蜘蛛丝蛋白基因的合成及其串联体在大肠杆菌中的表达

赋有许多独特性能的天然蛋白质纤维--蜘蛛丝在生物医学、材料和军事等领域具有广泛的应用前景，但惟有通过基因工程手段才能大量获取。根据已报道的蜘蛛丝蛋白的氨基酸序列，结合蜘蛛丝蛋白的模块结构特性和功能的关系，优化设计并人工合成了全长为429bp的蜘蛛丝蛋白基因SPS。将该基因克隆到质粒pET-32a中，构建成表达载体pET-SSPS1，并进一步构建了它的多个串联体表达载体pET-SPS（2～8）。所有表达载体在大肠杆菌BL21（DE3）中进行了诱导表达，重组蜘蛛丝蛋白得到了纯化。结果表明，合成的蜘蛛丝蛋白基因与预期一致，融合表达的蜘蛛丝蛋白几乎全部可溶。其中，1-3串联体蜘蛛丝蛋白基因能够有效表达，但随着串联数的进一步增加，蜘蛛丝蛋白基因融合表达效率下降，初步探讨了下降的可能原因。     

鸡缩胆囊素-33串联体的构建、原核表达及免疫原性研究

根据鸡缩胆囊素（choleystokinin，cck）-33基因的碱基序列及大肠杆菌高频密码子，设计了大肠杆菌表达系统偏爱的cck基因序列．将cck-33基因克隆至pRSETA质粒上，利用载体上的同尾酶构建cck基因四串联体并在大肠杆菌EcoliBL21中成功表达．将所表达的融合蛋白进行纯化后，以纯化的蛋白为免疫原制备油佐剂疫苗主动免疫胡须肉鸡．结果表明，CCK蛋白主动免疫肉鸡后，抗血清水平显著升高，P／N值远远大于2．     

多肽基因串联体构建技术

[目的]建立一种快速构建多肽基因串联体的方法。[方法]在多肽基因两侧加入同尾酶识别位点,利用同尾酶形成的粘性末端连接后不能被原酶识别与切割的特点,有效构建基因串联体。[结果]利用化学法合成的人表皮生长因子基因,有效构建并获得多肽基因的二联体与三联体。[结论]利用同尾酶技术,可以快速有效地构建基因串联体。     

"自身模板引物"PCR法构建蟋蟀神经肽Grb-AST7基因串联体

[目的]通过改进的＂自身模板引物＂PCR法构建Grb-AST7基因串联体。[方法]根据蟋蟀神经肽Grb-AST7氨基酸序列设计合成2条引物,运用改进的＂自身模板引物＂PCR法进行拼接。[结果]通过拼接,获得了全长570bp、含17个拷贝的Grb-AST7基因串联体。拼接条件以拼接时间20min,25μlPCR体系中含2μl模板引物较合适。[结论]该研究为下一步进行Grb-AST7基因表达及其生物学活性分析奠定了基础。