捻转血矛线虫(H.contortus)ZJ株H11蛋白基因的克隆及序列分析

参照已发表的捻转血矛线虫H11蛋白基因序列设计引物，以H．contortuss ZJ株的总RNA为模板，进行RT—PCR扩增，成功扩增出H11基因。将PCR产物与pUCm—T载体连接后，转化DH5α感受态细胞，筛选阳性克隆并测序。序列分析表明，其核苷酸序列与国外报道的H11基因的同源性为99．5％。编码氨基酸序列具有氨基肽酶的保守序列，推测可使虫体不能获得所必需的氨基酸而导致死亡。     

干酪成熟过程中的酶

干酪是以乳与乳制品为原料，通过添加乳酸菌发酵剂和凝乳酶，使乳中的蛋白质凝固，排除乳清，再经一定时间成熟而制成的一种发酵乳制品。干酪营养丰富，除蛋白质和脂肪外，还含有糖类、有机酸、常量矿物质元素钙、磷等和微量元素铁、锌，以及脂溶性维生素A、胡萝卜素和水溶性维生素等多种营养成分，是世界上乳制品的主要产品之一。     

Gly-Gly肽和Gly-L-Leu肽在蛋鸡肠道内水解的研究

采用蛋鸡离体外翻肠段培养法,将小肠分为十二指肠、空肠前段、中段、后段和回肠五个部位肠段,洗净外翻。2种二肽培养液(Gly-Gly肽和Gly-L-Leu肽溶液)作为两组对照培养液,每种二肽培养液中添加肽酶抑制剂(Bestatin和Amastatin),作为试验培养液,39.5℃培养25min,每5min取样一次,测定培养液中的二肽含量。结果表明,培养5min后,含Gly-Gly肽的对照和试验培养液中均未能检测到完整Gly-Gly肽。而含Gly-L-Leu肽的对照培养液Gly-L-Leu肽的含量降低到16.75％,试验培养液则下降到43.40％。而试验培养液中Gly-L-Leu肽的含量10min后无显著降低(P>0.05)。各培养时段试验培养液Gly-L-Leu含量均显著高于对照培养液(P<0.05)。由此认为,离体肠囊在培养过程中能够迅速释放肠肽酶及一些生物活性物质,快速水解2种二肽。肽酶抑制剂(Bestatin和Amastatin)能抑制Gly-L-Leu的水解,但不能抑制Gly-Gly的水解。     

二肽酰肽酶Ⅳ在金华火腿加工过程中的活力变化

 以浙江兰溪长白×金华猪杂交猪后腿为原料，按传统工艺加工金华火腿，分别在腌制前、腌制结束、晒腿结束、成熟中期、成熟结束和后熟结束6个工艺点随机取5条腿的股二头肌，测定了各样品的常规理化指标和二肽酰肽酶Ⅳ（dipeptidyl peptidase Ⅳ, DPPⅣ）在pH7.0和温度37 ℃条件下的潜在活力；借助Design-experts 6.0软件，用响应曲面法研究了温度、食盐含量、硝酸钠含量和pH值对DPPⅣ活力的影响，并用响应曲面回归方程对金华火腿加工各阶段结束后的肌肉DPPⅣ实际活力进行了预测。结果表明，在金华火腿加工过程中，随加工温度和股二头肌pH逐渐升高，食盐含量持续增加，DPPⅣ潜在活力持续下降；DPPⅣ实际活力受加工温度、肌肉pH和食盐含量的显著影响(P<0.05)，DPPⅣ在金华火腿整个加工过程中一直保持较高的潜在活力，但其实际活力一直很低，最高为其潜在活力的3.12%。     

二肽酰肽酶IV在金华火腿加工过程中的活力变化

以浙江兰溪长白×金华猪杂交猪后腿为原料,按传统工艺加工金华火腿,分别在腌制前、腌制结束、晒腿结束、成熟中期、成熟结束和后熟结束6个工艺点随机取5条腿的股二头肌,测定了各样品的常规理化指标和二肽酰肽酶(dipeptidylpeptidaseIV,DPP)在pH7.0和温度37℃条件下的潜在活力;借助Design-experts6.0软件,用响应曲面法研究了温度、食盐含量、硝酸钠含量和pH值对DPPIV活力的影响,并用响应曲面回归方程对金华火腿加工各阶段结束后的肌肉DPPIV实际活力进行了预测。结果表明,在金华火腿加工过程中,随加工温度和股二头肌pH逐渐升高,食盐含量持续增加,DPPIV潜在活力持续下降;DPPIV实际活力受加工温度、肌肉pH和食盐含量的显著影响(P<0.05),DPPⅣ在金华火腿整个加工过程中一直保持较高的潜在活力,但其实际活力一直很低,最高为其潜在活力的3.12%。     

核酸疫苗SjCA/pc和SjMf1/pc在小鼠体内的表达

为了观察核酸疫苗SjCA／pc和SjMfl／pc在小鼠体内的表达，取昆明鼠，于其后腿外侧肌注免疫SjCA／pc和SjMfl／pc，2d后剖杀动物．取注射部位肌肉作石蜡切片，免疫组化分析，荧光显微镜下镜检。结果表明，SjCA／pc和SjMfl／pc在小鼠注射部位肌肉可见黄绿色荧光，而对照组无此现象。可见，SjCA／pc和SjMfl／pc可在小鼠体内表达。     

茶树菇线粒体中间肽酶基因克隆分析及其在A交配型鉴定中的应用

以茶树菇为研究对象,依据基因组序列,通过长程PCR扩增获得YSG和AC0007菌株线粒体中间肽酶基因(mitochondrial intermediate peptidase encoding gene,mip)。结果表明:该基因与A交配位点连锁,可以其作为A交配位点克隆的靶位点。序列分析发现,该位点的C段编码区高度保守,设计的特异性引物可以在群体中获得mip基因的保守区,另外其N端编码区的变异区域可以为A交配位点鉴定提供特异的靶标,为食用菌遗传及育种研究提供重要的基础。     

柱花草青贮早期发酵特性及3种植物蛋白酶活性动态研究

为了解柱花草青贮早期的发酵特性及氨基肽酶、羧基肽酶和酸性蛋白酶活性的动态变化情况,该研究将现蕾期柱花草刈割后切短青贮,分别在青贮的第0.5、1、2、3、5、7和14天测定发酵品质以及氨基肽酶、羧基肽酶和酸性蛋白酶活性。结果表明:柱花草青贮早期pH下降缓慢,乳酸含量低,乳酸/乙酸值低,丁酸和氨态氮/总氮值高,属乙酸型发酵。3种蛋白酶活性均随青贮时间的延长下降,氨基肽酶活性在第7天为鲜样活性的5.30%,第14天为0;羧基肽酶和酸性蛋白酶活性下降较氨基肽酶慢,青贮14 d后仍保持较高活性,分别为鲜样活性的45.8%和42.75%。因此,柱花草单独青贮时发酵品质差,应当添加发酵促进剂或蛋白酶抑制剂以降低酶活性,减少蛋白分解,提高青贮饲料品质。     

Early Morphological and Physiological Events Occurring During Germination of Maize Seeds

The early morphological and physiological events occurring during maize （Zea mays cv. Nongda 108） seed imbibition and germination were studied. Water uptake of seeds exhibited a triphasic pattern with a marked increase during the initial phase of imbibition, and then a slow increase, followed by a second substantial increase. Imbibition time for 10 and 50% of seed germination was about 26 and 46 h at 30℃, respectively. The relative conductivity of maize seeds dramatically decreased during the initial phase of imbibition, followed by a substantial increase. Respiratory rate of seeds gradually increased with imbibition. Length of root cap cells decreased during the initial phase and then increased; those of meristematic zone cells increased during the initial phase and then decreased; and those of elongation zone cells and of the whole elongation zone of the radicle gradually increased during germination. The contents of soluble sugars and starch in embryos gradually decreased as the activities of α- and β-amylase strikingly increased with imbibition. In the meantime, protein contents of embryos gradually decreased and free amino acid content increased. The activities of aminopeptidase and endopeptidase increased until 12 h of imbibition and then decreased. It is concluded that germination of maize seeds is mainly completed by extension of cells in the elongation zone of the radicle, and that mobilization of stored reserves in the embryo during the initial phase of imbibition is also an early event during seed germination.     

捻转血矛线虫(Haemonchus contortus)氨基肽酶基因克隆、表达及重组蛋白活性分析

通过RT—PCR扩增出捻转血矛线虫（Haemonchus contortus）氨基肽酶基因，并对该基因进行克隆、鉴定及序列测定。捻转血矛线虫氨基肽酶ORF由2919个碱基（972个氨基酸）构成，和GenBank中的捻转血矛线虫氨基肤酶（H11抗原）同源性高达98％。与秀丽新杆线虫（Caenorhabditis elegans）肽酶M1家族同源性为61％，且具有氨基肽酶特征性基序HEXXH和GAMEN。将该基因亚克隆到原核表达栽体并进行了表达，通过测定重组蛋白分解氨基肽酶底物的能力以及对酶抑制荆敏感性试验，进一步证实了H11抗原具有一定的酶活性。