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经对液氮保存的抗鸡新城疫病毒单抗杂交瘤细胞株进行复苏、再克隆,并用ELISA 和IIF筛选,得到24 株分泌力较强的细胞株。将这些细胞株再接种BALB/C小鼠,取其腹水进行预处理,测其ELISA 效价、IIF效价,并用Westernblotting 测定它们所针对的中国标准强毒株F48 E8 的多肽抗原表位。测得的结果均为针对血凝素-神经氨酸酶的单抗 相似文献
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鸡T细胞特异性单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立 总被引:1,自引:0,他引:1
以鸡胸腺细胞免疫BLAB/c小鼠,进行细胞融合,获得了15株杂交瘤克隆株,其中有5株(1B6、1C5、3E4、9H6、5E10)杂交瘤克隆抗体(McAbs)只对鸡胸腺细胞和外周血T细胞发生特异性反应。WcsternBlot分析表明,这组McAbs反应的膜抗原分子量为60~65KD,该抗原分布于633~724%的胸腺细胞、173%~245%的脾细胞,23%~27%的外周血淋巴细胞,而法氏襄细胞的反应性不超过13%。以此McAbs作诊断试剂,对禽类T细胞分离、纯化及T细胞亚类鉴定提供了重要的研究手段。 相似文献
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目的以H5亚型禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)的血凝素(HA)抗原表位重组表达蛋白为抗原,探索H5亚型AIV单克隆抗体制备的简便有效途径。方法利用H5亚型AIV的HA抗原表位原核表达重组蛋白为抗原,4次免疫8~10周龄雌性BALB/c小鼠后,取小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,用间接ELISA方法筛选能分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株,并对单克隆抗体的特性及初步应用价值进行测试。结果得到一株能稳定分泌针对H5亚型AIVHA抗原表位的特异性单克隆抗体杂交瘤细胞株,单克隆抗体ELISA效价达1:5×104,为具有IgK轻链的IgM亚类。该单克隆抗体能特异性地与H5亚型AIV产生肉眼可见的WesternBlot免疫印迹反应,与其它供试的禽病抗原无反应。H5N1亚型AIV阳性血清能有效阻断辣根过氧化酶标记的单克隆抗体与HA抗原表位重组蛋白的结合。结论本研究探索出一条利用H5亚型AIV的HA抗原表位重组表达蛋白为抗原的单克隆抗体制备的简便、高效途径,所制备的单克隆抗体稳定性好、效价高、特异性强,在H5亚型禽流感病毒及其血清学检测中有较高的应用价值。 相似文献
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单克隆抗体夹心ELISA检测蚕豆萎蔫病毒研究 总被引:3,自引:0,他引:3
利用 2 株特异性单抗,建立了检测蚕豆萎蔫病毒(BBWV)的灵敏度高、特异性好的单抗夹心ELISA 方法⒚经测定,McAb 最适包被浓度为04 μg/m L,HRPMcAb 最佳工作浓度为1∶2 000,该方法最小检出浓度为016 μg/m L,与几种常见的病毒无交叉反应⒚对杭州地区的 140 多个样本进行了检测,发现蚕豆、豌豆中BBW V 的阳性率达 80% ⒚ 相似文献
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抗狂犬病毒单克隆抗体的纯化及标记 总被引:2,自引:0,他引:2
对一株稳定、特异、高效的单克隆抗体(mAb)进行了纯化和荧光素(FITC)的标记,利用标记产物与已有的抗狂犬病毒核蛋白单克隆抗体标记物相比较,效果良好,二者可以结合(或单独)使用;应用标记好的荧光抗体与FITC-抗狂犬病毒免疫球蛋白比较进行血清样品效价测定实验,来确定纯化、标记后的单克隆抗体的灵敏度,结果表明本实验制备的单克隆抗体与FITC-抗狂犬病毒免疫球蛋白具有相同的灵敏度,该单克隆抗体测得的血清样品效价结果与FITC-抗狂犬病毒免疫球蛋白测得的结果相同。因此,此荧光抗体可应用于狂犬病病毒检测(FAT)、病毒毒力测定(TCID50)、中和抗体实验(FAVN)等方面的检测实验,此荧光抗体可为狂犬病的相关研究提供有力的保障。 相似文献
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用单克隆抗体鉴定猪繁殖与呼吸综合征病毒分离株 总被引:9,自引:0,他引:9
应用PRRSV单克隆抗体,采用直接与间接免疫荧光抗体试验对分离获得的PRRSV6个毒株进行了鉴定,结果所有分离毒株均能被单克隆抗体(SDOW17、A、B、C、D、E、F)所识别,呈现特异荧光,6个分离毒株均能与仅识别美洲型PRRSV的单克隆抗体F反应,结果表明6个分离毒株均属于美洲型PRRSV。利用微量细胞培养对分离毒株TCID50测定结果表明,6个分离毒株的TCID50分别为10-7.5/0.1ml、10-7.5/0.1ml、10-7.5/0.1ml、10-7.75/0.1ml、10-7.25/0.1ml、10-6.25/0.1ml。病毒感染细胞的超薄切片电镜观察表明,在感染细胞浆内可见典型的PRRSV病毒粒子,呈球形或椭圆形,直径约为60nm左右,可见囊膜。 相似文献
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用辣根过氧化物酶标记的抗小鼠肝炎病毒(MHV)单克隆抗体(McAb),建立了ELISA 双抗体夹心法,并与 ELISA 间接法检测小鼠血清中的 MHV 抗体进行了比较。发现两种方法在检出率、特异性、稳定性方面并无明显差异,但由于间接法操作更为简便,因此认为,检测血清中 MHV 抗体采用间接法较好。 相似文献
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以纯化的猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)S蛋白中和表位(SID)重组蛋白为抗原免疫BALB/c小鼠,利用淋巴细胞杂交瘤技术获得了6株稳定分泌抗SID区特异性的单克隆抗体细胞株,分别命名为2C4、3G3、5F8、3G5、6E6和3C3。6株杂交瘤细胞诱生小鼠产生的腹水抗体效价分别为1∶51200、1∶6400、1∶12800、1∶6400、1∶51200和1∶25600。免疫球蛋白类型均为IgG1型,轻链均为Κ链。Western blot试验结果显示,6株单克隆抗体均能特异性地识别天然PEDV中的S蛋白。 相似文献
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从已建立的15株稳定分泌抗水稻白叶枯病原细菌的单抗杂交瘤细胞株中筛选出4株,用其抗体采用琼脂双扩散和酶联免疫吸附试验检测了作者从采集的病叶分离和从各地收集的水稻白叶枯病菌菌株63株,将其分为4个血清型,其结果与常规多抗血清划分的血清型一致.并运用免疫电泳和琼脂双扩散试验比较了各血清型之间的差异,其结果表明,单抗较多抗特异性强,在鉴别血清型方面较优越. 相似文献