中国专利集锦（十一）

使用超临界流体制备活性物质与多孔载体的相互作用复合物的方法；植物黄酮类化合物的用途；对人肝癌细胞株具有抑制效果的买麻藤提取液的制备方法；一种抗SARS病毒的中药提取物；一种连续中压柱层析制备高纯度硫酸长春碱的方法.     

鱼类细胞培养的研究与应用

21世纪是生命科学的世纪,也是海洋科学的世纪。随着生命科学理论和技术的飞速发展,细胞培养技术的地位和作用也越来越突出了,哺乳动物细胞培养的研究起步较早,目前已经取得了丰硕的成果,而水生动物特别是鱼类细胞培养的研究起步较晚,相对来说是比较滞后的,但是其发展也是非常迅猛的,并且有着广阔的应用前景。本文针对鱼类细胞培养的发展与现状、方法与技术及其在科学研究中的应用等方面进行了综述,并对鱼类细胞培养的发展前景作了展望。     

川芎嗪抗肿瘤作用研究进展

<正>据美国癌症协会统计,2013年北美新增肿瘤病例176 620例,死亡人数达到64 880例。我国每年新增肿瘤患者达160万,病死率仅次于心脑血管疾病。目前,在肿瘤的临床治疗中,手术、放化疗是主要治疗手段,但大多数患者发现时已是中晚期,失去了手术的最佳时期,而放化疗毒副作用较大,许多患者并非死于肿瘤本身而是死于放化疗引起的严重不良反应。因此,研发新型、高效、毒副作用低的抗肿瘤药物     

应用杂交瘤技术研制产气荚膜梭菌ε抗毒素国际标准参考品的初步试验

测定了分泌抗产气荚膜梭菌ε毒素单克隆抗体的杂交瘤细胞株ε２－７在体内产生抗体的稳定性，并用ＢＡＬＢ／ｃ小鼠小批量地制备了三批抗ε毒素单克隆抗体的腹水制剂。用经国际标准ε抗毒素标定的ε毒素分别以Ｌ＾＋、Ｌ＾＋／５和Ｌ＾＋／１０法测定了这三批腹水抗体制剂所含的抗毒素国际单位。由于腹水抗体效价太低，Ｌ＾＋法未能测出结果。Ｌ＾＋／５法测定的每毫长腹水抗体所含国际单位分别为Ｎｏｌ２．９－３．３ＩＵ，Ｎｏ２３     

鸡白细胞介素-6活性MTT检测方法的建立

采用白细胞介素-6依赖细胞株B9建立了鸡白细胞介素-6活性的MTT检测方法。每孔培养细胞数在2.5×103~4×104范围内D值与细胞数显示有良好的线性关系,MTT的最佳保留时间为4 h,最低检测限为0.1 U/mL。应用该方法检测了健康艾维茵肉鸡25例,血清chIL-6活性为(4.33±0.75)U/mL,而25例葡萄球菌病患鸡血清chIL-6的活性为(14.05±6.87)U/mL,与健康肉鸡比较差异极显著(P<0.01),为该方法进一步临床应用奠定了基础。     

转染βG基因HHCC细胞的裸鼠转移模型的复制

将人肝癌细胞株（ＨＨＣＣ）细胞和转染β－葡萄糖苷酸酶（βＧ）基因的ＨＨＣＣ细胞体外培养，观察细胞形态结构，用流式细胞仪测定细胞周期，要用裸鼠脾种植法研究转βＧ基因ＨＨＣＣ细胞的转移特性，接种后６０ｄ收集转移灶，常规制片，ＨＥ染色镜检。结果，转染βＧ基因ＨＨＣＣ细胞内多见颗粒性物质，微绒毛及突起增多，溶酶体增多，内质网及核糖体丰富，糖元颗粒堆积，某些细胞出现变性、坏死。转染βＧ基因ＨＨＣＣ和ＨＨＣＣ     

雌二醇依赖性细胞稳定转染克隆株的研究

利用已经构建以增强型绿色荧光蛋白（EGFP）为报告基因的表达载体和一个含有鸡溶菌酶基因超敏感位点4（hypersensitivity site 4）的载体pBS-HS4,采用Polybrene的方法进行稳定共转染T47D细胞得到稳定转染细胞株,结果得到了87株稳定转染细胞株。用10-9mol/L 17β-雌二醇诱导筛选,结果标号为EGFP-T47D 74的克隆细胞株在诱导后72 h及96 h表现出非常强的诱导荧光,而且诱导倍数较大,为3.63倍。结果表明,试验筛选出的稳定转染重组细胞株可供进一步建立细胞表达系统来筛选EEDCs。     

猪繁殖与呼吸综合征病毒E蛋白在Marc-145细胞中的表达

针对PRRSV E基因设计1对带有EcoRⅠ和SalⅠ酶切位点的引物,以PRRSV CC-1株为模版进行RT-PCR扩增,获得带有酶切位点的目的片段插入pMD18-T载体,对阳性重组质粒进行测序鉴定。将阳性质粒进行EcoRⅠ、SalⅠ双酶切,回收目的片段将其插入EcoRⅠ、SalⅠ双酶切的真核表达载体pEGFP-N1中构建重组质粒pEGFP-N1-E,将重组质粒用脂质体转染Marc-145细胞,通过荧光显微镜观察显示,在转染后24h出现荧光,48h出现荧光高峰,筛选阳性细胞株,进行目的基因转录、Western blot检测目的蛋白的表达鉴定。结果表明:成功构建真核表达载体pEGFP-N1-E,建立了稳定表达的细胞株。为研究E蛋白如何与宿主细胞结合形成通道,PRRSV吸附、穿入宿主细胞的作用机理以及筛选特效的粒子通道阻断剂奠定了基础。     

草鱼吻端组织细胞株ZC-7901及其亚株ZC-7901S1的建立和特性观察

以草鱼吻端组织为材料，经体外培养建立了一个上皮样细胞和梭形细胞混合的细胞株，后又从中分离出一个上皮样细胞亚株，分别定名为ZC-7901和ZC-7901S1。对两株细胞进行了基本生物学特性的测定，染色体数目和经长期传代后染色体数目稳定性的分析。实验表明，两株细胞为草鱼正常二倍体(2n=48)细胞株。