农杆菌介导的马铃薯试管薯遗转化体系的优化及反义class Ⅰ patatin基因的导入

用两个马铃薯栽培品种“鄂马铃薯3号”和“甘农薯2号”的试管薯为供体材料，建立了一种农杆菌介导的简单、快速和高效的遗传转化系统。在含有75mg／L卡那霉素的选择培养基上，2～3周可产生抗性芽，4～5周获得完整的转基因植株。筛选出了试管薯遗传转化的优化条件，特别是在再生培养基中加入2mg／L玉米素，两个品种的转化频率分别高达45．5％和43．9％。周期短(4～5周)、一步培养和转化频率高，使该转化体系能够广泛用于马铃薯转基因的研究。用含有反义class Ⅰ patatin基因的表达载体pBSAP转化两个品种，共获得120株卡那霉素抗性植株。PCR、PCR-Southern和Northern杂交分析证明，此反义基因已整合到马铃薯基因组中并在转基因植株中正常转录。反义基因的表达导致部分转基因植株的试管结薯株率和单株结薯数降低。结果表明，该class Ⅰ patatin基因可能参与了块茎形成的调控。     

模拟干旱胁迫对马铃薯组培苗发育及试管薯形成的影响

本研究以马铃薯品种(品系)‘克新一号’、‘夏坡蒂’、‘K1’和‘K2’组培苗为试验材料,以不同浓度的甘露醇和山梨醇模拟干旱胁迫,研究干旱胁迫对马铃薯组培苗生育进程及试管薯产量的影响。结果表明:在遭受干旱胁迫下,不同马铃薯品种的叶片数、株高均会随干旱胁迫而降低;不同马铃薯品种叶和茎干物质量的变化随着干旱胁迫程度的加重而出现不同程度的降低趋势;不同品种马铃薯的试管薯结薯总数与大中薯率随着干旱胁迫程度的增加出现降低趋势,低浓度(0.1 mol/L)的甘露醇和山梨醇会诱导结薯提前,推测可能是马铃薯面临干旱胁迫的一种应对机制。本研究结果可为马铃薯节水抗旱技术研究及抗旱品种筛选提供一定的理论依据。     

马铃薯试管薯诱导集成优化研究

用食用白糖代替蔗糖、自来水代替蒸馏水,通过不同培养基、不同的散射光和温度诱导脱毒马铃薯陇薯3号试管薯,观察其对试管薯形成的影响。试验结果表明,用MS 80g/L食用白糖 1g/L活性炭 200mg/L多效唑液体培养基,在弱散射光(100lx)和(18±1℃)条件下更利于提早结薯,单瓶试管薯鲜重和单薯鲜重都显著增加,同时降低了畸形薯率;用食用白糖和自来水配制培养基不会影响诱导微型薯的效果,可以降低生产成本,提高经济效益。     

农杆菌介导的马铃薯试管薯遗传转化体系的优化及反义class Ⅰ patatin基因的导入

用两个马铃薯栽培品种"鄂马铃薯3号"和"甘农薯2号"的试管薯为供体材料,建立了一种农杆菌介导的简单、快速和高效的遗传转化系统.在含有75 mg/L卡那霉素的选择培养基上,2～3周可产生抗性芽,4～5周获得完整的转基因植株.筛选出了试管薯遗传转化的优化条件,特别是在再生培养基中加入2 mg/L玉米素,两个品种的转化频率分别高达45.5     

紫色马铃薯陇薯03-01试管薯诱导体系的优化研究

以紫色马铃薯03-01为材料,探讨了培养基诱导因子的不同组合、不同光照条件对试管苗生长和试管薯诱导的影响。结果表明:试管薯诱导最佳培养基为MS+100.0 g/L白砂糖,诱导微型薯的最适环境为光照2 000 Lx日光灯或遮荫太阳光,温度21～25℃。     

蔗糖对半夏试管块茎形成过程中总RNA含量的影响

[目的]探讨蔗糖诱导半夏试管块茎形成过程中RNA的变化规律。[方法]以半夏试管苗为材料,采用5种蔗糖浓度处理,通过分光光度计测定总RNA含量,并结合差异反转录PCR技术,分析各浓度蔗糖处理半夏试管小块茎前后其总RNA的变化规律。[结果]各蔗糖浓度处理的半夏总RNA含量变化幅度较大,但总趋势表现为前15 d处于上升状态,从15 d到25 d开始下降,从25 d到30 d又开始小幅度上升。试管块茎的形成伴随着总RNA含量的上升,高浓度蔗糖处理可能启动了半夏试管块茎发育相关基因的表达。[结论]该研究结果为揭示蔗糖调控半夏试管块茎形成过程中相关基因的表达信息和分子机理提供了依据。     

不同品种马铃薯试管薯诱导体系的优化

利用5种培养基和3种培养方法对马铃薯的大西洋、陇薯3号和甘农2号品种进行了试管薯的诱导。结果表明：8%的蔗糖浓度是大西洋和陇薯3号试管薯诱导的最佳糖浓度;5mg/L 6-BA的添加可有效提高结薯率和增加块茎直径;在含8%蔗糖的培养基上,琼脂的添加与否对试管薯的诱导率没有影响;在不含蔗糖的MS培养基中,300μmol/L 山梨醇+20mmol/L NH4NO3+20mmol/L KNO3的添加对试管薯的形成和发育不利;3种培养方法中,液体培养法的试管薯诱导效率最好。     

转基因马铃薯内源农杆菌脱除

[目的]解决采用抗生素抑菌导致转基因马铃薯植株生长与分化受到抑制的问题。[方法]利用转基因植株诱导试管微型薯,由试管微型薯抽枝获得转基因脱菌植株。[结果]参试3个马铃薯品种中,SⅠ、SⅡ最佳试管微型薯诱导培养基为MS＋6-BA0.5mg/L＋GA30.1mg/L＋cef150mg/L,NT最佳试管微型薯诱导培养基为MS＋ZT0.5mg/L＋GA30.1mg/L＋cef150mg/L;薯块抽枝最佳培养基为MS＋ZT0.5mg/L＋NAA0.1mg/L;薯块直径0.5-0.7cm抽枝数最高;转基因脱菌植株在无抗生素快繁培养基中经30d培养污染率为0,脱菌植株茎段粗壮,无分枝现象。[结论]建立的方法脱菌简单易行,为转基因个体的筛选和生长排除了障碍。     

蔗糖浓度和光照对马铃薯试管薯诱导的影响

以马铃薯栽培品种甘农薯1号的脱毒试管苗茎段为外植体,研究了蔗糖浓度和光照对试管薯形成和发育的影响,结果表明：马铃薯试管薯诱导培养基MS＋6-BA 3.0 mg/L中加入80 g/kg蔗糖的诱导效果明显优于其它添加蔗糖浓度的处理;黑暗处理优于光照处理;液态培养优于固态培养。     

转基因马铃薯内源农杆菌脱除

[目的]解决采用抗生素抑菌导致转基因马铃薯植株生长与分化受到抑制的问题。[方法]利用转基因植株诱导试管微型薯,由试管微型薯抽枝获得转基因脱菌植株。[结果]参试3个马铃薯品种中,SI、sⅡ最佳试管微型薯诱导培养基为MS＋6-BA0．5ms／L＋GA,0．1mg／L＋cef 150me／L,NT最佳试管微型薯诱导培养基为MS＋ZT0．5mg／L＋GA,0．1mg／L＋cef150mg／L;薯块抽枝最佳培养基为Ms＋ZT0．5mg／L＋NAA0．1mg／L;薯块直径O．5～0．7cm抽枝数最高;转基因脱菌植株在无抗生素快繁培养基中经30d培养污染率为0,脱菌植株茎段粗壮,无分枝现象。[结论]建立的方法脱茵简单易行,为转基因个体的筛选和生长排除了障碍。