鹿茸提取物和人参皂甙对衰老细胞的琥珀酸脱氢酶和多糖含量的影响

应用细胞化学和显微分光光度技术,比较研究了鹿茸提取物对人胚肺成纤维细胞中琥珀酸脱氢酶(SDH)和多糖(PSR)含量的影响.结果表明:鹿茸提取物能显著增加年轻细胞中SDH和PSR的含量,对衰老细胞的影响较小.而人参皂甙则能显著增加衰老细胞中PSR的含量,对年轻细胞有降低含量的作用,增加年轻和衰老细胞中SDH的含量。     

牛皮肤成纤维细胞的体外培养与冻存

利用牛皮肤组织块直接培养法，得到牛皮肤细胞的原代培养物，再用酶消化法和反复贴壁法处理，能够纯化成纤维细胞。成纤维细胞的冻存是通过选用6种分别含有二甲基亚砜（DMSO）、甘油（GL）及乙二醇（EG）的保护液，以相同的冻前处理方法，对牛皮肤成纤维细胞进行缓慢冷冻，冰箱预冷平衡1－2h，逐步投入液氮（－196℃）中保存，再经37℃水浴解冻，Hanks液脱保护剂，以贴壁率评价冻存效果。结果表明，20％DMSO保护液对牛皮肤成纤维细胞表现出较好且稳定的冷冻保护效果，其平均贴壁率达87．9％。     

成年(黄占)鹿耳皮肤成纤维细胞的分离与培养

本试验对1头黄占鹿的耳缘皮肤组织采用0.1%胶原酶(Ⅰ型)消化组织块法进行原代培养,反复传代纯化,获得了成纤维细胞,进行了生物学特性观察,并对各代细胞进行了常规冷冻保存。利用Photoshop软件对F12代细胞染色体进行了核型分析,结果表明该黄占鹿的染色体数目为68,常染色体中1号和7号为M染色体,其余的均为A常染色体;X染色体是最大的A染色体,Y染色体是最小的M染色体;该黄占鹿的核型式为4(M)+62(A),XY(A,M);对部分冷冻细胞进行了解冻培养,解冻存活率和贴壁率分别为61.04%、38.85%。     

人胰岛素原基因转染绵羊成纤维细胞及细胞株的建立

从动物耳皮肤组织采样 ,采用将组织块剪碎后直接贴附于培养瓶底部的方法进行原代培养 ,该方法使原代细胞出现率及可传代率均达到 10 0 %。根据上皮样细胞和成纤维样细胞贴壁紧实程度的不同 ,用 0 .0 5 %的胰蛋白酶-EDTA对其进行消化 ,可将两种不同类型的细胞进行分离和纯化。通过脂质体介导 ,以BLG -hINS(含乳球蛋白调控基因的人胰岛素原基因 )基因作为目的基因、GFP(绿色荧光蛋白 )基因作为标记基因共转染绵羊成纤维细胞 ,经G - 4 18筛选后 ,得到转染细胞。对转染的细胞分别用单细胞显微操作法和有限稀释法进行细胞克隆 ,两种方法均可得到克隆细胞。选形态正常、生长均匀的 5个细胞克隆进行PCR检测 ,结果 5个克隆均转有GFP基因 ,其中两个转有BLG -hINS基因。高代培养细胞、转染细胞和克隆细胞经核型分析后 ,染色体数目均为 2 7对 ,表明绵羊耳的成纤维细胞建立细胞株后 ,可以作为外源基因转染的有效供体细胞。     

牛胎儿成纤维细胞分离与体外培养

本研究以 4 5d牛胎儿为材料 ,使用 0 .2 5 %胰酶 + 0 .0 4 %EDTA消化液 ,分离得到牛胎儿成纤维细胞 ,体外培养传代至第 2 8代。本实验描绘出牛胎儿成纤维细胞生长曲线 ,并发现α MEM是一种适合牛胎儿成纤维细胞生长的培养基。分离得到的牛胎儿成纤维细胞传至第 1 8代时核型仍然正常 ,冷冻、解冻后细胞可继续传代     

生物牛黄中间体的抗病毒作用及对家兔血液流变学指标的影响

运用比较药理学方法研究了生物牛黄中间体与天然牛黄、人工牛黄在抗病毒及对家兔血液流变学指标影响方面的不同。结果显示，生物牛黄中间体以25、50、100mg／kg体质量及人工牛黄50mg／kg体质量灌胃给药的大鼠含药血清，灭活后，在10倍稀释的情况下，在鸡胚成纤维细胞上使新城疫Ⅰ系疫苗毒的TCID50升高1个滴度；生理盐水组、天然牛黄50mg／kg体质量组10倍稀释大鼠含药血清，灭活后，在鸡胚戍纤维细胞上使新城疫Ⅰ系疫苗毒的TCID50降低1.5个滴度。生物牛黄中间体以25、50、100mg／kg体质量灌胃给药，可明显降低高分子右旋糖酐所致“血瘀”家兔的血沉值、血沉方程K值和红细胞聚集指数；天然牛黄50mg／kg体质量组对血沉值和血沉方程K值具有显著降低作用；人工牛黄50mg／kg体质量组时血沉值具有显著降低作用。     

北京油鸡胚胎成纤维细胞系建立与生物学特性研究

采取组织块直接培养法，对北京油鸡胚胎组织进行原代和继代培养，成功地建立了成纤维细胞系。并对培养细胞进行了形态学、细胞生长动力学观察，以及核型和乳酸脱氢酶、苹果酸脱氢酶的同工酶分析。结果表明，该细胞系的群体倍增时间(PDT)为24h；细胞染色体中二倍体占主体，为76％～88％；乳酸脱氢酶、苹果酸脱氢酶同工酶电泳图谱与本室其它细胞系有明显差别；细菌、真菌、病毒、支原体检测呈阴性。该细胞系的建立，使北京油鸡这一国家重要种质资源在细胞水平上保存下来，也为基因组文库和体细胞克隆等研究提供了理想的生物材料。     

新城疫病毒致鸡胚成纤维细胞病变特性研究

为探讨新城疫Ⅳ系和Ⅰ系毒株对鸡胚成纤维细胞(CEF)致病变特性的影响,采用细胞病变观察(CPE)、血凝试验(HA)和半数细胞培养物感染量(TCID50)测定等方法对新城疫Ⅳ系和Ⅰ系毒株在CEF上的感染特性进行检测。结果表明:经鸡胚复壮的新城疫Ⅰ系毒株不管胰蛋白酶是否参与,均能在CEF上增殖并产生典型的细胞病变,主要以发生细胞融合和形成多核巨细胞为特征;而新城疫Ⅳ系毒株,必须在胰蛋白酶参与的情况下才能产生CPE,主要以胞浆内出现可见大小不等的空泡或颗粒为特征。新城疫Ⅰ系毒株与新城疫Ⅳ系毒株(胰酶参与)相比CEF培养上清液最高HA效价高2个滴度,TCID50也明显增高,证明新城疫Ⅰ系毒株在CEF细胞上的感染力更强。     

芩花口服液抗鸡新城疫病毒体外研究

为研发抗新城疫病毒(NDV)新药,将黄芩、金银花、前胡、甘草等中药制成的芩花口服液稀释至安全范围浓度,在鸡胚成纤维细胞(CEF)培养系统中进行抗NDV感染试验.用MTT法测定NDV感染CEF能力的变化.结果显示:先加芩花口服液后接种NDV、先接种NDV后加芩花口服液、芩花口服液和NDV同时加入,芩花口服液浓度为0.0625、0.125、0.25、0.50、1.0、2.0 mg/mL时均有显著抗NDV感染CEF作用.此试验初步为寻求抗NDV药物提供一条新途径.     

中药免疫调节剂体外细胞毒性测定

采用形态学观察和MTT两种方法,测试了中药免疫调节剂(TJJ)在鸡胚成纤维细胞(CEF)和小鼠纤维母细胞(L929)体外培养中的最大安全浓度。结果表明:⑴TJJ的细胞毒性很低,对CEF和L929的最大无毒浓度分别达3.12g/L和1.56g/L;⑵两种细胞比较,L929对药物毒性的反应性较CEF更敏感;⑶两种方法比较,MTT法更灵敏、更客观;⑷在同一种细胞的不同生长状态下(形成单层前后)加入TJJ,药物对细胞的毒性结果无变化,说明药物对细胞的毒性与细胞种类有关,而与细胞的生长状态关系不明显。