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1.
《畜牧与兽医》2017,(6):120-124
为制备检测新城疫病毒的实时荧光RT-PCR病毒样颗粒内标,扩增MS2噬菌体的成熟酶蛋白和衣壳蛋白序列,将其定向插入pET32a载体的相应位置,双酶切和PCR鉴定,构建pET32a-MS2重组质粒;根据新城疫病毒实时荧光RT-PCR检测的目标片段,采用化学合成和klenow酶连接技术制备内标片段,将内标片段插入pET32a-MS2重组质粒,构建pET32a-MS2-IC重组质粒,转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导表达,经RNase和DNase消化后,采用荧光RT-PCR检测耐核糖核酸酶病毒样颗粒内标的含量。结果表明,制备了高表达量耐核糖核酸酶病毒样颗粒内标,可用于新城疫病毒实时荧光RT-PCR检测方法的建立。 相似文献
2.
王字4号是四川新胜茶场选出的甜橙(CitrusSinensis)优良单株,具果大、质优、少核、晚熟、较耐低温等综合优良性状。特别是单胚率高而稳定,1990—1992年镜检,单胚率分别为98.15%、95.6%、97.7%。 相似文献
3.
4.
5.
马传贫驴白细胞弱毒疫苗株跨膜蛋白主要免疫决定区基因的克隆与表达 总被引:3,自引:0,他引:3
从感染驴白细胞的马传贫驴白细胞弱毒疫苗株前病毒DNA中克隆了编码跨膜蛋白主要免疫决定区(TMIR)的基因,并在大肠杆菌中进行了表达。所表达的融合蛋白有一部分是可溶的,其氨基端带有6个组氨酸的标签,因此可以用固定化金属离子亲和层析法在非变性条件下进行纯化。在间接酶联免疫吸附试验(ELISA)和免疫印迹试验中,重组的TMIR蛋白可与马传贫阳性血清样品发生反应,而与健康马血清无任何反应。这表明该重组蛋白具有良好的抗原性和特异性,可用于马传贫弱毒疫苗株在体内外复制、接种马体内免疫应答及马传贫诊断的研究。 相似文献
6.
中国巴马小型猪内源性反转录病毒的检测 总被引:2,自引:0,他引:2
目的 :对我国特有巴马小型猪内源性反转录病毒 ( porcine endogenous retrovirus,PERV)的存在与 m RNA的表达情况进行检测 ,了解巴马小型猪内源性反转录病毒的携带情况。方法 :根据以往建立的 PCR、RT-PCR检测方法 ,对来自于巴马小型猪外周血淋巴细胞的 DNA和RNA样品进行 PERV核心蛋白基因 ( gag)、多聚酶基因 ( pol)及囊膜基因 ( env)的存在与表达进行检测 ;同时 ,根据目前通用的 env基因分型方法检测 PERV env-A、env-B、env-C的存在与表达。结果 :在 1 2个被检的 DNA样品中均检出了PERV特异性 DNA的存在 ;同样 ,在 1 2个被检的 RNA样品中均有 PERV特异性 RNA的表达 ,且所表达的 PERV均为 A型和 B型 ;其中有9个 DNA样品检测出 PERV-C型的存在 ,所有样品中均未检出 C型 PERV的表达。结论 :检测结果表明 1 2个被检巴马小型猪基因组中存在着内源性反转录病毒序列 ,且能以 m RNA的形式表达 ,这一结果为我国特有小型猪的开发、利用及其病毒安全性评价奠定了基础。 相似文献
7.
胰岛素样生长因子I(IGF-I)是一种多功能细胞调控因子,在神经损伤、糖尿病、生长迟滞、骨质疏松等疾病的治疗中具有广阔应用前景。IGF-I主要存在于人和动物血液中,但其含量很低,天然来源无法满足临床利用需要,利用基因工程方法生产IGF-I是解决这一问题的有效途径。我们根据甘蓝偏爱密码,对整个基因DNA序列进行了修改,并从烟草中克隆了一段核基质结合区(MAR)。构建了MAR调控的植物表达载体。 相似文献
8.
I—ELISA特异诊断棘球蚴(包虫)病的研究 总被引:1,自引:1,他引:0
采用亲和层析技术纯化的兔抗棘球蚴抗体,建立了酶联免疫吸附抑制试验(I—ELISA)。取代反应和阻断反应均无非特异反应;检测健康对照血清126份(人36,猪90),均为阴性;与猪囊尾蚴病血清136份(人46,猪90)、细颈囊尾蚴病血清38份(羊22、猪16)无交叉反应;对棘球蚴病血清183份(人61、羊71、猪51)进行检测,其阳性符合率分别为88.5%(54/61)、98.6%(70/71)、96.1%(49/51)。 相似文献
9.
1997年3月下旬,上海市郊区某蛋鸡场发生以产蛋下降为第一指征的非典型新城疫,通过临诊调查、抗体测定、病毒分离与鉴定进行了确诊。结果:感染鸡群产蛋下降的幅度可高达50%;新城疫HI抗体滴度高达12log2或以上;用泄殖腔棉拭接种鸡胚的分离物用标准血清鉴定为新城疫病毒(NDV),初代尿囊液的ELD50为10-7.5(0.2mL),1日龄SPF鸡胚脑内接种致病指数(ICPI)和6周龄SPF鸡静脉接种致病指数(IVPI)分别为1.725和2.32,其毒力接近标准毒株—NDV北京株F48E9。 相似文献
10.