细菌表达 dsRNA 介导桔小实蝇 flightin基因的 RNA 干扰

【目的】探索饲喂细菌表达目标基因dsRNA介导桔小实蝇flightin基因RNAi的可行性。【方法】将桔小实蝇flightin基因的相应干扰片段构建至L4440干扰载体,并转化大肠杆菌HT115(DE3)菌株,利用IPTG诱导表达flightin基因对应的dsRNA,命名为flightin-dsRNA。【结果】通过饲喂表达flightin-dsRNA的大肠杆菌10倍浓缩菌液,桔小实蝇flightin基因的表达普遍出现了不同程度的上调,其中,雌虫饲喂后5、10、20 d,雄虫饲喂后5 d与对照差异显著,雄虫饲喂后15 d诱发约43%的下调;该方法对桔小实蝇飞行能力及胸部肌肉发育未产生明显影响。【结论】通过饲喂表达flightin-dsRNA的大肠杆菌对桔小实蝇flightin基因进行RNA干扰不可行或干扰效果不明显。     

黑曲霉NRRL3135菌株植酸酶基因在毕赤酵母GS-115系统中的表达

将黑曲S（Aspergillus riger）NRRL3135中的植酸酶基因转入毕赤酵母GS-115中,并整合到染色体DNA上,然后进行诱导表达。通过SDS-PAGE对表达产物进行鉴定,发现重组毕赤酵母GS-115分泌了1个约100kD的蛋白,分泌的蛋白较大。用脱糖基化酶endoglycosidase H降解后,形成了约50kD的蛋白,与植酸酶基因产物的理论值相符。通过对表达产物的酶学性质研究,发现该表达产物在pH2．5和pH5．5时具有较高植酸酶活性,同时该表达产物的最适温度约为55℃。这说明植酸酶得到正确的分泌表达。     

高淀粉玉米杂交种“吉农大115”选育报告

玉米新品种"吉农大115"是以"KM36"为母本、"KM12"为父本育成的玉米杂交种.2年区域试验结果:平均产量10 285.1 kg/hm2,比对照"四单19"增产13.6%;生产试验结果:平均产量10 168.1 kg/hm2,比对照"四单19"增产20.4%.该品种于2007年通过国家和吉林省农作物品种审定委员会审定."吉农大115"果穗长锥型,穗长23 cm,德行数14～16行,子粒橙黄色,百粒重40 g,粗淀粉含量75.08%,品质好,抗病抗倒伏,出苗至成熟125 d.适于辽宁省东部山区、吉林省中熟区、内蒙古赤峰和通辽地区以及黑龙江省第一积温带种植.     

用于RNA干扰研究的大肠杆菌表达系统的条件优化

选取在E.coli中对于dsRNA表达比较重要的3个因素,即诱导时间、诱导温度和诱导剂IPTG浓度。利用已经构建好的大肠杆菌E.coli HT115(DE3),并结合正交试验设计研究dsRNA在HT115(DE3)内的最优表达条件。结果表明,工程菌在诱导时间8 h、诱导温度30℃、诱导剂浓度10.0 mmol/L的培养条件下所得到的dsRNA表达量最大。     

ECM 830电穿孔仪在毕赤酵母电转化中的应用

用线性化质粒与酵母细胞混合后进行电转化,培养细胞,菌体计数,通过计算转化率探索ECM 830电转仪的转化条件,确定出毕赤酵母电转化最佳条件,低电压模式;电压300 V;脉冲长度15 ms;脉冲次数为1次;为ECM 830电转仪在酵母转化中的应用提供依据.     

毕赤酵母表达皮蝇素A蛋白

建立了用毕赤酵母表达系统表达皮蝇素A（Hypodermotin A，HA）的技术，并对表达条件进行了优化筛选。将皮蝇素A基因连接到质粒pPIC9k上，构建了重组转移质粒pPIC9k—HA。重组质粒通过电激转化入酵母细胞GS115后，用组氨酸缺陷培养基和G418分别进行筛选。重组酵母细胞在含0．5％甲醇的培养基中诱导产生目的蛋白，培养3d后收取上清，用阴离子交换层析柱分离纯化。经SDS—PAGE检测，所表达的蛋白相对分子质量约为30000。Western—blotting表明，该蛋白能与兔抗HA血清特异性结合。明胶电泳检测显示，该蛋白具有酶活性。单因素改变表达条件的结果表明，甲醇浓度在0．5％～1％、溶氧量在70％以上、诱导2～3d的情况下表达产量最高，达1500mg／L左右。该研究结果对防治牛皮蝇蛆痛疫苗的深入研究及毕赤酵母在寄生虫领域的应用有一定价值。     

高淀粉、高产、多抗玉米杂交种正红115的选育研究

以美国玉米带杂交种3163为基础材料,通过南北穿梭同步定向育种新方法,用自交系48-2作测验种在S1和S3早期分离世代连续进行早代测定和定向选育,同步育成玉米新自交系K169及其组配的杂交种正红115(K169×48-2)。正红115子粒粗淀粉含量高达75.7%,并具有综合品质优、产量高、抗病及抗倒伏力强、株型好和适应性广等特点。正红115适宜丘陵山区种植,具有广阔的推广应用及加工利用前景。     

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为选育高产稳产的玉米新品种应用于贵州及西南地区玉米生产,恩施州农业科学院通过自有种质与外引种质相互改良,采用杂交和连续自交定向选择对自交系N21、Y8G61进行抗逆性、结实性等方面的改良,育成新自交系NC12和E81,并组配出新杂交组合恩单115.结果表明:恩单115在2011-2012年参加贵州省玉米新品种区域试验A组(东部组)的平均产量为9 649.5 kg/hm2,比对照(贵单8号)增产10.68％;2012年生产试验的平均产量为8 850 kg/hm2,比对照(贵单8号)增产15.15％.恩单115于2013年通过贵州省农作物品种审定委员会审定,适宜贵州中东部地区种植.     

抗番茄斑点萎蔫病毒甜椒新品种中椒115号的选育

中椒115 号是以自交系78090-3-1 为母本，以0516-Tsw为父本配制而成的甜椒一代杂种。中早熟，始花节位为第9～10 节，定植后35 d（天）开始采收青熟果。果实灯笼形，果色浅绿，果面光滑，3 或4 心室，纵径10 cm，横径7 cm，典型果 单果质量130～150 g。抗逆性强，抗番茄斑点萎蔫病毒病，中抗黄瓜花叶病毒病和疫病。丰产、稳产，中后期仍能保持较高 的结果率和较好的商品性，产量3 000 kg·（667 m ²） ^-1 左右。适于南菜北运基地露地早熟栽培，也可作保护地栽培。     

优质稻宜优115再生稻的特征特性及高产栽培调控技术

宜优115是南平市农科所用自行选育的恢复系南恢115与宜香1A配组育成的杂交稻新组合,2007年通过福建省农作物品种审定委员会审定.表现高产、稳产、增产潜力大、品质优、适应性广、综合性状突出,适宜福建省稻区种植。作再生稻种植具有头季稻产量高、再生能力强、抗逆性强等特点。主要介绍了其特征特性及再生稻高产栽培调控技术。