Oncolytic Vaccinia Virus Carrying Aphrocallistes vastus Lectin (oncoVV-AVL) Enhances Inflammatory Response in Hepatocellular Carcinoma Cells

Aphrocallistes vastus lectin (AVL) is a C-type marine lectin derived from sponges. Our previous study demonstrated that oncolytic vaccinia virus carrying AVL (oncoVV-AVL) significantly enhanced the cytotoxicity of oncoVV in cervical cancer, colorectal cancer and hepatocellular carcinoma through the activation of Ras/ERK, MAPK/ERK and PI3K/Akt signaling pathways. In this study, the inflammatory response induced by oncoVV-AVL in a hepatocellular carcinoma cell (HCC) model was investigated. The results showed that oncoVV-AVL increased the levels of inflammatory cytokines including IL-6, IL-8 and TNF-α through activating the AP-1 signaling pathway in HCC. This study provides novel insights into the utilization of lectin AVL in the field of cancer therapy.     

Anticancer Activity of Mannose-Specific Lectin,BPL2, from Marine Green Alga Bryopsis plumosa

Lectin is a carbohydrate-binding protein that recognizes specific cells by binding to cell-surface polysaccharides. Tumor cells generally show various glycosylation patterns, making them distinguishable from non-cancerous cells. Consequently, lectin has been suggested as a good anticancer agent. Herein, the anticancer activity of Bryopsis plumosa lectins (BPL1, BPL2, and BPL3) was screened and tested against lung cancer cell lines (A549, H460, and H1299). BPL2 showed high anticancer activity compared to BPL1 and BPL3. Cell viability was dependent on BPL2 concentration and incubation time. The IC₅₀ value for lung cancer cells was 50 μg/mL after 24 h of incubation in BPL2 containing medium; however, BPL2 (50 μg/mL) showed weak toxicity in non-cancerous cells (MRC5). BPL2 affected cancer cell growth while non-cancerous cells were less affected. Further, BPL2 (20 μg/mL) inhibited cancer cell invasion and migration (rates were ˂20%). BPL2 induced the downregulation of epithelial-to-mesenchymal transition-related genes (Zeb1, vimentin, and Twist). Co-treatment with BPL2 and gefitinib (10 μg/mL and 10 μM, respectively) showed a synergistic effect compared with monotherapy. BPL2 or gefitinib monotherapy resulted in approximately 90% and 70% cell viability, respectively, with concomitant treatment showing 40% cell viability. Overall, BPL2 can be considered a good candidate for development into an anticancer agent.     

脂多糖对大黄鱼原代头肾巨噬细胞的激活作用

为了揭示硬骨鱼C型凝集素受体 (C-type lectin receptor,CTLR)的生物学功能,实验以从大黄鱼转录组数据库中筛选出的一个CTLR基因—C型凝集素结构域家族4成员E基因 (Clec4e)为研究对象,研究其分子特征、表达分布和凝集特性。结果显示,LcClec4e cDNA全长1 546 bp,开放阅读框 (ORF)771 bp,编码254个氨基酸。LcClec4e的N端有一个跨膜区,无信号肽,C端含有一个糖识别结构域 (CRD),其中含有糖结合位点EPN和WFD以及6个可形成二硫键的保守半胱氨酸。系统发育分析表明,LcClec4e与多种鲈形目鱼类Clec4e具有较近的亲缘关系。荧光定量PCR结果显示,LcClec4e在所检测的10种组织中呈组成型分布,且在肝脏中表达量最高;LcClec4e在来源于大黄鱼头肾组织的原代巨噬细胞、淋巴细胞和粒细胞中均有表达,且在巨噬细胞中表达量最高;经灭活溶藻弧菌刺激后,LcClec4e在3种免疫细胞中的表达均极显著上调。原核表达的重组LcClec4e胞外段 (recombinant LcClec4e-extracellular domain,rLcClec4e-ex)具有Ca²⁺依赖性的凝集活性,可凝集小鼠、家兔的红细胞,以及嗜水气单胞菌、变形假单胞菌、溶藻弧菌和坎氏弧菌等4种水产常见的革兰氏阴性菌。D-葡萄糖、D-果糖、D-甘露糖、D-麦芽糖、α-乳糖和脂多糖均可抑制rLcClec4e-ex对大黄鱼重要病原菌变形假单胞菌的凝集作用,说明LcClec4e可能与变形假单胞菌表面的糖类物质结合。上述结果提示,LcClec4e可能作为一种模式识别受体,通过结合病原菌表面的糖类病原体相关分子模式来识别病原,参与大黄鱼抗细菌感染的免疫防御。

     

锯缘青蟹血清凝集素的特性和盐析提取研究

对锯缘青蟹(Scylla serrate)血清凝集素的凝集特性进行了研究。结果显示:锯缘青蟹血清凝集素对人、兔、鼠、鸽子、中华鳖、鲫红细胞均有凝集作用,其中对小鼠红细胞凝集活性最强,血凝活性可达29;凝集素活性最适pH 6.0~7.4;盐度对凝集活力有较大影响,NaC l浓度在0.4~0.5 mol/L时基本失活;未纯化血清凝集素对Ca2+、Mg2+未表现出依赖性;凝集素活性能被N-乙酰葡萄糖胺特异性抑制。对青蟹血清凝集素进行硫酸铵分级沉淀分离后,发现凝集素活性主要分布在25%饱和度硫酸铵沉淀区,该组分凝集比活比血清高27.44倍,SDS-PAGE结果表明主要蛋白带型为79 ku、75 ku、72 ku。     

地稔凝集素的提取及凝血活性的研究

为研究和利用地稔的促凝血活性物质,以地稔为试材,提取地稔凝集素,研究pH、温度和糖等理化因素对凝血活性的影响。结果表明:经硫酸铵沉淀及透析提取的地稔凝集素具有红细胞凝集活性;碱性条件下,抑制作用明显,而酸性条件有较强促进作用;温度对凝集素凝血活性影响很小;半乳糖有明显促进作用。     

人工合成gna基因在小麦中的表达及其抗蚜虫效果研究

利用经密码子优化的、人工合成雪花莲凝集素(Galanthusnivalisagglutinin),gna基因及RbcS启动子构建了高效特异表达载体pBAC202,通过基因枪轰击小麦幼胚和幼穗,将外源gna基因导入到3个高产小麦(TriticumaestivumL.)品种中,获得42个转基因后代株系。对转基因后代植株进行了DNA点杂交、PCR及PCR-Southern验证,确认外源gna基因已成功地整合到小麦基因组中。进一步的凝集素活性检测表明,小麦叶片中表达的凝集素可使红细胞凝集,并具有正常的生物学活性。转基因植株在人工饲养条件下进行抗蚜虫(Rhopalosiphumpadi)试验,蚜口密度抑制率从19%～73%不等,部分株系抑虫效果较好。利用转基因的方式可将外源抗虫基因gna导入到小麦中,并可有效地增强小麦的抗蚜能力,为选育具抗虫特性的优质小麦提供新的途径。     

菊芋块茎发育期凝集素基因的鉴定和表达分析

凝集素是生物中普遍存在的一类糖结合蛋白,通过特异识别不同糖基而介导多种生物过程.本研究以'南菊芋1号'为研究材料,克隆并鉴定了12个凝集素基因.利用生物信息学分析这些基因编码蛋白的性质表明:等电点为4.96～5.23,偏酸性;依据其特异性糖基结合域归为三类:8个属于木菠萝家族(JRL),2个属于雪花莲家族(GNA),2...     

裙带菜凝集素对鲫的免疫诱导

将从裙带菜Undaria pinnatifida中提取的凝集素作为免疫诱导制剂,注射到鲫Carassius auratusw体内,在连续注射7 d和9 d时,分别对鲫血清中的溶菌酶、超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)的酶活性进行测定,结果表明,注射凝集素7 d和9 d时,鲫血清中溶菌酶的酶活性比对照组分别提高18.83%、12.69%,SOD的酶活性比对照组分别提高66.67%、139.99%,CAT酶活性比对照组分别提高16.60%、63.63%。说明凝集素可以明显提高鲫血清中这3种酶的表达水平。     

3种海绵中的甘露聚糖专一性凝集素

在3种海绵(Myxilla incrustans,Codosphaera sp．,Biemrta variantia)中发现了与甘露聚糖结合的专一性凝集素,甘露聚糖的甘露糖残基是通过α(1→2)和α(1→6)相互联接的。对3种海绵凝集素的血凝抑制测试的结果表明,对于海绵Myxilla incrustarts凝集素而言,猪腺体糖蛋白、脱酸猪腺体糖蛋白、胎球蛋白和脱酸胎球蛋白都是比较好的抑制剂;对于海绵Coelosphaera sp．凝集素而言,仅猪腺体糖蛋白是有效的抑制剂;而对海绵Biemna variantia凝集素来说,猪腺体糖蛋白和脱酸猪腺体糖蛋白是有效的抑制剂。这3种凝集素对自然的和用胰蛋白酶消化后的人体红细胞(B型)都有很好的凝集作用,它们的血凝活性不依赖钙离子的存在。     

理化因素对白芸豆凝集素生物学活性影响

[目的]研究物理与化学因子对白芸豆凝集素生物学活性的影响,为白芸豆凝集素开发利用奠定理论基础和提供技术参考.[方法]白芸豆（Phaseolus vulgarisL）种子经硫酸铵分级沉淀、DEAE-Sepharose离子交换和Sephadex G-100凝胶柱层析得到凝集素（PVL）;然后以不同温度和pH梯度、不同金属离子、不同变性剂处理样品,通过倍比稀释法测定凝集素的生物学活性.[结果]白芸豆凝集素能使兔血红细胞发生凝集,在20～70℃红细胞凝集活性不受影响,当温度达到80℃时凝集素样品仅有25％凝血活性,85℃加热30 min凝血活性全部消失.用EDTA溶液处理后,白芸豆凝集素失去凝血活性,金属离子Mg2＋和K＋能恢复凝血活性,Mn2＋能完全恢复凝血活性,Ba2＋、Cu2＋、Fe3＋、Ca2＋不能使凝血活性恢复.白芸豆凝集素在缓冲液pH低于4.0时凝血活性逐步降低,在pH 3.0时,活性仅有45％;在缓冲液pH高于7.2时活性逐步降低,pH 9.0时凝血活性仅有44％.3种变性剂变性试验中,脲能使凝集素凝血活性降低70％,盐酸胍能降低30％,SDS能降低18％.[结论]白芸豆凝集素具很强的热稳定性和广谱酸碱度适应能力;凝血活性依赖Mn2＋等金属离子,且仅能被变性剂6 mol/L脲部分抑制.在实际应用中,可根据适宜条件控制其物理和化学因素,防止凝集素变性失活.