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针对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)JL/07/SW株GP5基因设计了4个脱氧核酶,经体外切割试验筛选得到具有体外切割活性的脱氧核酶,并通过RT-PCR、TCID50、CPE、间接免疫荧光(IFA)检测具有切割活性的脱氧核酶抑制PRRSV复制效果进行评价。结果针对GP5基因的Dz-GP5-10抑制效率最高可达到82.4%,Dz-GP5-12也表现良好的抑制效果,表明GP5基因的这2个位点可能是PRRSV复制所必需的。本研究为PRRSV复制及基因组功能研究、抗病毒药物开发和转基因动物研究奠定了基础。 相似文献
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转移抗猪瘟病毒核酶基因兔的研究 总被引:2,自引:0,他引:2
采用显微注射法,将构建的绵羊金属疏因(oMT)基因启动子与抗猪瘟病毒核酶(HCV-Ribozyme.HR)基因融合的质粒pMHR_(32)线性DNA分子约200~400个基因拷贝导入兔原核胚的雄原核中,159枚导入基因胚移植给9只受体兔,产仔22只,移植成活率为13.8%。22只仔兔经聚合酶链式反应(PCR)和核酸探针杂交检测,6只体内整合有外源目的基因,整合率为27.3%。再用100个半数反应量(RID_(50))的猪瘟病毒C系兔化弱毒兔体攻毒,4只外源基因整合的实验兔能完全或部分抵抗HCV弱毒攻击,不产生或无明显发热反应;而对照兔和6只HR基因未整合的实验兔不能抵抗HCV弱毒攻击,出现特征性的稽留热型。逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)和RNA探针杂交检测4只转基因兔,两只肝中表达出oMT-HRmRNA。认为微注射导入的外源HR基因在兔体内得到了整合和表达 相似文献
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为建立荷斯坦奶牛瓜氨酸血症和尿苷酸核酶缺乏症两种遗传缺陷病的检测方法,根据文献报道的精氨酸琥珀酸合成酶、UMPS基因核苷酸序列,设计引物,通过条件的优化,建立了巢式PCR反应体系。结合PCR产物测序,建立了检测CN和DUMPS方法。取243份临床牛血清样品用巢式PCR检测并测序,发现CN野生型238份,CN杂合子型5份,CN突变型0份;DUMPS野生型236份,DUMPS杂合子型5份,DUMPS突变型2份。所建立的巢式PCR方法灵敏、特异,还兼具高通量的特点,适合口岸对荷斯坦奶牛CN和DUMPS遗传缺陷病的大样品量检测。 相似文献
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采用一步法长距离RT-PCR克隆了IBDV Gt株全基因组,对其核苷酸和氨基酸序列进行了系统分析。在IBDV Gt株全基因组中引入分子标签,且在基因组两端分别引入锤头状核酶结构(HamRz)和丁肝病毒核酶结构(HdvRz)。将带有分子标签和核酶结构的IBDV基因组插入载体pCAGGS的口肌动蛋白启动子下游,构建了IBDV真核表达载体pCAGGmGtAHRT和pCAGGmGtBHRT,为IBDV新型高效拯救平台的构建及基于此的病毒基因功能奠定了基础。 相似文献
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蚕业起源于我国 ,距今有 50 0 0多年的历史。自古以来 ,蚕业在人类社会经济的发展过程中均占有重要地位。然而 ,当历史的车轮驶入 2 1世纪 ,传统的蚕业已很难适应社会主义市场经济发展的需要 ,其茧丝品质低、生产成本高等问题严重制约了蚕业的发展。因此 ,发展高科技蚕业、增强蚕业竞争力势在必行。在 2 0世纪 70年代DNA重组技术的建立为标志的现代生物技术 ,给人们提供了一种全新的技术手段 ,使人们可以按照预先的设计 ,运用染色体易位、重组、基因分离等手段获得优良品质的动物、植物和微生物 ,这无疑为传统蚕业的改造带来了曙光。1 … 相似文献