热应激对猪睾丸Cyt-C和Caspase-3表达的影响

【目的】环境高温影响猪精子发生和精液品质,但其分子机制尚不清楚。为此探索环境温度升高导致的热应激对猪睾丸细胞凋亡调节蛋白Cyt-C和Caspase-3表达的影响。【方法】性成熟长白公猪9头,对照组3头,饲养在20—27℃的猪舍环境;短期热应激处理组(heat stress 7 d,HS7d)3头,每天置37—40℃的猪舍环境3 h,连续7 d;一个精子发生周期热应激处理组(heat stress 42 d,HS42d)3头,每天置37—40℃的猪舍环境3 h,连续42 d;每天于热应激处理后将猪驱赶回20—27℃的猪舍。手术摘取睾丸组织,用QRT-PCR、Western blot和免疫组织化学方法检测Cyt-C和Caspase-3表达与定位的变化。【结果】QPT-PCR结果显示,与对照组相比,热应激处理7 d组和42 d组,Cyt-C和Caspase-3m RNA的相对表达量均显著升高;热应激处理7 d组Cyt-C和Caspase-3m RNA的相对表达量最高。Western blot结果显示,热应激处理7 d组和42 d组Cyt-C和Caspase-3蛋白水平与对照组相比均显著升高;热应激处理7 d组Cyt-C和Caspase-3的蛋白表达水平最高。免疫组织化学研究发现,Cyt-C在猪睾丸组织中免疫反应阳性物定位于间质细胞、支持细胞和各个发育阶段生精细胞的胞质中,在生精细胞Cyt-C低表达于精原细胞,高表达于减数分裂后精母细胞和精子细胞。热应激处理导致Cyt-C的胞质内定位更加弥散,提示Cyt-C从线粒体到胞质的释放。Caspase-3在间质细胞和精原细胞低表达,大量减数分裂后的生精细胞呈Caspase-3阳性。与对照组相比,热应激处理导致部分支持细胞Caspase-3的表达,大量生精细胞的细胞核呈Caspase-3阳性着色。【结论】高温热应激处理导致猪睾丸Cyt-C和Caspase-3的蛋白和m RNA表达水平升高、细胞定位改变,提示Cyt-C和Caspase-3可能与热应激导致的猪精液品质下降存在关联。     

菲律宾蛤仔寡肽抗前列腺癌DU-145细胞的机制研究

为研究人工合成的菲律宾蛤仔寡肽体外抗前列腺癌细胞DU-145的活性及作用机制,实验采用流式细胞仪、激光共聚焦显微镜、Western blot等方法检测人工合成菲律宾蛤仔寡肽作用于DU-145细胞后细胞凋亡率、线粒体膜电位改变、细胞色素C表达、caspase3、caspase9的变化,并用电子显微镜观察细胞超微结构的改变。结果显示,随着药物浓度的增加和作用时间的延长,DU-145细胞的抑制率逐步增高,当药物浓度为2.5 mg/m L时,24 h抑制率为49.9%±4.1%,72 h抑制率为97.2%±7.34%;Hoechst33258染色和电子显微镜下观察发现,加药组细胞出现细胞核固缩、染色质凝集和细胞核碎片化等细胞凋亡的典型特征,随着药物浓度的增加,凋亡的细胞逐渐增多;线粒体膜电位逐步下降;Western blot检测显示药物作用后细胞内Bax表达增加,Bcl-2表达减少,Bax/Bcl-2比值增加,Cyt-C、caspase-3、caspase-9表达增加,且与药物浓度成正相关。研究表明,人工合成菲律宾蛤仔寡肽能诱导人前列腺癌细胞DU-145凋亡,可能机制为上调Bax表达、下调Bcl-2表达、增加Bax/Bcl-2比值,诱导线粒体膜电位下降,促使Cyt-C转移并激活caspase家族发生级联反应。