抗伤寒杆菌Fe—SOD血清对志伤寒杆菌攻击小鼠的免疫保护作用

目的：制备兔抗伤寒杆菌Ｆｅ－ＳＯＤ血清,并研究其对鼠伤寒杆菌攻击小鼠的免疫保护作用,探讨ＳＯＤ与沙门氏菌致病性的关系。方法：用纯化的伤寒杆菌Ｆｅ－ＳＯＤ免疫家兔,制备兔抗ＳＯＤ血清,并用ＥＬＩＳ法检测抗血清效价;免疫电泳、双向琼脂扩散试验和抗血清对酶活笥抑制试验检测抗血清的特异性。将所制备的抗血清与鼠伤寒杆菌混合,放３７℃３０ｍｉｎ,经腹腔注入小鼠体内,并观察３天和７天小鼠的存活情况,以确定抗血清     

不同来源的超氧化物歧化酶部分理化性质比较研究

对4种不同来源的超氧化物歧化酶的部分理化性质进行了比较研究。结果表明:牛血Cu,Zn-SOD和rhCu,Zn-SOD对一些化学试剂的敏感性方面基本相似,rhCu,Zn-SOD的热稳定性最好,80℃水浴60 min后活力仍有56%;在pH 5.0～11.0的范围内,Cu,Zn-SOD的活力比较稳定,Mn-SOD在pH 5.0以下容易失活,在碱性条件下较稳定。螺旋藻Fe-SOD和rhMn-SOD热、酸碱的稳定性较低;Cu,Zn-SOD、Fe-SOD和rhMn-SOD对一些化学试剂和不同变性剂的敏感性有明显的差别。rhMn-SOD稳定性,对化学试剂的敏感性方面与天然原料来源的Mn-SOD基本一致。Cu,Zn-SOD和Mn-SOD、Fe-SOD相比较,理化性质有明显的差别。     

小鼠鼻粘膜接种伤寒杆菌Fe-SOD的抗体应答

目的：观察小鼠鼻腔接种伤寒杆菌的Fe—SOD后血液和粘膜系统的抗体应答。方法：用IL-1作为佐剂,将伤寒杆菌的Fe—SOD经鼻腔接种小鼠,检测小鼠血液及肠液中的抗体应答。结果：当用IL-1作为佐剂时,经鼻腔接种伤寒杆菌Fe—SOD的小鼠血液和肠液中可产生高水平特异性IgG和IgA类抗体;而腹腔注射仅在血液中产生高水平特异性IgG抗体。结论：用IL-1作为佐剂,伤寒杆菌Fe—SOD经鼻腔接种后可引起小鼠粘膜系统和血液中的抗体应答。     

白菜型冬油菜铁超氧化物歧化酶（Fe-SOD） 基因的克隆及表达分析

【目的】了解SOD酶蛋白家族Fe-SOD在超强抗寒冬油菜中的表达情况及其在低温胁迫下的作用。【方法】采用RT-PCR技术克隆超强抗寒白菜型冬油菜陇油7号Fe-SOD的cDNA序列。对该序列进行生物信息学分析,采用半定量以及相对定量RT-PCR研究Fe-SOD在低温胁迫下的表达模式,采用氮蓝四唑（NBT）光还原法测定冬油菜叶片和根中的总SOD酶活性。【结果】获得Fe-SOD,GenBank登录号为KF178713,该基因cDNA片段全长645 bp,包含一个639 bp完整的开放阅读框,编码212个氨基酸的蛋白质,与白菜(Chiifu)的蛋白质氨基酸序列同源性高达99%。该基因编码的酶蛋白是1个主要由α-螺旋组成的亲水性稳定蛋白,无信号肽,无跨膜结构域。Fe-SOD表达模式分析显示初期低温胁迫下（4℃）,该基因上调表达,继续低温胁迫处理（-4℃和-8℃）,Fe-SOD表达量受到抑制。总SOD酶活性测定显示冬油菜根中酶活性高于叶片,以利于冬油菜安全越冬。【结论】从白菜型冬油菜克隆的Fe-SOD具有已知物种Fe-SOD的特征。Fe-SOD在冬油菜品种陇油7号抗寒过程中起作用。     

抗伤寒杆菌Fe-SOD血清对鼠伤寒杆菌攻击小鼠的免疫保护作用

目的:制备兔抗伤寒杆菌Fe-SOD血清,并研究其对鼠伤寒杆菌攻击小鼠的免疫保护作用,探讨SOD与沙门氏菌致病性的关系.方法:用纯化的伤寒杆菌Fe-SOD免疫家兔,制备兔抗SOD血清,并用ELISA法检测抗血清效价;免疫电泳、双向琼脂扩散试验和抗血清对酶活性抑制试验检测抗血清的特异性.将所制备的抗血清与鼠伤寒杆菌混合,放37℃30 min,经腹腔注入小鼠体内,并观察3 d和7 d小鼠的存活情况,以确定抗血清的免疫保护作用.结果:抗血清的ELISA效价为1:10240,免疫电泳结果显示抗血清与纯化的伤寒杆菌Fe-SOD及无细胞溶解物在相同位置各只形成一条沉淀线;双向琼脂扩散试验结果显示抗血清不与牛红细胞SOD形成沉淀线,但抗血清对酶活性抑制试验结果显示抗血清可抑制24.92%的红细胞SOD活性,说明伤寒杆菌Fe-SOD与牛红细胞SOD有低度交叉反应.抗血清可抑制42.58%～73.38%的沙门氏菌无细胞溶解物中SOD活性.经抗血清处理过的5LD50鼠伤寒杆菌攻击的小鼠3 d和7 d的存活率分别为90%和60%,均明显高于对照组(P＜0.01或P＜0.05).结论:抗伤寒杆菌Fe-SOD血清对受鼠伤寒杆菌攻击的小鼠具有交叉免疫保护作用,SOD可能是沙门氏菌共同的保护性抗原.提示SOD与沙门氏菌的致病性有关.     

马铃薯抗逆基因Fe-SOD的克隆与序列分析

文章以马铃薯克新19号为材料,提取植株叶片总DNA,利用同源序列法,根据GenBank中已登陆番茄的Fe-SODmRNA序列,设计1对引物,经PCR扩增获得了大小为1413bp的片段。序列分析表明,预测其含有4个外显子和3个内含子,编码了145个氨基酸序列,分子质量为16.255ku,等电点为5.88。其编码的氨基酸序列包含了两个Fe-SOD蛋白的保守结构域,与NCBI数据库中其他植物的Fe-SOD蛋白同源性很高,与番茄中58～203相关片段同源性高达93.79%。该基因已在GenBank上注册,登录号为EU545469。     

芦荟超氧化物歧化酶同工酶Ⅰ的分离纯化及部分性质

将从芦荟叶中提取的SOD溶液,通过丙酮沉淀、热变性、DEAE-琼脂糖柱层析s、ephacryl S-200凝胶过滤,获得芦荟超氧化物歧化酶同工酶Ⅰ电泳纯产品Fe-SOD。该同工酶经凝胶过滤测定全分子量为46 kD及SDS-PAGE测得亚基分子量为23 kD,由2个亚基组成。经等电点聚焦电泳测得该SOD酶同工酶Ⅰ的等电点为pH8.9。     

荔枝古树胚性愈伤组织Fe-SOD成员基因克隆及生物信息学分析

为了解Fe-SOD在荔枝古树胚性愈伤组织保存中的分子机制,选择荔枝古树"宋荔"花药诱导而来的胚性愈伤组织为试验材料,采用同源克隆和RACE方法,获得荔枝Fe-SOD的两个转录本和基因组序列,并对该基因组的内含子进行分析。克隆获得长1 285 bp含有完整开放阅读框的荔枝Fe-SOD核酸序列,其编码1个含有250个氨基酸的蛋白质,将该序列命名为LcFe-SOD7a。生物信息学分析结果表明:该蛋白为稳定的、亲水的、含跨膜结构域的偏酸性蛋白质,定位于微体(过氧化物酶体)和细胞质,具有多样的磷酸化位点。LcFe-SOD7a基因组序列长2 284 bp,含7个内含子,其中第4个内含子较长,达920 bp。同时还得到其中的1条内含子驻留型可变剪接基因,该可变剪接基因提前终止,仅编码207个氨基酸的蛋白质,将该可变剪接基因命名为LcFe-SOD7b。     

烟叶超氧物歧化酶的研究

从烟叶中提取的超氧物歧化酶（ＳＯＤ），经ＰＡＧＥ垂直板电泳后，用氮蓝四唑（ＮＢＴ）法活性染色，并经凝胶薄层扫描（λ＝５９５ｎｍ），结果显示粗酶液有６条同工酶谱带，经纯化后的酶只有一条谱带。此纯酶液置冰箱３６ｈ后，可获得长方形结晶。结晶酶液用ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１００柱层析（１．５ｃｍ×１００ｃｍ）和ＳＤＳ－和ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测得其分子量分别为２４８３０和２８９００。用等电聚焦电泳测得该酶等电点为６．８０。该酶在ｐＨ５～９范围内活性较稳定，在７５℃保温１５ｍｉｎ活性尚保留５４％。此酶对ＫＣＮ、氯仿－乙醇不敏感，但受到ＥＤＴＡ，Ｈ_２Ｏ_２的强烈抑制，表明烟叶中分离纯化得到的ＳＯＤ为酶分子中结合Ｆｅ的Ｆｅ－ＳＯＤ。