刺梨及其近缘种PCR实验体系的建立与优化

以刺梨及其近缘种月季为试材,进行了RAPD-PCR实验参数的确立和优化试验。结果表明,刺梨及月季25μL反应体系的最优组成为2.5μL10×反应缓冲液,2mmol/LMg2+,0.2mmol/LdNTP,1.6mg/L模板DNA,0.4μmol/L随机引物和1.2UTaqDNA多聚酶。经PCR扩增验证,此反应体系亦适宜于刺梨的部分近缘种,可有效用于RAPD分析;通过将退火温度提高至50℃或采用“Touchdown”扩增程序,并在50μL反应体系中适当增加特异引物对浓度(1.0μmol/L),模板DNA(4.0mg/L)和TaqDNA多聚酶(3.0U/管)的使用量,建立起适合于刺梨特异DNA片段检测及回收的特异PCR扩增实验体系,为刺梨的分子克隆奠定了技术基础。     

Reproductive barriers to hybridizations between narrow-leaf and broad-leaf Anoectochilus roxburghii

Narrow-leaf and broad-leaf Anoectochilus roxburghii were used as reciprocal parents to explore the reason for low seed setting rate. Pollen-pistil interaction was observed by fluorescence microscopy and hybrid embryo development by paraffin section technology. The results indicated that pollen tube growth could reach the embryo sac, and double fertilization could be completed. These findings showed that a pre-fertilization barrier was not the major factor in the cross of narrow-leaf and broad-leaf A. roxburghii. The endosperm development of the hybrid was abnormal and eventually promoted abortion of the embryos. A post-fertilization barrier appears to be the major factor for low seed setting rate in the cross of narrow-leaf and broad-leaf A. roxburghii. In addition, an efficient protocol of embryo rescue, the development of which is reported elsewhere, was used to compare the time needed for rescue between the reciprocal crosses.     

钙、钙调素在刺梨果实发育过程中的含量变化研究

为探讨Ca2 、CaM在刺梨果实发育过程中的含量变化,以贵农5号优系为试材,测定其果实发育过程中Ca2 和CaM的含量及可溶性总糖、还原糖、维生素C的含量.结果表明:刺梨果实发育过程中,Ca2 含量前期高后期低,呈逐渐下降的趋势;CaM含量呈波动状态,在果实发育的中前期,与果实发育状况之间成相互响应的曲线变化;果实发育的后期,CaM含量处于较高的水平,与此期可溶性总糖、还原糖、维生素C的高水平相对应.本文还对Ca2 、CaM在刺梨果实发育的不同阶段可能的调控机理进行了讨论.     

改进RetinaNet的刺梨果实图像识别

为实现加工车间刺梨果实的快速识别,提出一种基于改进的RetinaNet刺梨果实图像的识别方法。基于RetinaNet的模型,对RetinaNet框架中Focal loss的bias进行改进,使其能根据不同的情况控制bias的取值,再运用维度聚类算法找出Anchor的较好尺寸并匹配到相对应的特征层,对卷积神经网络结构进行优化。通过改进RetinaNet目标检测算法对7426幅刺梨果实图像进行检测识别,并与原始RetinaNet目标检测算法对比。试验结果表明:改进的RetinaNet网络模型识别方法对6类刺梨果实的识别率分别为99.47%、91.42%、96.92%、90.92%、96.89%和93.53%,平均识别率为94.86%;相对于原始RetinaNet目标检测算法,改进算法的识别准确率提高4.21%,单个刺梨果实检测时间由60.99 ms缩减到57.91 ms,检测时间缩短5.05%。本文改进算法对加工车间刺梨果实的识别具有较高的正确率和实用性。     

超声波辅助溶剂法提取金线莲总黄酮工艺优化

旨在研究金线莲总黄酮的最佳提取工艺条件。采用超声波辅助溶剂法,在单因素实验的基础上,采用响应面法优化了金线莲总黄酮的提取工艺。结果表明:当金线莲颗粒度为100目、乙醇体积分数为40%、料液比为1:40(mg:m L)、超声波功率为250 W、超声波时间为30 min时,所得金线莲总黄酮提取率为2.13%。超声波辅助溶剂法强化了金线莲总黄酮的提取效果。     

菠萝、刺梨、芦荟复合发酵饮料的研制

复合发酵饮料是以菠萝、刺梨、芦荟的汁液为原料,用正交实验筛选出最佳的配方,通过酒精发酵和醋酸发酵后,发酵液经过科学调配,可制得营养丰富的饮料。其色泽诱人,风味独特,是天然营养保健品。     

基于果实品质与EST-SSR标记的刺梨居群遗传多样性分析及核心种质构建

通过分析评价野生刺梨(Rosa roxburghii Tratt.)资源居群遗传多样性和遗传结构,同时构建核心种质,为刺梨资源的保护和发掘利用提供科学依据。本研究利用10对EST-SSR引物和9个果实品质性状指标对收集的12个刺梨自然居群(共102份种质)的遗传多样性及遗传结构进行分析,同时结合原贵州省32份初级核心种质,采用位点优先取样策略进一步构建西南地区核心种质。结果表明,黔西(QX)居群拥有最高的Shannon信息指数I=0.6965,基因多样性指数h=0.3935,多态位点百分率p=84.62%;而古丈(GZ)居群则无论在分子数据还是表型数据都表现为遗传多样性最低;AMOVA分析表明刺梨居群内遗传变异在87%以上,居群间基因流Nem在3.5以上、平均Nei’s遗传距离(GD)0.223。构建的19份核心种质等位基因保留率和稀有等位基因保留率均为100%,能够代表原种质的遗传多样性。西南地区野生刺梨的遗传变异主要发生在居群内,居群间具有基因交流频繁、Nei’s遗传距离小等特点,构建的19份核心种质从等位基因保留率、稀有等位基因保留率及地理分布均能够较好地代表原种质的遗传多样性。自然居群以黔西(QX)居群遗传多样性最高。因此,野生刺梨的保护策略可采用就地保护黔西(QX)居群与迁地保护19份核心种质相结合的方法进行。     

台湾金线连微繁技术的改进与移栽研究

台湾金线连经组织培养诱芽微繁能形成完整植株,但生长太慢,繁殖系数太低。在诱芽培养基中添加2,4D,改用诱导类原球茎微繁,能提高繁殖系数和植株的生长速度,并能移栽成活。通过对试管苗移栽前的生根处理和移栽基质的研究,摸索出了提高移栽成活率的经验。     

金线莲扦插繁殖试验初报

通过金线莲繁殖试验,在西双版纳雨季,扦插基物以陶粒+河沙比陶粒+腐殖土好,带叶的比不带叶好;旱季,陶粒+甘蔗渣比陶粒好,无叶苗成活率高;大苗比小苗成活率高。     

高温胁迫下外源水杨酸对金线兰抗氧化酶活性的影响

为给规模化生产金线兰提供理论依据和技术支持,探索了高温胁迫下外源水杨酸(SA)对金线兰抗氧化酶的影响。结果表明:高温条件下,0.5～1.5mmol/L外源SA均可提高金线兰的SOD、POD和CAT活性;外源SA不能诱导SOD和CAT同工酶新酶带的表达,但有新的POD酶带产生。说明,外源SA通过调节金线兰抗氧化酶系统,缓解了高温胁迫对金线兰的伤害。