Immune responses and enhanced disease resistance in Chinese drum, Miichthys miiuy (Basilewsky), after oral administration of live or dead cells of Clostridium butyrium CB2

Clostridium butyrium CB2 isolated from chickens was tested as a potential fish probiotic in the Chinese drum, Miichthys miiuy . Fish were fed live (CB), dead CB2 (D-CB) cells (10⁸ cells g⁻¹) or spent culture supernatant (SCS), for 30 days and challenged with Vibrio anguillarum or Aeromonas hydrophila . Survival was higher in both the CB and the CB-D fed groups, but the SCS group was not significantly different from the control. After feeding live or dead CB2 cells, there was increase in phagocytic activity of the head kidney macrophages, the lysozyme activity of serum and gut mucosa and immunoglobulin (Ig) level. The SCS group showed no obvious change in immune parameters. The results suggest that live or dead Clostridium butyrium CB2 has an immunomodulatory effect on fish.     

春季繁殖鮸鱼亲鱼血清中雌二醇、孕酮和睾酮水平变化分析

模拟鮸鱼自然繁殖生境,采用调控水温、光照,并结合注射生物激素,促使鮸鱼在春季达到性成熟,以春季繁殖鮸鱼亲鱼为材料,检测了其血清中雌二醇(E2)、孕酮(P)和睾酮(T)变化情况。结果表明:1~3月,E2、P和T含量很低;从4月份开始E2、P和T含量逐渐上升;5月份E2、P和T的含量急剧上升,最大值分别到达416.8±254.6 pg/ml、1.75±0.41 ng/ml和0.39±0.18 ng/ml;6月份E2、P和T维持较高的含量;多次催产后到7月份,E2、P和T明显下降,均处于较低水平。说明E2、P和T的检测较准确地反映了人工控制条件下春季繁殖鮸鱼亲鱼的生殖生理活动。     

(鱼免)鱼亲鱼培育及其人工繁殖的研究

采用自然苗培育成的1龄（鱼免）鱼,通过“春肥、夏育、秋繁、冬保”8字方针培育成亲鱼,性成熟率达到95%.经LHRH-A3 0．8～1．8μg／kg催产并放人产卵池自行产卵,获产率达到96．83％。获受精卵650万余粒,受精率达到52％。受精后21．8h孵化出鱼苗,孵化率达到70％。     

鲵鱼消化道细菌群落结构及多样性初步研究

采用常规分离纯化与构建16S rDNA克隆文库相结合的方法对（鲵）鱼（Miichthys miiuy）消化道细菌多样性进行了初步研究.结果表明,（鲵）鱼消化道各部位可培养细菌的菌落数量从大到小依次为前肠＞幽门胃＞中肠＞后肠＞前胃＞后胃＞口咽腔,其中肠道部位菌落数量最多.分离细菌菌株主要为杆状细菌和革兰氏阴性菌,对其中的50株典型菌株进行分子鉴定,发现它们主要属于变形菌门的γ-变形菌纲（占52.7％）和β-变形菌纲（占36.8％）,以及厚壁菌门的芽孢杆菌纲（占10.5％）;不可培养细菌16S rDNA文库克隆子主要属于γ-变形菌纲、α-变形菌纲和脱铁杆菌纲,部分序列与已报道的物种相似性较低,说明消化道中可能存在新的有待开发的肠道菌株.     

周期性饥饿对鮸幼鱼肌肉中主要营养成分的影响

在水温为（22±2）℃条件下,研究了周期性饥饿对早繁鮸Miichthys miiuy幼鱼肌肉中主要营养成分的影响。试验分为6组：一直投喂（S0组）、隔日投喂（S1组）、饥饿3 d投喂3 d（S3组）、饥饿6 d投喂6 d（S6组）、饥饿9 d投喂9 d（S9组）和饥饿12 d投喂12 d（S12组）。结果表明：随着周期性饥饿时间的延长,鮸幼鱼肌肉水分的含量明显上升,各饥饿组鱼的水分与对照组相比差异显著（P〈0.05）;蛋白含量呈下降趋势,S1、S3组与S0组无显著性差异（P〉0.05）,S6、S9、S12组间有显著差异（P〈0.05）,且这3组与S0组之间蛋白含量均存在显著性差异（P〈0.05）;脂肪和糖类含量明显下降,除S1、S3、S6组外,其余各组间脂肪含量均具有显著性差异（P〈0.05）,而各组间糖类含量均有显著性差异（P〈0.05）。鮸幼鱼肌肉中天冬氨酸、谷氨酸、亮氨酸和赖氨酸的含量均较高。经过不同时间周期性饥饿后,各试验组鱼中各种氨基酸的含量和氨基酸总量与S0组均差异显著（P〈0.05）,必需氨基酸总量呈现先下降后上升的趋势。随着饥饿时间的延长,饱和脂肪酸（SFA）显著下降（P〈0.05）,按下降的百分比计,下降趋势为C21：0〉C17：0〉C18：0〉C15：0〉C14：0〉C22：0〉C24：0〉C16：0〉C23：0;单不饱和脂肪酸（MUFA）呈现先下降后上升的趋势;而多不饱和脂肪酸（PUFA）呈现先上升后下降的趋势,按上升的百分比计,上升趋势为C18：3n-3〉C20：4n-6〉C20：5n-3〉C18：3n-6〉C22：6n-3〉C18：2n-6。说明鮸幼鱼在周期性饥饿过程中,首先利用饱和脂肪酸,然后利用低不饱和脂肪酸,最后才动用高不饱和脂肪酸。双键位置不同的脂肪酸在饥饿过程中的损失速度也有差异,具体为∑n-9 PUFA〉∑n-6 PUFA〉∑n-3 PUFA。     

五种重金属对早繁鮸鱼胚胎和仔鱼的毒性效应

在水温27.5℃、盐度29条件下,研究了Cu2+、Cd2+、Zn2+、Cr6+和Pb2+5种重金属对早繁鮸鱼胚胎发育和初孵仔鱼的影响。结果表明:重金属在胚胎发育过程中引起各种畸形,如胚胎尾巴弯曲、初孵仔鱼不能出膜、胚胎死亡等;胚胎和初孵仔鱼上出现黑色颗粒,初孵仔鱼脊柱弯曲成L、V、S形或尾部没有展开呈逗号状,褶皱边缘被破坏等畸形。Cu2+、Cd2+、Zn2+、Cr6+和Pb2+5种重金属均延迟胚胎发育速率。综合孵化率、胚胎畸形和仔鱼畸形率等指标得出5种重金属对胚胎的毒性大小依次为Cu2+>Cd2+>Zn2+>Pb2+>Cr6+。计算了5种重金属对早繁鮸鱼初孵仔鱼的LC50和安全浓度,得出5种重金属对早繁鮸鱼初孵仔鱼毒性大小顺序为:Cu2+>Cd2+>Pb2+>Zn2+>Cr6+。     

Ploidy polymorphism and morphological variation among reciprocal hybrids of Pseudosciaena crocea (♀) × Miichthys miiuy (♂)

Diploid and triploid hybrids of large yellow croaker (Pseudosciaena crocea, Pc) and Miiuy croaker (Miichthys miiuy, Mm) were produced by interspecific hybridization. The result showed that Pc (♀) and Mm (♂) can be successfully crossed and hybrid offspring of normal hatch rate were produced. In contrast, a lower fertilize and hatch rate were produced for hybrids of Pc (♂) and Mm (♀), and the offspring died day 19 after hatching. To confirm the ploidy of hybrid offspring, we examined the karyotypes of offspring. The result of DNA relative content investigation and genetic relationship analysis demonstrated that the major hybrid offspring were hybrid diploid. In addition, a small number of hybrid were triploid and gynogenesis diploid. Morphological analysis based on the measurable traits data indicated the success of the interspecific crosses. The natural gynogenetic diploid large yellow croaker (PP), diploid hybrids (PM) and triploid hybrids (PPM) were closer to maternal parent (Pc) than paternal parent (Mm). This study provided genetic evidences of the chromosome, DNA content and morphological levels to support the successful establishment of the polyploidy hybrids of Pc (♀) and Mm (♂).     

(鱼免)鱼仔稚鱼消化系统的组织学研究

利用石蜡包埋连续切片技术，通过对1～40日龄鮸鱼仔稚鱼消化系统组织学发育的观察，探讨了鮸鱼仔稚鱼期不同发育阶段的消化器官组织学结构变化及卵黄囊的吸收机制。在水温为17．3～24．9℃的条件下，初孵仔鱼消化管仅为一细长的线状管，位于卵黄囊上方。3日龄仔鱼消化管基本上贯通，变长，肝脏、胰脏出现。4日龄仔鱼卵黄囊完全被吸收，消化管完全贯通，开始摄食。消化管明显分化成食管、胃、肠，此时开始进入外源型营养阶段。9日龄仔鱼，粘膜层出现胃小凹及粘膜褶皱。25日龄仔鱼，胃腺出现，粘膜褶皱增多。28日龄仔鱼，消化系统从结构和功能上趋于完善。本文分析了鮸鱼仔稚鱼消化系统的早期发育特点与摄食、营养方式的关系．并比较了鱼类肝脏、胰脏的组织学发育特点。     

降糖肽的发展现状及研究进展

为实现鮸 (Miichthys miiuy) 加工副产物的高值化利用,选用鮸加工副产物鱼碎肉作为原料,以α-葡萄糖苷酶 (α-glucosidase) 抑制率为评价指标,通过单因素实验和响应面法优化α-葡萄糖苷酶抑制肽的制备工艺条件,确定胰酶的最佳酶解条件为：时间4.8 h,加酶量0.21%,pH 8.5,料液比1∶2 (m∶V),温度46 ℃。在此基础上,分析了酶解产物体外模拟胃肠液消化前后其抑制活性的变化,绘制酶抑制动力学曲线,并采用SephadexG-25对酶解物进行分离,测定酶解物的相对分子质量分布及氨基酸组成。结果表明：活性肽经体外模拟胃肠液消化后α-葡萄糖苷酶抑制率提高至61.97%;其对α-葡萄糖苷酶抑制作用为混合型抑制;酶解物的相对分子质量集中分布在3 kD以下 (占91.85%) ;经G-25分离,F4组分对α-葡萄糖苷酶抑制率为58.05%,其<1 kD的肽组分占78.28%;酶解物中天冬氨酸、谷氨酸、精氨酸、酪氨酸、缬氨酸、丙氨酸、亮氨酸和赖氨酸等相对含量较高。     

大黄鱼、鮸鱼及美国红鱼线粒体DNA的Cytb基因序列比较

利用PCR技术对大黄鱼Pseudosciaena crocea、鮸鱼Miichthys miiuy和美国红鱼Scioenops ocellatus线粒体DNA的细胞色素b（Cyt b）基因片段进行了扩增,PCR产物直接测序,分别获得大黄鱼和美国红鱼1 140 bp的序列,鮸鱼1 125 bp的序列。通过对3种鱼的Cyt b序列的比对分析,得出3种鱼序列的相似性为91.49%;分析了3种鱼序列的碱基组成及碱基变异情况,发现3种鱼的序列差异明显,碱基替换较多,可以将Cyt b基因作为种间分子鉴定或更高分类界元遗传分析的分子标记;计算了3种鱼序列的遗传距离并构建了系统树,结果显示,鮸鱼与美国红鱼的遗传距离较近。