文心兰HSP70基因的克隆及表达分析

为研究文心兰热激蛋白70基因（命名为OnHSP70）的分子特性及表达特点,以文心兰‘柠檬绿’（Oncidium hybridum ‘Honey Angel’）为材料,采用RT-PCR技术克隆OnHSP70,利用生物信息学方法分析其分子特性,通过qRT-PCR技术分析其在不同组织及不同非生物胁迫处理下的表达特点。生物信息学分析表明：该基因开放阅读框为1944 bp,编码647个氨基酸,翻译的蛋白为稳定蛋白,属于HSP70超家族,其蛋白二级结构由41.11%的α-螺旋、17.77%的延伸链、7.73%的β-转角和33.38%的无规卷曲组成,具有2个高度保守的功能域。聚类分析表明：该蛋白与铁皮石斛和深圳拟兰的HSP70亲缘关系较近。qRT-PCR分析表明：文心兰HSP70在4种不同组织器官中具有表达差异性,在花中的表达量最高;高温处理后基因的表达量明显上升;40 ℃高温胁迫4 h时表达量达峰值;茉莉酸甲酯及水杨酸处理时表达量呈现下调响应。本研究为后期该基因功能研究及提高文心兰对高温的适应性提供理论基础。     

海南岛文心兰、石斛兰病虫害调查

对海南岛文心兰、石斛兰病虫害进行初步调查,查出13种病害及9种虫害,其中真菌性病害9种,细菌性病害2种,病毒病2种。在所查出的病害中,疫霉菌、镰刀菌、欧氏杆菌引致的病害危害非常严重。     

文心兰组织培养基激素选择及组培苗的移植管理技术

以文心兰杂交新品种星战、达卡、爪哇的茎尖及花蕾为组培材料，对适合外植体的原球茎增殖、分化的培养基、培养方式进行试验研究。对培养基激素进行筛选试验结果表明：利于原球茎诱导增殖的培养基为1／2MS 6-BA5．0mg／L NAA0．5mg／L；利于不定芽增殖的培养基为1／2MS 6-BA2．0mg/L NAA0．1mg／L；利于生根的培养基为1／2MS NAA0．5mg／L。其试管苗移植的栽培基质以小石子 小树皮(1：1)为佳。并从控制温、湿度，采取合理的水肥管理措施，进行病害防治等方面，介绍了文心兰组培苗的移植管理技术。     

29份文心兰种质资源亲缘关系的ISSR分析

以29份文心兰种质资源为材料,利用ISSR 分子标记开展亲缘关系分析.结果表明：10个ISSR 引物共扩增出144条DNA 条带,平均每个引物扩增14.4条,其中多态性谱带占124条,多态性比率为86.11%;遗传相似系数为0.34～0.91,聚类分析将29份文心兰种质在简单相似系数0.56处分成3大类群.ISSR 分子标记聚类结果与传统分类基本一致,与花器官花色具有密切的关系,初步证明利用ISSR 分子标记技术对文心兰进行亲缘关系分析的可靠性.     

文心兰新品种选育及比较试验

以文心兰南茜品种为原材料,筛选出自然变异优良单株博大1号,经组培扩繁获得新种苗,通过品种对比试验,对选育的新品种进行性状鉴定;再以引进的其他6个不同来源(品种)的文心兰产品为对照,在大田生产统一管理下,对植株生长、开花特性、切花等级、病虫害等进行比较。结果表明:7种材料中,博大1号整体综合性状优良,植株长势较为粗壮,全年感病率最低,仅3.4%,当年开花率最高,达81.96%,且具有较高的切花等级;切花后从新芽露出到花朵开放需要时间最短,仅175.1 d,切花株抽芽数最多,双芽以上株比例达92.5%,具有最高产的潜力。     

遮光处理对文心兰生长发育和生理指标的影响

以文心兰切花品种‘金辉’为试材,研究了在遮光率分别为60%、70%、80%、90%条件下其生长发育和生理指标的变化情况,分析了切花文心兰生长发育和生理指标与光照条件的关系,以期为筛选适宜光照条件提供参考。结果表明:持续60%遮光率显著降低花序梗长,且在夏季强光照时叶绿素含量显著降低,相对电导率显著上升;持续90%遮光率显著降低茎叶中可溶性糖、还原糖含量,同时假鳞茎长、假鳞茎茎围、开花率、花序长、分叉数及花朵数也显著降低;持续70%遮光率不仅开花率、花序长、分叉数及花朵数最高,且在夏季强光照时可溶性糖、还原糖的累积量最高,利于文心兰切花栽培。     

文心兰类原球茎的诱导与增殖技术的优化

以文心兰试管苗叶片为材料,在(25±1)℃,光照强度24～30μmol/m2.s,光照时间10 h/d下研究类原球茎的诱导和增殖技术。结果表明:①蔗糖适于作为类原球茎诱导的碳源,类原球茎诱导率52%,单位叶片类原球茎2.725个;②附加3～5 mg/L的Ad处理有利于类原球茎诱导(诱导率57%,单位叶片类原球茎数量3.725～4个);③6-BA是影响文心兰类原球茎增殖的主导因子,中等浓度的6-BA(3.0 mg/L)有利于类原球茎的增殖,增殖率(15.29)极显著高于其它水平;④培养基1/2MS+6-BA 3.0 mg/L+2,4-D 1.0 mg/L+NAA 0.4 mg/L+蔗糖20 g/L最有利于文心兰类原球茎的增殖,增殖率最高(15.95),极显著高于其它处理组合。     

文心兰EMS离体诱变及再生苗RAPD检测

采用3种浓度的EMS对离体培养的文心兰类原球茎薄切片进行不同时间的诱变处理研究.发现EMS使部分薄切片褐化死亡,再生类原球茎的生长受到抑制,再生苗数量减少;EMS的伤害作用随诱变剂浓度的提高和处理时间的延长而加重,但对试管苗的生长影响并不大.采用10条RAPD引物进行的PCR检测结果表明,经EMS处理的再生苗DNA序列...     

文心兰种质遗传多样性的SRAP分析

利用SRAP标记分析文心兰部分种质资源的遗传多样性，采用30对引物组合对33份文心兰种质进行扩增，从中筛选出19个多态性较高的引物组合，共产生277条多态性条带，平均每个引物组合产生14.6个多态性条带，相似系数在0.280～0.927。通过聚类分析发现，在值为0.37时，可将33份文心兰种质划分为4大类群。第Ⅰ类厚叶大花品种，第Ⅱ类为厚叶小花品种，第Ⅲ、第Ⅳ类均为类薄叶品种。 结果表明，文心兰种质的聚类与其遗传背景有很大的关系。