以CP23重组蛋白为抗原建立检测微小隐孢子虫抗体间接ELISA方法的研究

摘要：以在E.coli高效表达的微小隐孢子虫子孢子表面抗原CP23为抗原，以辣根过氧化物酶(HRP)标记的山羊抗鼠IgG为二抗，建立了检测微小隐孢子虫抗体的间接ELISA方法。经检测筛选出最佳反应条件为1μg／孔纯化的E.coli表达的CP23抗原包被酶标板，用10％免血清进行封闭，以正常E.coli裂解上清液稀释待检血清。实验表明应用CP23重组蛋白作为诊断C.parvum抗原具有特异性高、抗原易纯化和成本低等特点。     

抗鸡传染性腺胃炎酶标抗体的制备和应用

在前期从患病鸡腺胃内分离到呼肠孤病毒的基础上，以该病毒为免疫原对兔进行免疫制备高免血清，分离纯化IgG，进行辣根过氧化物酶（HRP）标记，并用ELISA双抗体夹心法对山东省青岛、枣庄、泰安等地区采集的传染性腺胃炎的腺胃样品进行检测，结果表明制备的抗鸡传染性腺胃炎呼肠孤病毒的酶标抗体检测传染性腺胃炎特异性强、灵敏度高、较简便。     

过氧化物酶催化酪蛋白的交联反应优化与乳化性改

采用辣根过氧化物酶对酪蛋白进行酶促交联,并经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳、光谱分析和毛细管电泳验证.利用毛细管电泳、面积归一化方法对交联酪蛋白进行分析并计算交联度;以交联度为指标、应用响应面分析法对交联条件优化,得出适宜的条件为:温度37℃、反应时间2.9 h、酶添加量为每克蛋白质4.73μkat,此条件下酪蛋白交联度达到6.9%.与酪蛋白相比,交联酪蛋白的乳化活性在蛋白质质量分数为0.01%时提高了8.7%,而其乳化稳定性在蛋白质质量分数为0.03%时提高了21.1%.     

辣根过氧化物酶的分离制备和纯化

从辣根块茎分离和纯化了辣根过氧化物酶（ＨＲＰ）,纯化程度包括匀浆、加热、硫酸铵分级沉淀、丙酮分级沉淀和ＣＭ－２３阴离子交换层析。纯化的ＨＲＰ的Ｋ４值为２．５×１０＾５,ＲＺ值值３．００,酶的比活４０６Ｕ／ｍｇ蛋白。它的ＳＤＳ－ＰＡＧＥ显示一条带,酶亚基分子量为４０ＫＤ,等电聚焦电泳呈现三条带,酶不舔生染色呈现多条带,表明有同工酶存在。对酶的分离纯化作了一些改进,如加氨水保持ＰＨ值,加入５ｍｍｏｌ／     

高强度脉冲磁场对辣根过氧化物酶活性的影响

以辣根过氧化物酶(HRP)为原料,研究磁场强度和脉冲数在不同处理温度下对HRP活性的影响.结果表明,磁场强度小于1T时,脉冲磁场对辣根过氧化物酶有激活作用,随着脉冲数的增加,激活作用逐渐降低;磁场强度大于1T时,脉冲磁场对辣根过氧化物酶的活性有抑制作用,且随着脉冲数的增加,抑制作用逐渐增强;3.5T是脉冲磁场对辣根过氧化物酶活性的抑制作用显著增强的一个拐点值;较高的处理温度可以增强磁场对辣根过氧化物酶活性的抑制作用. 4.5T,40℃,40个脉冲时HRP的活性降低了90%.PMF处理后的酶液在4℃下贮藏,48h后HRP的活性仍缓慢下降,无再生现象.     

Screening for Monoclonal Antibodies Against the Membrane Proteins of Chicken Embryo Fibroblast Blocking the Infection of IBDV

This article aims to establish an efficient assay for screening monoclonal antibodies （McAbs） against the membrane proteins of chicken embryo fibroblast （CEF） for further studies of the cellular receptors of infectious bursal disease virus （IBDV）. McAbs against the membrane proteins of CEF were prepared by cell fusion. The monolayer CEF pre-incubated with the CEF-specific McAbs for 2 h were infected with IBDV and incubated with F22-EA6-biotin postinfection. Then, the cells were reacted with streptavidin-horseradish peroxidase （HRP） and finally stained by 3-amino-9-ethylcarbazole （AEC）. The inhibitive percentage of IBDV infection was calculated by counting the IBDV-infected cells to determine the inhibition efficiency of the CEF-specific McAbs. Compared with the control cells, the IBDV-infected cells pretreated with CEF-specific antibody significantly decreased; supernatant fluids of a total of 768 hybridomas were analyzed. The results of immunohistochemistry assays showed that six of them （1A5, 1H11, 2B 12, 3G1, 4D10, and 4B8） have the abilities to block the infection of IBDV to CEF, among which 4B8 can perfectly block the infection. This novel method is a sensitive and specific assay for the screening of CEF membrane protein-specific McAbs, which can block the infection of IBDV to CEF, and these McAbs can be used for the further investigations of the cellular receptors of IBDV.     

牛结合珠蛋白α链单克隆抗体制备及辣根过氧化物酶标记

为了制备牛结合珠蛋白主要抗原区重组蛋白(pir Bo Hp)单克隆抗体及对其进行辣根过氧化物标记。试验利用纯化的pir Bo Hp作为免疫原,免疫雌性BALB/c小鼠,然后利用淋巴细胞杂交瘤技术,制备Bo Hp单克隆抗体。通过Western blot试验分析制备的Bo Hp单克隆抗体的免疫反应性;利用抗体亚型鉴定试剂盒,分析鉴定Bo Hp单克隆抗体的亚型和轻链型。利用改良过碘酸钠标记法,对制备的Bo Hp单克隆抗体进行辣根过氧化物酶(HRP)标记。结果显示,试验成功制备了4株Bo Hp单克隆抗体,分别命名为1B3、6D6、6D3和6B7。Western blot结果显示,制备的4株Bo Hp单克隆抗体1B3、6D6、6D3和6B7能识别牛血浆中天然Bo Hp的α链。进一步抗体亚型鉴定结果表明,1B3、6D6、6D3和6B7抗体亚型均为Ig G1,轻链型为kappa链。利用改良过碘酸钠标记法,对纯化的Bo Hp单克隆抗体1B3、6D6、6D3和6B7成功进行了HRP标记。Bo Hpα链单克隆抗体的制备及其HRP标记为Bo Hp特异性诊断方法的建立奠定了基础。     

行业资讯

◎地图◎城市沈阳首家农民专业合作联社成立由苏家屯区供销社领办,10家农民专业合作社共同发起成立了沈阳首家农民专业合作联社——金秋实农产品专业合作联社。大连辣根出口企业海外订单大增大连市辣根、芥末等调味料出口企业今年海外订单大增。2012年6月,大连辣根产品首次进驻德国麦德龙、英国乐购、法国欧胜等大型市场。     

用LSAB免疫组化染色法检测猪生殖-呼吸道综合征病毒抗原的研究

本研究在国内首次成功建立了辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素-生物素（LSAB）免疫组化染色法检测猪生殖-呼吸道综合征病毒（PRRSV）抗原。应用LSAB染色技术检测12头人工感染PRRSV美洲株（ATCCVR-2332）或国内分离株（B96-4，B96-5）的SPF仔猪组织细胞内的PRRSV抗原，阳性检出率为100％。LSAB免疫组化染色法操作简单、灵敏度高、特异性强，结果清晰、稳定、重复性好，是一种检测组织细胞内PRRSV抗原的有效方法。     

用辣根过氧化物酶标记法对鸡盲肠传入神经元分布的研究

用辣根过氧化物酶逆行法研究鸡盲肠感觉神经元的定位。结果表明，被标记的支配盲肠的初级传入神经元位于Ｔ２－ＬＳ１和ＬＳ８－ＬＳ１２脊神经节，峰值位于Ｔ５，Ｔ６，ＬＳ９和ＬＳ１０脊神经节；在颈静脉神经节，结状神经节和脊髓内未见到标记细胞。