藏绵羊GHRH基因部分片段的克隆及HaeⅢ-RFLP分析

对欧拉型藏绵羊生长激素释放激素(GHRH)基因部分片段进行PCR扩增、纯化和克隆测序,利用GenBank中的Blastn方法与普通牛相应基因序列进行了比对分析,并对54只欧拉型藏绵羊该基因片段进行了HaeⅢ-RFLP研究。结果表明:欧拉型藏绵羊与普通牛GHRH基因部分序列间同源性为93%;序列间碱基变异类型主要表现为碱基转换和颠换,亦存在碱基插入和缺失;54只欧拉型藏绵羊该基因片段HaeⅢ-RFLP分析均为单态,表现为AA基因型。     

生长激素释放肽的研究进展

生长素释放肽（GHRPs）依据蛋氨酸-亮氨酸脑啡肽（met-enkephalin）的结构于20世纪70年代末首次合成以来,人们又陆续合成了数种类型的GHRPs,虽然其结构已远不同于met-enkephalin的结构,但均可强烈刺激生长素（GH）分泌。GHRPs在动物体内具有促进GH 释放、刺激动物食欲、促进动物生长、提高动物生产性能和免疫水平等多方面的功能。     

广西巴马小型猪GHRH成熟肽真核表达质粒对小鼠生长效应的影响

【目的】探讨广西巴马小型猪促生长激素释放激素（GHRH）成熟肽真核表达质粒对小鼠生长效应的影响,为进一步研究广西巴马小型猪GHRH成熟肽的促生长作用及GHRH基因疫苗的高效制备与安全使用提供参考依据。【方法】利用基因重组技术将广西巴马小型猪GHRH成熟肽序列与p EGFP-N1质粒连接构建重组真核表达质粒,然后按0.5μg/g的剂量肌肉注射经25%蔗糖溶液预处理的小鼠,观察记录小鼠体重变化情况,并分别提取重组质粒注射组小鼠的心脏、肝脏、肾脏及注射部位肌肉DNA,再以PCR检测是否存在基因质粒残留。【结果】以构建的p EGFP-GHRH重组质粒注射小鼠后,其外源GHRH成熟肽DNA可在肌肉中获得表达,但并未整合入小鼠基因组中。虽然重组质粒注射组小鼠的末重与空质粒注射组小鼠的差异不显著（P〉0.05）,但在注射后的10-25 d,重组质粒注射组小鼠体重均显著高于空质粒注射组（P〈0.05）。在相对日增重率方面,注射后的前15 d内,重组质粒注射组小鼠的相对日增重率均高于空质粒注射组。【结论】构建的广西巴马小型猪p EGFP-GHRH重组质粒能在一定时间内促进小鼠生长,即GHRH种属差异性小,在动物中有较高的保守性。     

草地藏系绵羊生长激素释放激素基因部分cDNA的克隆及生物信息学分析

为了克隆草地藏系绵羊生长激素释放激素基因,采用Trizol法从草地藏系绵羊下丘脑组织中提取总RNA,用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)进行cDNA扩增并克隆测序,获得长度为207 bp的促生长激素释放激素基因(GHRH)的部分cDNA序列。结果表明获得的草地藏系绵羊GHRH部分cDNA序列与Gen Bank中注册的绵羊GHRH基因编码起始位置(86位)到292位区域高度同源,仅有1个碱基的差异,该cDNA序列编码69个氨基酸残基,其内含有信号肽序列,该氨基酸序列的31~57位具有典型胰高血糖素类似激素特征的GLUCA结构域。     

猪血清中生长激素(GH)和生长激素释放激素(GHRH)的发育性变化研究

采用ELISA方法检测了3个不同体重梯度(90、110和130 kg)的川藏黑猪配套系和DLY猪血清中生长激素(GH)和生长激素释放激素(GHRH)的含量变化,并分析了其与肌纤维面积(CSA)和肌内脂肪(IMF)含量的关系。结果显示,90、110和130 kg体重梯度川藏黑猪配套系和DLY猪血清中GH含量分别为14.25、14.61、14.11及17.86、16.98、16.77 μg/L,GHRH含量分别为22.88、23.98、24.33及27.72、27.47、28.39 μg /L,除DLY猪90和130 kg血清中GH含量差异显著(P<0.05)外,品种内不同体重梯度间差异均不显著(P >0.05);不同猪种间,除110 kg梯度GHRH水平差异不显著(P >0.05)外,其余川藏黑猪配套系均显著低于DLY猪(P< 0.05)。相关性分析结果显示,GH、GHRH水平与CSA呈显著正相关(P< 0.05),与IMF含量呈极显著负相关(P< 0.01)。结果表明GH和GHRH可能通过血液对猪肌纤维的生长和肌内脂肪的沉积进行调控。     

大口黑鲈GHRH基因启动子区域序列分析及其活性检测

生长激素释放激素(growth hormone releasing hormone,GHRH)是下丘脑弓状核合成和分泌的小分子多肽,其主要功能是调节垂体细胞合成和释放生长激素。为研究大口黑鲈(Micropterus salmoides)GHRH基因5’侧翼启动子区域的活性和该区域中潜在的转录因子对GHRH基因表达的调控作用,对该基因5’端启动子区域约1400 bp长度的片段进行序列分析,预测顺式作用元件,获得了Oct-1、SP1、NF-1、C/EBPalp和C/EBP等多个潜在的调控GHRH基因表达的调节因子结合位点序列。在包括外显子1和内含子1的GHRH基因5’侧翼区两侧加入两个限制性酶切位点Xho I和Bam H I,对其进行改造,并将该片段插入红色荧光蛋白报告基因载体p DsRed2-1,构建了重组表达质粒pGHRH1-RFP。同时,用不含有外显子1和内含子1的GHRH基因5’侧翼区构建重组表达质粒p GHRH-RFP。将质粒pGHRH1-RFP和p GHRH-RFP转染鲤(Cyprinus carpio)上皮细胞(epithelioma papillosum cyprinid,EPC)。经过48 h的培养,在pGHRH1-RFP转染的部分细胞中检测到红色荧光蛋白表达。又将pGHRH1-RFP或p GHRH-RFP质粒注射到斑马鱼(Danio rerio)一细胞或二细胞期的胚胎中,注射了pGHRH1-RFP的胚胎在受精后48 h约有22.5%能检测到有红色荧光蛋白表达,受精后72 h约有29%的仔鱼检测到红色荧光蛋白表达。实验结果表明,目前分离到的GHRH基因5’侧翼序列具有启动基因表达的活性,且该基因的内含子1和外显子1是启动子的活性所必需的。另外,pGHRH1-RFP质粒注射的斑马鱼胚胎只能在胚胎和仔鱼的脊椎和肌肉中检测到RFP的表达,而在脑中没有检测到表达。推测扩增到的大口黑鲈GHRH启动子序列1407 bp(-1043 bp~362 bp)只是起到了驱动RFP脊椎和骨骼肌表达的作用,而不包括驱动在脑组织中特异性表达的启动子,本研究为GHRH基因功能的深入分析奠定了基础。     

生长激素释放肽在动物科学中的研究进展

生长激素释放肽(GHRPs)是一类人工合成的促生长激素分泌素(GHS),在动物体内具有促进GH释放、刺激动物食欲、促进动物生长、提高动物生产性能和免疫水平等多方面的功能。其作用机制不同于生长激素释放激素(GHRH)。此外,GHRPs和GHRH还具有协同作用。     

Dynamics of GHRH in third-ventricle cerebrospinal fluid of cattle: Relationship with serum concentrations of GH and responses to appetite-regulating peptides

Objectives were to (1) characterize the relationship of third-ventricle (IIIV) cerebrospinal fluid (CSF) concentrations of growth hormone–releasing hormone (GHRH) with concentrations of GH in the peripheral circulation; and (2) assess the influence of acute administration of appetite-regulating peptides leptin (anti-orexigenic) and neuropeptide Y (NPY; orexigenic) on the release of GHRH. Six mature beef cows fitted with IIIV and jugular vein cannulae were treated intracerebroventricularly with saline, and leptin (600 μg) and NPY (500 μg) in saline, in a replicated 3 × 3 Latin square design. Third-ventricle CSF and blood were collected 10 min before and continued 220 min after treatments. Mean concentrations of GHRH and frequency of pulses after treatments were 2.2 ± 0.13 ng/mL and 1.2 ± 0.15 pulses/220 min, respectively. These measures were not influenced by treatments. Concentrations of GHRH in CSF were weakly correlated (r = 0.15; P < 0.03) with serum concentrations of GH; however, 58% of the GH pulses were preceded by a pulse of GHRH and 90% of the GHRH pulses occurred within 20 min preceding a pulse of GH. Leptin tended (P < 0.10) to suppress GH area under the curve (AUC) compared to saline. Concomitantly, NPY tended (P < 0.10) to increase GH AUC, which appeared to be a consequence of increased (P < 0.05) pulse amplitude. Infusion of NPY also increased (P < 0.05) AUC of GHRH relative to saline. No differences were detected among treatments in serum concentrations of insulin-like growth factor-I or its AUC. Sampling CSF from the IIIV appears to be a viable procedure for assessing hypothalamic release of GHRH coincident with anterior pituitary gland secretion of GH in cattle. These data also demonstrate the differential responsiveness of the GH axis to appetite-regulating peptides.     

肌注异位表达GHRH质粒对羔羊体重变化的影响

以兔子为动物模型,肌注绿色荧光表达质粒,确定了自行研制的活体基因电转仪转染效果。确定脉冲方波、低场强200V/cm、脉冲长度50ms电转染参数下,显著提高质粒转染表达效果。在此基础上,对羔羊实施肌注异位表达GHRH质粒结合电转染,促进了羔羊的生长。     

信阳水牛GHRH基因第二外显子的SNPs检测

[目的]检测信阳水牛群体GHRH基因的SNP多态性。[方法]以56头信阳水牛为材料,采集血样,提取基因组DNA,以GenBank公布的牛GHRH基因(gi:194719389)序列作为参照序列,设计PCR引物,采用PCR-SSCP和DNA测序方法对该基因第二外显子的进行突变检测。[结果]经SSCP分析发现,这些个体总共出现六种不同的带型。测序结果表明:位于GHRH基因的4 461bp、4 529bp、4 845bp、5 053bp和5 058bp处分别存在C→T、T→G、G→A、G→A和G→T五个单核苷酸突变。[结论]表明该基因在信阳水牛群体中单核苷酸多态较为丰富。