产纤维素酶菌群的筛选及其酶学特性研究

从常年堆放的腐质豆秆中分离到1组产纤维素酶菌群MO,并在50℃、pH8.0条件下培养,90h时达到最高酶活,活性为1.3611IU。该酶最适反应温度为60℃,pH为7.0,在60℃以下和pH3~8范围内具有良好的热稳定性和pH稳定性。在最适反应条件下,该酶的最高活性可达2.13IU。通过生长动力学研究了菌群内部不同生长阶段pH、酶活和失重率的相互关系,并通过非变性电泳对酶谱进行初步研究,得到7条活性条带,说明MO中具有多种产酶菌株。     

大白菜非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳技术的优化

非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳技术的检测效果受到凝胶聚合速度、片段迁移率等多种因素影响。以大白菜为供试材料,研究比较了凝胶聚合速度及PCR产物在不同浓度凝胶上的检测效果。不同浓度的凝胶是由2种〔40%(19∶1)和30%(29∶1)〕贮存液分别配制的4种浓度(5%,7%,9%,11%)。结果表明,在4～30℃,凝胶聚合速度随温度的升高而加快;APS保持不变,不同温度下TEMED∶APS合适配比也不同:4℃(冬季)时,TEMED/APS的合适配比是1∶10,25℃(春秋)、30℃(夏季),选择1∶20的配比为宜;2种不同贮存液配制的相同浓度凝胶检测效果不同,30%(29∶1)优于40%(19∶1),由前者配制7%的凝胶上DNA片段分离效果好,带型清晰,分辨率高。     

Application of acetyl salicylic acid and chemically different chitosans against storage carrot rot

This study was conducted to evaluate antifungal activity of three chemically different chitosans named as A, B and C at different concentrations against three isolates of Sclerotinia sclerotiorum, the causal agent of storage carrot rot, by in vitro and in vivo tests. In addition, potential of SAR (systemic acquired resistance) induced by the chitosans and acetyl salicylic acid (ASA) was assessed against the disease. The degree of N-deacetylation (DN) and the molecular weight of chitosans A, B and C were 85%–1129 kDa, 95%–521 kDa and 75%–607 kDa, respectively. The concentrations 2 g/L and 5 g/L of all chitosans were significantly able to decrease mycelial growth, sclerotia formation and carpogenic germination of the pathogen. Four hours and three days before inoculation with the pathogen, application of chitosans and ASA reduced severity of carrot rot in all isolates. However, mycelial growth and sclerotia formation of isolate 2 was more reduced than other isolates. In accordance with in vitro tests, chitosan B showed the highest inhibitory efficacy against the disease. The fungicidal effect of chitosan increased when the DN decreased and there was a negative correlation between the mycelial growth inhibition and the molecular weight of chitosans. The enzyme analysis showed that the activity of phenylalanine ammonia layse, polyphenoloxidase and peroxidase increase in the inoculated carrots after application of different chitosans and ASA.     

病毒铺膜印迹技术分离牙鲆鳃细胞上的淋巴囊肿病毒结合蛋白

利用非变性电泳与病毒铺膜印迹技术(VOPBA)分离了牙鲆(Paralichthys olivaceus)鳃细胞(FG)上淋巴囊肿病毒结合蛋白,结果显示在FG细胞膜上有分子量为135 kD的蛋白与淋巴囊肿病毒特异结合;对该蛋白切胶回收后进行SDS-PAGE与双向电泳,发现135 kD蛋白由3个蛋白组成,分子量分别为58.3 kD、44.6 kD及37.6 kD;135 kD蛋白SDS-PAGE的VOPBA显示,仅出现37.6 kD的蛋白带,而58.3 kD、44.6 kD蛋白皆不与淋巴囊肿病毒结合。结果表明牙鲆FG细胞上135 kD蛋白是淋巴囊肿病毒的结合蛋白,其37.6 kD蛋白具有病毒结合活性。     

雌二醇、壬基酚、多氯联苯、镉和锌及其混合物对唐鱼的雌激素效应比较

以唐鱼卵黄蛋白原(Vtg)为检测指标,利用Native-PAGE电泳、唐鱼Vtg特异性脂蛋白染色和间接酶联免疫吸附(ELISA)技术分别检测了17β-雌二醇(E₂)、壬基酚(NP)、多氯联苯(PCBs)、Cd²⁺、Zn²⁺及其混合物对唐鱼的雌激素效应。Native-PAGE结果显示,10 μg/L、50 μg/L E₂水体暴露7、14 d 均诱导雄性唐鱼体内合成了Vtg,E₂对唐鱼的雌激素效应具有时间累积效应,并随浓度升高而增强。而ELISA检测结果则显示0.1、0.5、1.0 μg/L E₂ 7、14 d和200、300 μg/L NP 14 d暴露使唐鱼合成了Vtg。结果表明,NP、Cd²⁺、Zn²⁺与不同浓度的E₂联合雌激素效应不同于单一毒物的雌激素效应,NP与E₂表现为协同促进作用。并讨论了环境雌激素的联合作用机制相关问题。     

几类小麦雄性不育系育性敏感时期可溶性蛋白质和ATP酶活性的分析

为了研究K型和YS型小麦雄性不育系雄性不育的生化机制,用Native-PAGE凝胶电泳技术对稀盐缓冲液提取的不育系及其保持系育性敏感期旗叶和小穗中的可溶性蛋白进行了分析,并对不育系和保持系小穗质膜和液泡膜H+-ATP酶活性进行了比较.结果显示,1B/1R类K型不育系3314A和非1B/1R类K型不育系732A的同型保持系732B的旗叶在二核期和三核期均出现一分子量大小相同的特异性条带.对小穗的电泳结果显示,1B/1R类K型不育系3314A和非1B/1R类K型不育系732A单核期与其同期相应保持系相比,表达了一些特异性的蛋白.而YS型光温敏不育系A3017二核期和三核期比单核期多出现了特异蛋白条带.这些小穗中表达的特异蛋白可能与育性相关.另外,通过对质膜和液泡膜H+-ATP酶活性测定表明,不育系小穗单核期ATP酶活性较高,尤其是不育系液泡膜H+-ATP酶活性在单核期均明显偏高.     

大豆7S伴大豆球蛋白和11S球蛋白亚基分析

将大豆7S伴大豆球蛋白和11S球蛋白经粗提后用A-PAGE进行纯化,目的是为了简化分离步骤,提高蛋白纯度,并对其亚基进行SDS-PAGE分析。结果表明,提纯后的两种蛋白纯度均达到99%,在SDS-PAGE图谱中7S伴大豆球蛋白由三个亚基组成,其分子量分别为77 740 Da,72 123 Da和56 242 Da;11S球蛋白也由三个亚基组成,其分子量分别为40 459 Da,35 787 Da和17 505 Da。