斑蝥素资源及其利用的研究进展

昆虫天然产物斑蝥素有明显的抗肿瘤,利尿,发泡等临床医疗作用,其抗癌机制表现在抑制癌细胞蛋白质合成,降低癌素激素水平,提高机体免疫功能等方面,斑蝥素的化学合成较为困难,生物合成前体物质主要是法呢醇。     

1.0%斑蝥素乳油对重要非靶标生物的安全性评价

参照"化学农药环境安全评价试验准则"的规定,测定了1.0%斑蝥素乳油对蜜蜂、家蚕、蝌蚪、蚯蚓、土壤微生物5类环境生物的毒性。结果表明:1.0%的斑蝥素乳油对蜜蜂24 h触杀毒性LD50为0.15μg/蜂,摄入毒性LC50为1.83 mg/L;对家蚕表现为强烈的拒食作用,24 h接触毒性LC50为0.83μg/cm2;对蝌蚪24 h和48 h LC50分别为0.93 mg/L和0.87 mg/L;对蚯蚓7 d的LC50为22.66 mg/kg;10 mg/L处理蔬菜地和小麦地土壤,对土壤微生物15 d的呼吸抑制率分别为16.1%和21.8%。以上结果表明,1.0%斑蝥素乳油对蚯蚓和土壤微生物表现为低毒,对蜜蜂和家蚕属高毒,对蝌蚪表现为中等毒性。     

高效液相色谱内标法测定斑蝥中斑蝥素的含量

采用HPLC法,建立高效液相色谱内标法测定斑蝥中斑蝥素的含量。结果表明,斑蟊素在0.05～1.00mg/mL范围内线性良好(R=0.999 9),其平均回收率为97.74%。该方法简便、快速、准确、重复性好,可用于斑蝥中斑蝥素含量测定。     

斑蝥类昆虫营养成分分析

利用现代分析手段对4种斑蝥类昆虫营养成分、微量元素、脂肪组分、氨基酸组成等进行了测定.结果表明,4种芫菁虫粉的蛋白质含量(57.06%～65.06%)高于柞蚕蛹,而脂肪含量(6.78%～12.64%)远低于后者,与世界名牌饲料添加剂秘鲁鱼粉相当;微量元素种类丰富,含量接近人体需求,有害元素Pb均未检出;脂肪组成中不饱和脂肪酸比例大、成分全,P/S值接近或超过花生油、米糖油等植物油;氨基酸组成完全,必需氨基酸总量高于秘鲁鱼粉;蛋白质组成以两种斑芫菁更接近于全蛋模式;氨基酸评分以缬氨酸和亮氨酸较高.提示芫菁虫粉在提取药用成分斑蝥素之后,仍然为一种营养价值较高且组分合理的饲料添加剂或深加工原料.     

斑蝥素诱导草地贪夜蛾（Spodoptera frugiperda）卵巢细胞系Sf9凋亡的临界条件

为进一步利用昆虫细胞研究斑蝥素对鳞翅目昆虫的毒杀机理,采用细胞形态学观察法和DNA凝胶电泳法研究斑蝥素诱导草地贪夜蛾（Spodoptera frugiperda）卵巢细胞系Sf9细胞凋亡的临界条件。结果表明：供试细胞凋亡率与斑蝥素处理剂量、时间呈现密切相关性;在较低剂量处理下,可观察到细胞凋亡。当斑蝥素质量浓度达到6.25μg/mL,处理细胞3 h或3.125μg/mL处理细胞12 h时,斑蝥素处理Sf9导致细胞出现明显畸形、形成凋亡小体等凋亡症状。DNA Ladder条件要求严格,在冰浴条件下,当斑蝥素处理质量浓度达到6.25μg/mL处理细胞24 h时,或者12.5μg/mL处理细胞12 h时,可观察到明显的DNA梯度条带。     

斑蝥素、斑蝥素酸钾及斑蝥素酸钠作用胃癌细胞的研究

采用MTT法,研究芫菁体内斑蝥素、斑蝥素酸钾及斑蝥素酸钠对胃癌SGC7901细胞的抑制作用。抑制试验斑蝥素的浓度分别为10.20、20.41、30.61、40.82、51.02μmol/L,斑蝥素酸钾浓度分别为7.75、15.50、23.26、31.01、38.76μmol/L,斑蝥素酸钠浓度分别为8.85、17.70、26.55、35.40、44.25μmol/L。结果表明:斑蝥素浓度为10.20μmol/L时,对SGC7901细胞有显著抑制作用,且随药物浓度升高其抑制作用增强,呈剂量效应关系,抑制中浓度为16.17μmol/L;斑蝥素酸钾浓度为15.50μmol/L时,对SGC7901细胞有显著抑制作用,且随药物浓度升高其抑制作用增强,呈剂量效应关系,抑制中浓度为20.41μmol/L;斑蝥素酸钠浓度为17.70μmol/L时,对SGC7901细胞有显著抑制作用,且随药物浓度升高其抑制作用增强,呈剂量效应关系,抑制中浓度为27.83μmol/L。斑蝥素酸钾和斑蝥素酸钠对胃癌SGC7901细胞的作用比斑蝥素差,提示它们对胃癌的治疗效果可能不如斑蝥素。     

大斑芫菁活体提取斑蝥毒素的研究

应用自行设计的电刺激活体提毒装置,对大斑芫菁Mylabris phalerata成虫活体斑蝥毒素(Canthafidin C10H12O4)提取进行了研究。本实验设置了1V、2V、3V和5V四种刺激电压和1s、2s、3s和5s四个刺激时间。研究结果表明：活体取毒的适宜刺激条件为2V刺激电压下刺激2秒钟。     

斑蝥素与几种杀虫剂混配的增效作用

在前期工作中,初步发现斑蝥素具有杀虫活性,同时发现其具有增效作用。为进一步探索斑蝥素与杀虫剂的混配增效效果,筛选具有增效作用的组合物,采用浸叶法在室内条件下测定了1．0%斑蝥素乳油与5种杀虫剂单剂及其混配制剂对小菜蛾Plutella xylostella(L．)的毒力,筛选出了药剂间的较佳配比,评价了各配方的增效作用。研究结果表明,斑蝥素与阿维菌素混配,协同毒力指数测定值为-1．75,表现为相加作用;斑蝥素与硫丹、氟啶脲、杀虫双和灭多威等4种杀虫剂分别以LC_(50)剂量比为1:1、2:3、3:7和4:1比例混配,其共毒系数分别为408．11、718．97、216．39和414．64,CTC测定值均显著大于100,表明斑蝥素与这4种供试药剂混配均具有不同的增效作用,其中与氟啶脲混配增效比值最大,增效效果最为显著。     

斑蝥素人工抗原的制备与初步鉴定

【目的】合成并鉴定斑蝥素人工抗原,为建立斑蝥素的酶联免疫分析方法提供依据。【方法】对斑蝥素进行化学修饰,引入羟基合成N-羟乙基斑蝥酰亚胺(BY),并经MS、NMR、IR法对其结构进行鉴定。进一步经琥珀酸酐法合成琥珀酸酯(BYS)并纯化,在此基础上,分别采用混合酸酐法和碳二亚胺法将半抗原与载体蛋白偶联,合成斑蝥素的人工抗原(BYS-HS-BSA、BYS-TY-BSA、BYS-HS-OVA、BYS-TY-OVA),并经MS、IR法对人工抗原进行定性鉴定。免疫原免疫兔子获得抗斑蝥素多克隆抗体并测定其效价。【结果】成功合成了一种斑蝥素半抗原,与载体蛋白BSA、OVA偶联后得到免疫原(BYS-HS-BSA、BYS-TY-BSA)和包被原(BYS-HS-OVA、BYS-TY-OVA),免疫新西兰大白兔获得多克隆抗体,效价分别为8 000和16 000。【结论】初步合成并鉴定了斑蝥素人工抗原,在设计合成斑蝥素的半抗原时不能破坏其关键的环结构。