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通过4,6-二氨基-2-氯-1,3,5-三嗪与对氨基苯丁酸反应获得三聚氰胺半抗原,再以活性酯法与载体蛋白偶联制备三聚氰胺免疫原或包被原。免疫BALB/c小鼠,利用杂交瘤技术制备出针对三聚氰胺的特异性单克隆抗体。采用间接竞争酶联免疫吸附法(ciELISA)建立检测三聚氰胺的标准曲线,线性范围是17.4~345.5ng/mL,50%抑制浓度(IC50)61.3ng/mL。牛奶和奶粉加标回收率在68.1%~91.0%,变异系数在2.4%~14.5%。结果表明,该方法可以满足牛奶和奶粉中三聚氰胺残留分析要求。 相似文献
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氯霉素间接竞争ELISA(ciELISA)检测方法的建立 总被引:3,自引:0,他引:3
以人工合成的氯霉素-牛血清白蛋白(CAP-BSA)为包被抗原,氯霉素(Chloramphenicol,CAP)为竞争的半抗原,两者与一定量的抗CAP单抗(CAP-McAb)反应。实验结果表明,理想的包被抗原浓度为1.25μg/ml,抗CAP-McAb工作浓度为1:12000,酶标二抗工作浓度为 1: 5000,可测最适范围为 1ng/ml-100ng/ml,最小检测量为0.1ng/ml,批内和批间变异系数分别为3. 62%和 5. 19%。得到回归方程 y =1.2730- 0.6745x(r2= 0. 9779)和标准曲线,从而建立了快速定量测定 CAP含量的间接竞争酶联免疫吸附试验(ELISA)。整个测定时间为6小时。 相似文献
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以CL-OVA为包被抗原,抗克伦特罗单克隆抗体为一抗,组建检测克伦特罗的竞争EL ISA试剂盒。以方阵滴定确定包被抗原最佳浓度(0.72μg.孔-1),抗克伦特罗单克隆抗体(2F12)最佳稀释度(1∶2 000),并建立EL ISA标准曲线,确定最小检测量为0.25 ng.mL-1。用该方法检测动物模型仔猪尿样中的盐酸克伦特罗,结果表明:停药后第1~7天尿样均为阳性,2周后有少量猪仍为阳性,而阴性对照猪尿样均为阴性。这表明建立的试剂盒对克伦特罗残留的检测具有广阔的应用前景。 相似文献
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氟喹诺酮类药物多组份残留的酶免疫分析法 总被引:2,自引:0,他引:2
采用N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)活性酯法制备诺氟沙星、环丙沙星、达氟沙星和沙拉沙星完全抗原,经紫外光谱扫描鉴定后,免疫小鼠,ELISA测定抗体交叉反应性,筛选簇特异性抗体,建立多组份ciELISA检测方法.紫外光谱扫描结果证实4种半抗原与载体蛋白发生共价结合,所制备的沙拉沙星与诺氟沙星抗血清效价都在1:64 000以上,环丙沙星和达氟沙星抗血清效价都在1 :32 000以上.交叉反应率测定结果表明,沙拉沙星抗血清对沙拉沙星、诺氟沙星、环丙沙星和恩诺沙星的交叉反应率依次为100.00%、92.68%、89.12%和83.56%;利用沙拉沙星抗血清建立了针对上述4种药物的多组份ciELISA检测方法,最低检测限依次为19.3、34.5、31.3、29.2 μg/L,大于5μg/L水平的添加回收率均大于83%. 相似文献
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将磺胺二甲嘧啶(Sulfamethazine,SM2)与牛血清白蛋白(BSA)、人血清白蛋白(HSA)偶联,分别作为免疫原及包被原,建立了水产品中磺胺二甲嘧啶间接竞争ELISA检测方法。实验结果表明,理想的磺胺二甲嘧啶人血清白蛋白(SM2-HSA)包被抗原浓度为1mg/L,酶标二抗(羊抗兔IgG-HRP)工作浓度为1/1000,多抗(SM2-PcAb)工作浓度为1/3 200,最适检测范围为10~200μg/L,最低检测限为1.89μg/L,本实验所建立间接竞争ELISA检测方法的孔间差异为2.56%,板间差异为5.14%,实验重复性好。在实验浓度范围内,磺胺二甲嘧啶(Sulfamethazine)的抗血清与磺胺嘧啶(Sulfadiazine)、磺胺甲嗯唑(Sulfamethoxazole)、氯霉素(Chloramphenicol)、恩诺沙星(Enrofloxacin)、甲氧苄啶(Trimethoprim)、呋喃唑酮(Furazolidone)等可能会因同时使用而导致共同残留的抗菌药物未显示免疫交叉反应性,与结构相近的磺胺类药物磺胺嘧啶的交叉反应性为11.0%。所建立的方法有较高特异性和灵敏度,适合磺胺二甲嘧啶的快速筛选。整个测定时间为5~6h。 相似文献
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用大田软海绵酸(okadaic acid,OA)与牛血清白蛋白(BSA)的偶联物OA-BSA作为免疫原,采用淋巴细胞杂交瘤技术制备OA单克隆抗体,并以纯化的抗体为探针建立了检测OA的快速、灵敏、简便的间接竞争ELISA(ciELISA)。回归方程和相关系数分别为:y=-0.3949x+0.6312,R2=0.9806;线性范围为0.3125~20 ng/mL;对OA的最低检出质量浓度为0.175 ng/mL;批内和批间变异系数分别为2.09%和3.27%;扇贝肉样的添加回收率为74.2%~80.8%;与鳍藻毒素(DTX1)的交叉反应(CR%)为51.82%,与石房蛤毒素(STX)无交叉反应。结果表明,建立了OA间接竞争ELISA检测方法,可用于海产品中OA残留检测。 相似文献
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鸡肌肉组织中氯霉素残留ELISA检测方法的研究 总被引:2,自引:0,他引:2
本文利用活化酯法合成了氯霉素抗原 ,作为免疫原免疫新西兰大耳白兔得到氯霉素的多克隆抗体 ,建立了氯霉素间接竞争酶联免疫检测方法 ,进行了药物交叉反应性试验 ,并对鸡肌肉进行添加回收试验。结果显示抗体效价可达 1∶ 6 4 0 0 0 0 ,IC50 为 1.3ng/ ml,最低检测限达到 0 .0 5 ng/ ml,线性检测范围为 0 .1~ 36 .4 5 ng/ ml。在 0 .5、1、2 .5、5 ng/ g浓度水平添加到鸡肌肉组织中 ,测得回收率为 5 5 .4 %~ 119.0 % ,变异系数为 4 .3%~ 10 .4 %。该 EL ISA方法快速、灵敏、方便 ,满足了氯霉素残留检测的要求。 相似文献
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抗苯巴比妥单克隆抗体杂交瘤细胞株的筛选及ciELISA试剂盒的研制 总被引:1,自引:0,他引:1
用BSA-pAPB免疫Balb/c小鼠,用细胞融合技术制备并用间接ELISA和阻断ELISA筛选抗苯巴比妥单克隆抗体(PB mAb)杂交瘤细胞株,体内诱生腹水法生产PB mAb,应用PB mAb研制PB残留竞争ELISA(ciELISA)快速检测试剂盒(PB-Kit),并测定其性能。结果表明,筛选出3株杂交瘤细胞,最好的3F6-C4株的PB mAb间接ELISA效价为1∶6.4×105,亲和常数(Ka)为1.96×1010 L/moL,半数抑制浓度(IC50)为5.7 μg/L,与巴比妥的交叉反应率(CR%)12.4%,与其它化合物无CR;PB-Kit的线性检测范围1.0~81 μg/L,灵敏度0.75 μg/L,检测限1 μg/L;饲料样和猪尿样的平均添加回收率85.8%和91.3%,平均批内和批间变异系数均<15%。PB-Kit具有快速、敏感、特异、简便等特点,适合PB残留快速检测的推广应用。 相似文献
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恩诺沙星单克隆抗体的制备及ciELISA试剂盒的研制 总被引:2,自引:0,他引:2
【目的】研制快速、灵敏、特异的恩诺沙星残留检测ciELISA试剂盒(ENR-Kit),为动物源性食品中恩诺沙星(ENR)残留的快速免疫学检测奠定基础。【方法】通过细胞融合技术制备恩诺沙星单克隆抗体(ENR mAb)杂交瘤细胞株,体内诱生腹水法生产ENR单抗,应用ENR mAb研制ENR残留间接竞争ELISA(ciELISA)快速检测试剂盒,并对其灵敏度、半数抑制浓度(IC50)、特异性、准确度和基质效应性进行检测。【结果】筛选出2株杂交瘤细胞,其单抗亚类均为IgG1亚型。4G1-B3杂交瘤细胞株的ENR mAb间接ELISA效价为1∶1.024×106,亲和常数(Ka)为9×1010L/moL。ENR-Kit的线性检测范围为0.05~48.75μg/L,灵敏度0.05μg/L,半数抑制浓度(IC50)为1.31μg/L,与环丙沙星的交叉反应率(CR)为0.02%,与其他化合物的交叉反应率(CR)均<0.01%。ENR-Kit对牛奶样、鱼肉样和鸡肉样中ENR的平均添加回收率分别为96.49%,86.95%和84.13%,平均变异系数均<10%,不同基质对ENR-Kit检测结果影响小。【结论】研制的ENR-Kit具有快速、敏感、特异、简便等特点,适合ENR残留快速检测的推广应用。 相似文献