药用植物半夏细胞悬浮培养和植株再生体系建立研究

为了建立甘肃产药用植物半夏的细胞悬浮培养和植株再生体系,通过对其不同外质体筛选、愈伤组织诱导和悬浮培养的愈伤组织类型、激素水平、起始密度、震荡速率等影响因素以及细胞生长状态、生长曲线和pH值变化等指标的研究.结果表明:以叶柄为外质体,选择"松散型"愈伤组织和2×105个/mL的起始培养密度,在附加2,4-D 2.0 mg/L BA 0.5 mg/L NAA0.5 mg/L的1/2 MS培养基上培养,温度(23±2)℃,转速90 rpm,pH值6.0,黑暗培养为最适悬浮培养体系;经检测细胞生长曲线呈"S"型,培养液pH随着细胞的生长先上升后下降,18 d时细胞基数达到最大值;悬浮继代培养后,通过降低或停止震荡转速,在添加BA 0.5 mg/L NAA0.5 mg/L的MS液体和固体培养基上可诱导分化出芽和根,进一步形成完整的植株.     

<Emphasis Type="Italic">In vitro</Emphasis> screening for sunflower (<Emphasis Type="Italic">Helianthus annuus</Emphasis>L.) resistant calli to <Emphasis Type="Italic">Diaporthe helianthi</Emphasis> fungal culture filtrate

Diaporthe helianthi the causal agent of sunflower (Helianthus annuus) stem canker, causes significant reductions in yield and oil content in most sunflower-growing areas. With the aim of enhancing host resistance, we selected in vitro sunflower calli against culture filtrates of two pathogen isolates (7/96 and 101/96). This technique may be an effective and rapid tool to discriminate the most virulent D. helianthi isolate and to screen for host resistance in the early stage of a breeding programme. Further investigation on the mechanisms involved in defence pathways showed no induction of salicylic acid and pathogenesis-related proteins in calli, indicating that the host resistance is not associated with Systemic Acquired Resistance but probably other biochemical mechanisms.     

胡萝卜悬浮细胞系及高效再生系统的建立

以胡萝卜块根为材料诱导愈伤组织,并建立悬浮细胞系,然后将悬浮细胞和愈伤组织分别转入分化培养基进行分化培养。结果表明,胡萝卜块根形成层愈伤组织诱导率为100%,最佳激素种类和用量为2,4!D0.1mg/L;根据外观可将愈伤组织大致分为4种类型,I型是直接建立悬浮细胞系的良好来源,Ⅲ型经继代培养后可用于悬浮细胞系的建立;静止法是胡萝卜悬浮细胞系简单而有效的继代方法;胡萝卜愈伤组织分化的最佳培养基是MS或B5基本培养基,MS培养基上的再生苗可直接生根,而B5培养基上的再生苗在原培养基上很难生根,需要转移到MS培养基上才能生根。     

烟嘧磺隆对糯玉米愈伤组织生长及分化的影响

以糯玉米的愈伤组织为研究对象,研究不同浓度烟嘧磺隆对愈伤组织生长分化的影响,确定合适的筛选浓度。结果表明,烟嘧磺隆对糯玉米愈伤组织的存活率、相对生长量及分化率均有不同程度抑制作用。经烟嘧磺隆处理的愈伤组织颜色略深、质地紧密,褐化增多。在烟嘧磺隆浓度为160 mg/kg 条件下,玉米愈伤组织的存活率及分化率均达最低,分别为1.31%和0。110 mg/kg浓度烟嘧磺隆对糯玉米愈伤组织具有明显的致死作用。     

甜菜基因型的筛选及胚性细胞系建立的研究

通过以甜菜未成熟胚为外植体诱导愈伤组织，再将产生的愈伤组织转移至分化培养基（ＭＳＢ培养基附加１．０ｍｇ／Ｌ６－ＢＡ、３％蔗糖、８％琼脂）进行分化力测试实脸，筛选出两个再生能力强的基因型─８９３０、ＧＤ＿２．通过挑选淡黄色或灰白色、呈颗粒状的愈伤组织继代培养，经调节培养基的ＩＡＡ和ＮＡＡ的浓度，得到再生能力强的胚性愈伤组织，建立了胚性细胞无性系。     

Agrobacterium-Mediated Transformation of Embryogenic Calli of Anliucheng and Regeneration of Plants Containing the Chimaeric Ribonuclease Gene

Anliucheng (Citrus sinensis Osbeck), a very seedy and widely spread acidless sweet orange cultivar in south of China, was transformed by the strain of Agrobacterium Tumefaciens EHA105 carrying pTA29-barnase gene, which will induce pollen sterility in transgenic plants. The embryogenic calli of Anliucheng were co-cultivated with Agrobacterium tumefaciens for 3 days, and then transferred to selective medium containing 50 mg L-1 basta (a kind of herbicide) for 5 weeks. The resistant calli were recovered and regenerated 118 embryoids. A total of 13 entire plants were obtained after micro-grafted on trifoliate orange. These regenerated plants were verified by PCR amplification and confirmed by PCR-Southern blotting analysis.     

两种培养基对小麦花培愈伤组织的影响

以愈组织的诱导率，颜色，质地，生长速度为指标，通过对９个小麦品种（系）在Ｃ１７和培养基上的培养对比试验，发现除９１３品系外，其余小麦品种（系）在Ｃ１７的愈伤的组织诱导率高于癸培基上培养的诱导率，但从愈伤组织的颜色，质地，生长速度方面考查愈伤组织的质量，在癸培养上诱导产生的愈伤组织的质量较Ｃ１７培养基上的好，最后还讨论了两种培养基的改进方法。     

农杆菌介导大豆子叶节系统的两个问题突破

为解决大豆子叶节系统存在的再生和检测问题,对影响丛生芽伸长和植株检测的因素进行研究.以大豆品种黑农35的子叶节为外植体,利用L934正交试验确定影响再生系统丛生芽伸长的因素及水平,将转基因小植株的叶片培养愈伤组织以提取基因组DNA进行Southern检测.结果表明,丛生芽伸长的最佳组合为继代培养基与初始芽诱导培养基的6-BA浓度比为1/5,芽伸长培养基中添加50 mg L-1Glu、0.5 mg L-1 GA3、0.5 mg L-1ZT;Southern杂交信号说明利用叶片培养的愈伤组织能够提取足够量的基因组DNA.     

穿山龙愈伤组织培养研究

以穿龙薯蓣的叶柄、茎段、叶和茎尖为材料,对其进行了愈伤组织培养。结果表明:穿龙薯蓣不同外植体(叶柄、茎段、叶、茎尖)均能诱导出愈伤组织,其中以茎尖形成愈伤组织最快,皂甙元含量最高;不同培养基、pH值、接种量、温度、激素等因子对愈伤组织的形成、生长及皂甙元含量有很大的影响;改良MS培养基、2,4-D浓度为3.0~5.0mg/L、BA为1.0mg/L的激素配比使愈伤组织的生长量、产物含量最高。     

培养基和培养时间对水稻成熟和胚培养力的影响

本试验研究了10种不同成份的培养基以及延长诱导培养时间对水稻成熟种胚培养力的影响。结果表明,水稻品种对不同培养基的反应是不同的。以∠S—5(∠S基本培养基+1.5mg/L2.4—D+1mg/1 KT+2%蔗糖+0.8%琼脂,pH5.8)培养基的愈伤组织诱导率为最高,诱导的愈伤组织质量较好。诱导的愈伤组织其绿苗分化率也较高,诱导培养60天其愈伤组织仍具有较高的分化能力。