

以新疆雪莲无菌苗的下胚轴、子叶、真叶和根为外植体,在MS基本培养基上培养,探索新疆雪莲体外直接器官发生的快繁途径。结果表明:新疆雪莲不同外植体直接再生不定芽的效果不同,以真叶为外植体,直接再生芽频率最高,在MS 6-BA1.0 mg/L(单位下同) NAA0.1 2,4-D0.1上,30 d芽诱导率可达66%;在MS 6-BA0.5 NAA0.05上,芽的增殖生长效果好;在1/2MS NAA0.1上,25 d内生根率达84.7%;在珍珠岩∶腐叶土为1∶3的基质中炼苗,成活率达89.1%。     

新疆雪莲多倍体的诱导初探

用秋水仙素和2%二甲基亚砜共同处理新疆雪莲种子、胚根和茎段,以诱导多倍体雪莲.结果表明,茎段经过100 mg·L-1秋水仙素处理3 d诱导效果最佳,同时,离体培养其嵌合体苗茎段及叶片,诱导不定芽生成,获得了四倍体细胞比例达到90%以上的植株.     

新疆雪莲组织培养体系的优化

以新疆雪莲无菌苗的根、茎、叶为外植体,对各种不同激素配比条件下新疆雪莲的再生体系进行了探讨,结果表明:培养基MS+6-BA 0.1 mg/L + NAA 2.0 mg/L对愈伤组织诱导效果较好;而再生芽的诱导培养基为MS+6-BA 0.4 mg/L + NAA 0.05 mg/L+水解乳蛋白500 mg/L;生根培养基为1/4MS + NAA 0.3 mg/L.