转移抗猪瘟病毒核酶基因兔的研究

采用显微注射法，将构建的绵羊金属疏因（ｏＭＴ）基因启动子与抗猪瘟病毒核酶（ＨＣＶ－Ｒｉｂｏｚｙｍｅ．ＨＲ）基因融合的质粒ｐＭＨＲ＿（３２）线性ＤＮＡ分子约２００～４００个基因拷贝导入兔原核胚的雄原核中，１５９枚导入基因胚移植给９只受体兔，产仔２２只，移植成活率为１３．８％。２２只仔兔经聚合酶链式反应（ＰＣＲ）和核酸探针杂交检测，６只体内整合有外源目的基因，整合率为２７．３％。再用１００个半数反应量（ＲＩＤ＿（５０））的猪瘟病毒Ｃ系兔化弱毒兔体攻毒，４只外源基因整合的实验兔能完全或部分抵抗ＨＣＶ弱毒攻击，不产生或无明显发热反应；而对照兔和６只ＨＲ基因未整合的实验兔不能抵抗ＨＣＶ弱毒攻击，出现特征性的稽留热型。逆转录聚合酶链式反应（ＲＴ－ＰＣＲ）和ＲＮＡ探针杂交检测４只转基因兔，两只肝中表达出ｏＭＴ－ＨＲｍＲＮＡ。认为微注射导入的外源ＨＲ基因在兔体内得到了整合和表达     

鸡传染性法氏囊病病毒Gt株感染性分子克隆的构建

 【目的】建立高效鸡传染性法氏囊病病毒（IBDV）拯救平台，为深入研究该病毒基因组的结构与功能奠定基础。【方法】在IBDV Gt株全基因组中引入分子标签（A节段：EcoR V酶切位点；B节段：PstI酶切位点）。在基因组两端分别引入锤头状核酶结构（HamRz）和丁肝病毒核酶结构（HdvRz)。将带有分子标签和核酶结构的IBDV基因组插入载体pCAGGS的β肌动蛋白启动子下游，构建IBDV感染性克隆pCAGGmGtAHRT和pCAGGmGtBHRT，LipofectamineTM2000介导共转染DFI细胞，进行病毒拯救研究。 【结果】 构建的IBDV感染性克隆可在DFI、Vero/E6、Vero/P12等3种细胞上高效拯救出病毒。RT-PCR、间接免疫荧光、电镜等均检测到了拯救的IBDV，且存在分子标签。拯救毒在CEF上能产生特有的砂砾状CPE，且TCID50与亲本毒差异不显著，具有相似的生物学特征。【结论】构建的RNA聚合酶ⅢBDV拯救系统高效、稳定、简便、经济，且具有良好的细胞普适性。     

家兔微注射基因胚胎自体移植和异体移植的比较试验

冲取３２只超排或自然发情配种的母兔早期胚胎４２７枚，选其中导入抗猪瘟Ｒｉｂｏｚｙｍｅ基因后的３４７枚优质胚胎分组移植不同受体。第一组将９３枚微注射卵移植到７只冲卵后的供体输卵管内，６只妊娠并产仔３２只。经ＰＣＲ检测３２只仔兔中有２只整合了外源基因。第二组将２５４枚微注射卵移植异体受体１３只，妊娠６只并产仔２０只。经ＰＣＲ检测２０只仔兔中有２只整合了外源基因。     

植物反义寡核苷酸的研究进展

反义寡核苷酸包括反义ＲＮＡ、反义ＤＮＡ和Ｒｉｂｏｘｙｍｅ。它能特异地拮抗内源或外源基因的表达，这为研究某特定基因功能提供了更为有效的方法，为培育抗病植株、调控次生代谢和农艺性状改良提供了可能途径。特定的化学修饰，可以啬反义寡核苷酸抗病毒和对其他特定基因的表达抑制活性。