大豆主要过敏原Gly m Bd30K蛋白单克隆抗体的制备与应用

利用大豆主要过敏原Gly m Bd 30K蛋白抗原表位蛋白为免疫原免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤NS-1细胞融合.采用半固体培养基法和有限稀释法相结合的方法快速筛选获得稳定分泌的特异性杂交瘤细胞,用杂交瘤细胞株诱生小鼠腹水,应用蛋白A亲和层析法进行抗体纯化.采用Ig类与亚类鉴定试剂盒鉴定该单克隆抗体...     

体外模拟淡水鱼小清蛋白对胃肠消化的影响

大多数食物过敏原的理化性质决定了蛋白质在消化道中的稳定性.模拟胃液(simulated gastric fluid,SGF)的稳定性是评估食物过敏的一个重要参数.为了解一种主要的鱼类过敏原小清蛋白(parvalbumin,PV)与来自鲤鱼(Cyprinus carpio)和鲢鱼(Hypophthalmichthys molhrix)肌肉中的非致敏性蛋白在SGF和模拟肠液(simulated intestinal fluid,SIF)中的稳定性差异,本研究采用3种蛋白水解酶(胃蛋白酶、胰蛋白酶和来自猪的胰凝乳蛋白酶)来模拟人(Homo sapiens)体肠道的消化蛋白酶;结合两次三氯乙酸沉淀法和凝胶过滤层析法纯化PV,通过Tricine-十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(Tricine-sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis,Tricine-SDS-PAGE)和Western blot对3种蛋白在模拟肠胃液中的稳定性进行了评估.结果显示,鲤鱼和鲢鱼的PV都获得了分子量约10kD的蛋白,同时在SGF中鲤鱼和鲢鱼的纯化PV也获得了相同的分子量蛋白.胃蛋白酶使原先的PV带几乎在60 min内完全降解,并观察到一些稳定的肽片段,而胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶在240 min后都无法有效降解PV.在SGF中的非致敏性鱼浆蛋白在很短的时间内迅速降解,而PV的消化时间延长.Western blot分析表明,抗鲢鱼PV多克隆抗体可以特异性地检测到PV及其降解产物.PV比非致敏性蛋白更能抵抗蛋白酶消化,相比胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶,胃蛋白酶处理能更有效地减少超敏反应.研究结果为未来低致敏性鱼产品的开发提供了理论参考.     

芝麻主要过敏原油质蛋白的基因克隆和原核表达

为克隆黑、白芝麻主要过敏原油质蛋白Oleosins的基因并在原核细胞中对其进行表达,本研究分别提取黑、白芝麻的总RNA,逆转录合成cDNA,根据序列设计简并引物,扩增芝麻主要过敏原油质蛋白Oleosins基因的完整开放阅读框,并与pET-28a载体连接,测序鉴定后转化大肠杆菌E.coliBL21(DE3)及用IPTG诱导表达。结果表明克隆获得黑、白芝麻主要过敏原油质蛋白Oleosins的全长基因约为438bp的开放阅读框(包括终止密码子),编码145个氨基酸。所编码的蛋白相对分子质量约为15.5kDa,为小分子量蛋白,等电点为5.18,与理论值相符。序列同源性分析发现其与数据库中已知的黑、白芝麻油质蛋白Oleosins基因同源性很高(GenBank黑、白芝麻油质蛋白基因登录号分别为EU999158和EU999159),并在DE3中高效表达。     

苗期叶面喷施大丽花轮枝孢激活蛋白(VdAL)对黄瓜商品苗贮藏质量的影响

为了探究大丽花轮枝孢激活蛋白(Verticilliam dahliae Allergen Asp f2-like,VdAL)干粉制剂对黄瓜商品苗贮藏质量的影响,以黄瓜幼苗为试验材料,在育苗期进行了3次不同浓度叶面喷施处理,分析贮藏前与贮藏4 d后黄瓜幼苗质量相关指标以及定植后3~6 d恢复生长指标。结果表明:1.25 g·L~(-1)大丽花轮枝孢激活蛋白处理可以显著增强黄瓜幼苗的耐贮运性,与其他处理相比,该处理浓度贮藏过程中叶绿素含量稳定,定植后恢复生长快,表明育苗期叶面喷施适宜浓度的大丽花轮枝孢激活蛋白,有利于提高黄瓜商品苗的贮藏质量。     

Young rice protein as a new source of low allergenic plant-base protein

New plant-based milk protein substitutes that do not exhibit immune-mediated adverse effects are in high demand. In-vitro digestibility (oral, gastric and duodenal) of rice was investigated at flowery, milky, dough and mature stages using SDS-PAGE and band densitometry. Possible allergenic proteins found were 13–14, 22–23, 37–39, and 52 kDa. Protein content in young rice at flowery-to-milky stage (9.19–11.48%) was higher than rice bran (8.90%). Possible allergens of young rice rapidly decreased and completely disappeared after digestion. Digestibility of dough-to-mature stage was much slower especially for colored rice. Proteins at 13–14, 52 kDa and 13–14, 37–39 kDa were indigestible in the mature stage of PT1 and RB respectively. High protein content and low allergic potential of young rice supported its possible use as a new plant-based protein alternative.     

焦磷酸测序技术检测大豆过敏原成分GlymBd 30K基因

[目的]建立一种通过焦磷酸测序技术检测大豆过敏原成分的方法。[方法]针对大豆Glym Bd30K基因设计特异性PCR引物和焦磷酸测序引物,利用设计的特异性引物扩增各测试材料的特异基因片段并进行焦磷酸测序。[结果]该检测方法对大豆过敏原成分具有非常好的重现性和特异性,测序结果在Gen Bank中进行同源性比对分析,表明目标序列能够作为鉴定Glym Bd 30K基因很好的序列。[结论]为食品中的大豆过敏原成分快速检测提供很好的技术支撑。     

外施维大利和褪黑素对肉桂酸胁迫下豌豆幼苗生理的影响

为探究肉桂酸胁迫下豌豆(Pisum sativum Linn.)幼苗对外源物质维大利和褪黑素的生理响应。以‘定豌10号(D10)’和‘云豌8号(Y8)’为试验材料,以0.25 mmol·L^-1肉桂酸为水培溶液,喷施不同浓度维大利(0.5,2,3.5 mg·L^-1)和褪黑素(25,50,100 μmmol·L^-1)为试验处理,并设置CK1和CK2为对照组,测定肉桂酸胁迫下施加维大利和褪黑素后豌豆幼苗的生长和生理指标。结果表明：喷施褪黑素后,D10地下部超氧化物歧化酶及地上和地下部过氧化物酶活性显著增强;Y8地上部过氧化物酶活性及脯氨酸含量显著增加,地上部丙二醛含量显著降低。喷施维大利后,D10和Y8地上部脯氨酸含量均显著增强,地上部丙二醛含量均显著降低,而Y8地下部超氧化物歧化酶和地上部过氧化物酶活性显著增强。隶属函数综合分析表明,2 mg·L^-1维大利和50 μmol·L^-1褪黑素处理对肉桂酸胁迫下D10和Y8豌豆幼苗的缓解效果最好。表明外源喷施适宜浓度的维大利和褪黑素可缓解肉桂酸胁迫对豌豆幼苗的抑制作用。     

凡纳滨对虾原肌球蛋白基因表达模式与重组表达

根据相近物种的同类基因设计引物,从凡纳滨对虾Litopenaeus vannamei肌肉组织中克隆获得原肌球蛋白基因（TPMS）,长度为901bp,其中包含长度为852bp的完整开放阅读框,编码原肌球蛋白分子量为32．8kDa;RT—PCR结果显示,原肌球蛋白在心、肝胰腺、胃、鳃、肠和肌肉组织中均有表达,在肌肉中表达量最高,在鳃中表达量最低;将原肌球蛋白基因构建原核重组表达载体TPMS—pET30a,转化受体菌株BL21（DE3）并利用IPTG诱导后能够大量表达,蛋白分子量为38．2kDa;经优化,IPTG的最适诱导浓度为0．05mmol／L,最适诱导时间为4h;经过亲和纯化后,能够得到纯度90％以上的重组表达蛋白。     

用CS—930双波长簿层扫描仪分析去毒蓖麻饼中蓖麻碱变应原的研究报告

本文用氧化铝GF做固定相。甲苯:异丙醇:乙酸做流动相,分离去毒蓖麻饼中的蓖麻碱。用圆盘电泳方法分离饼中变应原。在CS—930薄层扫描仪用外标二点法定量。得到在22种不同去毒方法处理后样品的测定数据。