葡萄风信子MaMYB1基因的克隆及表达分析

【目的】克隆葡萄风信子MYB转录因子基因(MaMYB1),并对其进行生物信息学和表达模式的分析。【方法】以开蓝色花的葡萄风信子品种"亚美尼亚"为材料,利用RACE技术得到其MaMYB1基因cDNA全长,对其进行生物信息学分析,利用酵母单杂交方法检测其转录激活活性,并用实时定量PCR方法分析该基因在根、茎、叶及不同发育时期花中的表达特性。【结果】通过RACE-PCR,克隆得到953bp的MaMYB1基因,其开放阅读框长750bp,编码249个氨基酸,推测的蛋白分子质量约为27.7ku,理论等电点为9.3。MaMYB1基因编码的蛋白序列中具有2个典型的MYB结构域R2和R3,且在R3结构域下游含有与BHLH蛋白结合的[D/E]Lx2[R/K]x3Lx6Lx3R结构域。MaMYB1与玉米ZmP1及拟南芥MYB12的关系较近。酵母单杂交检测表明:MaMYB1具有转录激活活性。实时定量PCR分析结果表明:MaMYB1在不同组织中均有表达,以在花中表达量较高,且在花不同发育时期表达量差异显著。【结论】从葡萄风信子中克隆到1个新的MYB基因MaMYB1;推测该基因可能参与了葡萄风信子花发育过程的调控。     

用猪囊尾蚴分段抗原对猪囊虫病生前的快速诊断

本试验采用硫酸铵分段沉淀法,将猪囊尾蚴的蛋白质分离为:粗抗原、p25、p25—55、p55—80、s80等五种抗原、采用平板凝集、试管凝集、琼脂扩散等方法,分别进行试验和分析,其结果以p25—55抗原效果为佳,对猪囊尾蚴病的生前诊断具有实用价值。     

葡萄风信子种球繁殖与花期调控

对葡萄风信子的田间试验研究表明,由不同等级的种球长成的植株,生长表现出一定的规律性,即种球越大出苗越早、越整齐,单株叶面积更大,花葶更多,花与植株更具观赏性。通过对种球繁殖系数和产量增长百分率的计算,明确了不同等级种球的繁殖情况。在5℃下,将种球分别冷藏7周、8周、9周、10周、11周,结果表明种球冷藏对葡萄风信子开花有促成作用,冷藏时间越长,开花越早。研究可对葡萄风信子种球生产与商品花节日上市提供技术指导。     

葡萄风信子的研究进展

对国内外目前葡萄风信子的种质资源、组织培养、栽培措施以及转基因等方面的研究进行了综述。并对葡萄风信子研究中存在的问题以及葡萄风信子的研究前景进行了阐述。     

葡萄风信子外植体直接再分化花芽和营养芽的研究

【目的】探索葡萄风信子直接再生花芽体系的建立,为葡萄风信子外植体直接再分化花芽研究提供参考。【方法】以葡萄风信子‘亚美尼亚’花蕾外植体为材料,MS为基础培养基,在均添加0.1mg/L 2,4-D的条件下,分别用不同质量浓度的6-BA(0,0.5,1,2,3,4mg/L)、GA3(0,0.5,1,2,3,4mg/L)和玉米素(0,0.05,0.1,0.5,1,2mg/L)处理,筛选出诱导花芽的最佳激素及最适质量浓度;以MS+6-BA(或玉米素)2mg/L+2,4-D 0.1mg/L研究开花时花瓣切片、花葶、叶片以及叶片诱导的愈伤组织诱导直接再分化花芽的情况。【结果】用MS+2mg/L 6-BA+0.1mg/L 2,4-D处理葡萄风信子花蕾时,可在花蕾基部直接再分化出具有蓝色的花芽,且花芽分化率最高,达60.2%。花葶、花瓣切片、叶片和愈伤组织在同样条件下只能诱导产生愈伤组织、营养芽。说明花蕾是诱导花芽分化的最佳外植体,且最适培养基为MS+2mg/L 6-BA+0.1mg/L 2,4-D。【结论】建立了葡萄风信子外植体直接再分化花芽体系。     

管理对华灰早熟禾生物量及株高分形关系的影响

在河北省围场县红松洼草原生态系统自然保护区研究管理条件对华灰早熟禾地上生物量与株高分形关系的影响.结果表明,华灰早熟禾生物量的积累规律具有自相似性特征.梯度生长是华灰早熟禾生物量积累的规律.在实验区,生物量与株高的分形关系在生长季节存在明显的差异,表明放牧压能增加华灰早熟禾生物量积累规律的复杂性.缓冲区每年割草1次对华灰早熟禾生物量和株高分形关系没有影响.     

葡萄风信子叶片、鳞茎不定芽再生体系的建立

以葡萄风信子的叶片、鳞茎作为外植体,在MS基本培养基上培养,研究葡萄风信子的再生体系的建立。结果表明:以MS 2,4-D 1.0 mg.L-1 AC 0.1%诱导叶片、鳞茎形成愈伤组织的效果较好,叶片诱导频率达80%,鳞茎达100%;再分化培养以MS AC1.0 g.L-1效果较好,达到100%;以1/2MS附加IBA 1mg.L-1并添加0.1%活性炭的培养基诱导生根效果较好,其生根率达65%。移栽至珍珠岩与营养土(3∶1)的混合基质中,成活率达96%。     

葡萄风信子的研究进展

对国内外目前葡萄风信子的种质资源、组织培养、栽培措施以及转基因等方面的研究进行了综述。并对葡萄风信子研究中存在的问题以及葡萄风信子的研究前景进行了阐述。     

葡萄风信子基因转化受体系统的建立

以葡萄风信子(Muscari botryoides Mill)品种"紫葡萄"(Cantat)的鳞茎和叶片为外植体,通过植物组织培养再生系统的建立和抗生素敏感性试验,建立了稳定的葡萄风信子基因转化受体系统。结果表明,葡萄风信子的鳞茎和叶片均可被诱导形成大量的愈伤组织;叶片诱导愈伤组织的最适培养基为MS+0.6 mg/L 2,4-D+0.1mg/L 6-BA,其诱导频率可达100%;鳞茎诱导愈伤组织的最适培养基为MS+3.0 mg/L 2,4-D+0.3 mg/L 6-BA,其诱导频率达91.2%;愈伤组织分化不定芽的最适培养基为MS+2.0 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA,生根最适培养基为1/2 MS+1.0 mg/L 6-BA+0.1%AC;筛选卡那霉素的临界质量浓度为60 mg/L,羧苄青霉素的适宜质量浓度为300 mg/L。     

葡萄风信子体细胞胚再生体系的建立及抗生素敏感性试验

【目的】建立葡萄风信子体细胞胚再生体系,通过外部形态判断愈伤组织的类型,并探索胚性愈伤组织对头孢霉素和潮霉素的敏感性。【方法】以多年生葡萄风信子‘蓝穗’的盛花期叶片为试验材料,通过正交试验筛选胚性愈伤组织诱导时适宜的植物生长调节剂质量浓度及配比;石蜡切片法观察不同愈伤组织内部的细胞结构,诱导具有胚性的愈伤组织形成体细胞胚,进而获得再生植株;在培养基中加入头孢霉素或潮霉素,观察2种抗生素对胚性愈伤组织生长和体细胞胚发生的影响。【结果】葡萄风信子胚性愈伤组织诱导的适宜培养基为MS+0.5mg/L 2,4-D+0.1mg/L TDZ,在该培养基上诱导率高达100%。石蜡切片观察发现,外观质地紧密、节状或块状的愈伤组织为胚性愈伤组织。胚性愈伤组织在不含任何激素的MS培养基上可诱导形成体细胞胚,在光照条件下体细胞胚伸长并生根,最后形成成熟小鳞茎。头孢霉素质量浓度超过500mg/L时,葡萄风信子胚性愈伤组织的生长和体细胞胚的发生受到强烈抑制;引起胚性愈伤组织褐变的潮霉素临界质量浓度为90mg/L。【结论】建立了葡萄风信子体细胞胚再生体系,90mg/L潮霉素可作为区分转化与非转化葡萄风信子胚性愈伤组织的有效选择压。