鸡Ii结合Rab5a和Rab7b分子的分析

本研究旨在探明鸡恒定链（invariant chain，Ii）与内吞体转运蛋白Rab5a和Rab7b结合的结构域和在细胞内共定位的特征。首先，用PCR和基因突变技术将Ii胞浆区与跨膜区[Ii_{（Cyt-Tra）}]、Ii CLIP （class Ⅱ-associated invariant chain peptide）-三聚体区[Ii_{（CLIP-TRIM）}]和Ii突变体[Ii_{（M81-87aa）}、Ii_{（M91-99aa）}和Ii_{（M81-99aa）}]分别插入pET-32a和pEGFP-C1构建相应的原核和真核重组质粒。其次，将构建的含有绿色荧光蛋白的重组质粒与实验室保存的含有红色荧光Rab5a和Rab7b的重组质粒共转染至人胚胎肾细胞系293 T，观察它们的共定位。将构建的原核重组质粒进行表达和纯化，最后用拉下法和免疫印迹检测Ii与Rab5a和Rab7b的结合域。结果表明，成功构建Ii结构域及Ii突变体的重组质粒。Ii_{（Cyt-Tra）}及Ii突变体均能与Rab5a和Rab7b在细胞内共定位，而Ii_{（CLIP-TRIM）}与空载体却不能。Ii的胞浆区和跨膜区是与Rab5a和Rab7b结合的功能结构域，而不是CLIP与三聚体区。综上所述，鸡Ii与Rab5a和Rab7b共定位和结合的区域是其胞浆区和跨膜区，而不是内质网腔区。这些结果提示Rab分子参与了Ii在胞内细胞器的转运机制，为进一步研究Ii及其载体在细胞内的转运机制和功能提供了新的途径。     

葡萄新品种‘瑞峰’的选育

‘瑞峰’是由‘沈阳玫瑰’ב峰后’杂交选育出的晚熟葡萄新品种。果穗圆锥形,平均穗质量750g,果穗疏松,坐果适中,无大小粒;果皮紫色,果粉极厚;果皮厚;果刷长,不易脱粒;果肉硬度适中,具有浓郁的玫瑰香味;果粒圆形,平均粒质量11.2g,最大15.1g;每果粒含种子1～2粒。可溶性固形物含量(w,后同)21.3%,总糖含量18.6%,总酸含量0.51%,维生素C含量45.3 mg·kg-1,品质上等。果实生育期160d,在辽宁省大连地区9月下旬成熟;萌芽率为90.0%;成枝率为98%。植株生长势强,适应性和抗病性强,对霜霉病、黑痘病、白腐病及炭疽病抗性均强于‘巨峰’。货架期7d,冷藏2个月。适合无霜期大于160d气候条件下的地区种植。     

二甲戊乐灵、异丙隆、乙氧氟草醚土壤处理对美国红枫杂草防效及安全性研究

为了明确33%二甲戊乐灵、24%乙氧氟草醚、50%异丙隆土壤处理剂在美国红枫‘秋火焰’扦插田杂草防除效果及安全性,于2018年5月在盛世绿源科技有限公司大连研发基地进行除草试验。结果表明:供试药剂33%二甲戊乐灵1728g/hm~2、2160g/hm~2与24%乙氧氟草醚180g/hm~2、216g/hm~2施药剂量对美国红枫‘秋火焰’扦插苗的生长几乎无影响,对美国红枫‘秋火焰’较安全,并且株防效均在80%以上,对独行菜、稗草、野燕麦、马唐、酸模叶蓼等防效均较好,但对野茼蒿、播娘蒿防除效果一般。以24%乙氧氟草醚180g/hm~2对杂草的防除效果最好。异丙隆1500g/hm~2株防效仅达70%,防除效果不理想,2250g/hm~2虽然有较高防效,但对美国红枫‘秋火焰’不安全,故异丙隆不宜在美国红枫‘秋火焰’扦插田应用。     

探讨CRH5型动车组制动系统的技术与原理

本文以CRH5型动车组制动系统为研究对象,在对其主要构成、种类及工作原理进行阐述和分析的基础上,预测在今后较长时期微机控制直通电空制动技术是动车组制动技术发展的主要方向与趋势,旨在引发有关方面深入研究并形成更多更好的完善和发展动车组制动技术的思路与举措。     

过表达ZmIBH1-1提高玉米苗期抗旱性

【目的】干旱是严重影响玉米生长发育进程的一个重要因素。挖掘玉米抗旱相关基因,通过转基因功能验证和转录组分析,解析关键基因在响应干旱胁迫过程中的分子调控机制,为抗旱分子育种和遗传改良提供理论依据。【方法】以玉米自交系B104（WT）为背景材料,利用农杆菌介导方法构建过表达ZmIBH1-1转基因株系（ZmIBH1-1-OE）;通过对转基因植株进行草铵膦抗性筛选、标记基因和目的基因PCR检测,以及运用实时荧光定量PCR检测目的基因的表达情况,鉴定阳性植株和株系;以WT和ZmIBH1-1-OE转基因株系为材料,通过干旱处理（20% PEG6000）,进行表型鉴定和耐旱生理生化指标测定,验证ZmIBH1-1的抗旱功能;通过对干旱胁迫下玉米4叶期转录组的比较分析,鉴定出差异表达的基因（differentially expressed genes,DEGs）;结合DAP-seq（DNA affinity purification sequencing）分析,初步确定ZmIBH1-1蛋白直接调控与抗旱相关的下游靶基因,利用基因组可视化软件IGV（integrative genomics viewer）分析ZmIBH1-1蛋白结合候选靶基因的位置,然后通过Dual-Luciferase试验验证ZmIBH1-1蛋白与靶基因的调控关系。【结果】通过玉米遗传转化获得12个转化事件;T₃代中,能同时检测到标记基因Bar和目的基因ZmIBH1-1的植株有458个,实时荧光定量PCR检测结果表明,ZmIBH1-1-OE中ZmIBH1-1的表达量显著高于WT,株系3和株系8表达量最高,将其自交获得T₄代转基因株系用于后续试验。在干旱胁迫条件下,ZmIBH1-1-OE株系存活率、叶片相对含水量、叶绿素含量、可溶性蛋白含量及其生理生化指标（超氧化物歧化酶、过氧化物酶、过氧化氢酶活性）均显著高于WT,说明玉米中过量表达ZmIBH1-1赋予玉米更高的耐旱性。转录组分析结果表明,WT与ZmIBH1-1-OE株系在干旱胁迫下有1 214个差异表达基因;Gene Ontology（GO）功能富集分析结果表明,差异表达基因主要涉及生物过程、细胞组分和分子功能,如在生物过程中主要涉及到光合作用、应激响应、脱水响应等;KEGG富集分析表明,差异表达基因主要参与植物激素信号传导、新陈代谢等过程。结合转录组显著差异表达基因和DAP-Seq分析所得到ZmIBH1-1蛋白的靶基因,初步确定ZmIBH1-1蛋白直接调控与抗旱相关的11个候选靶基因,包括2个钙信号相关基因、3个半胱氨酸代谢相关基因、1个bHLH转录因子、1个应激响应蛋白、1个谷胱甘肽转移酶、1个氧化还原过程蛋白和2个乙烯响应因子;基因组可视化结果显示ZmIBH1-1蛋白可以结合靶基因启动子区;随后通过Dual-Luciferase试验进一步表明,ZmIBH1-1蛋白可以直接作用于11个候选靶基因,其中,ZmIBH1-1蛋白可以促进ZmCa-M、ZmSYCO、ZmbHLH54、ZmGlu-r1、ZmCLPB3和ZmP450-99A2的表达,抑制ZmAGD12、ZmCYS、ZmCYSB、ZmERF-107和ZmEIN3的表达。此外,在干旱胁迫下NAC、WRKY、MYB等转录因子在ZmIBH1-1-OE和WT株系中也存在差异表达。【结论】ZmIBH1-1的过表达可以增强玉米苗期的耐旱性;ZmIBH1-1蛋白通过直接调控乙烯信号通路中的ZmERF-107和ZmEIN3的表达提高玉米的耐旱性;ZmIBH1-1蛋白通过直接调控钙信号相关基因ZmCa-M和ZmAGD12增强玉米的耐旱性;ZmIBH1-1蛋白可能通过间接调控NAC、WRKY、MYB等转录因子响应干旱胁迫。     

无砟轨道轨距精调小车的控制系统

为解决轨道精调中轨距精调自动化程度较低、准确精度不够等问题,从硬软两方面设计了一种自动检测轨距且能对轨距进行精调的自动化小车;小车的控制系统利用西门子全集成自动化软件TIAPORTAL对轨距精调的自动化任务进行编程,并提出利用单神经元PID控制算法,实时整定PID的参数,提高轨距调整精度。该小车的设计与应用可有效提高轨道轨距精调作业的效率,可以在轨道精调作业中推广使用。     

复合型霉菌毒素脱毒剂对海兰褐蛋鸡生产性能、蛋品质及血清生化指标的影响

试验旨在研究添加复合型霉菌毒素脱毒剂对饲喂霉变饲料的蛋鸡生产性能、蛋品质和血清生化指标的影响。将420日龄的600只海兰褐蛋鸡随机分为5组,每组5个重复,每个重复24只。空白对照组(Ⅰ组):饲喂正常玉米日粮;阴性对照组(Ⅱ组):饲喂用50%霉变玉米替代正常玉米的日粮;试验Ⅲ、Ⅳ和Ⅴ组,饲喂在阴性对照日粮的基础上添加复合型霉菌毒素脱毒剂,添加量分别为1.0‰、2.0‰和4.0‰。结果表明:(1)与空白对照组相比,霉菌毒素显著降低蛋鸡产蛋率、显著提高日耗料量、料蛋比和破软壳率;与阴性对照霉菌毒素组相比,2.0‰和4.0‰复合型霉菌毒素吸附剂组可显著提高蛋鸡产蛋率、显著降低日耗料量、破软壳率和料蛋比,其中以4.0‰添加量组效果最优。(2)与空白对照组相比,阴性对照饲喂霉菌毒素日粮蛋壳厚度、蛋壳强度和蛋黄色泽分别降低19.44%、16.29%和20.50%,差异均显著(P<0.05)。与阴性对照组相比,2.0‰和4.0‰复合霉菌毒素吸附剂添加量组蛋壳厚度分别提高20.69%和27.59%、蛋壳强度分别提高17.79%和15.77%、4.0‰添加量组蛋黄色泽提高19.00%,差异均显著(P<0.05)。(3)与空白对照组相比,霉菌毒素显著提高了血清中ALT、AST和ALP含量。4.0‰复合型霉菌毒素脱毒剂组谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)和碱性磷酸酶(ALP)分别降低25.04%、16.19%和17.46%,差异均显著(P<0.05)。由此可知,霉变饲料中添加该复合型霉菌毒素脱毒剂能够提高蛋鸡生产性能、改善蛋品质及减轻毒素对肝脏的损伤,综合比较以试验Ⅴ组4.0‰添加量时效果最优。