用免疫荧光、酶标技术检测赭曲霉毒素A的研究

该项研究采用本课题组提纯的赭曲霉毒素A(Ochratoxin A·简称OA)和研制的兔抗OA抗体等,进行间接荧光法和ELISA间接法检测OA的试验。通过对不同浓度的OA纯品和含毒饲料浸提液及中毒死亡鸡内脏的间接荧光染色,均能检出分布均匀、大小有别的黄绿色荧光亮点;用OA为被检抗原和兔抗OA抗体与羊抗兔IgG-HRP进行ELISA间接法试验,对含不同浓度OA的试验孔和对照孔的检测,结果均正确稳定。研究结果证明,以上两种检测方法检测OA均具有灵敏、特异、快速等优点。     

Control of Fusarium wilt in carnation grown on rockwool by Pseudomonas sp. strain WCS417r and by Fe-EDDHA

In carnations grown on rockwool disease incidence of fusarium wilt caused byFusarium oxysporum f.sp.dianthi (Fod) was reduced when Fe-EDDHA instead of Fe-DTPA was used as iron source in the nutrient solution. Addition ofPseudomonas sp. strain WSC417r intensified this reduction in the cultivar Pallas, moderately resistant to Fusarium, but not in the susceptible cultivar Lena. Treatment of plants with Fe-EDDHA instead of Fe-DTPA as iron source resulted in higher numbers and percentages on the roots, ofin vitro antagonistic fluorescent pseudomonads. However, differences were only significant at 56 days after planting for cv. Lena and at 14 and 28 days after planting for cv. Palas. Both chelators, at different concentrations, had no effect on root colonization by eitherPseudomonas sp. strain WCS417r orFod strain WCS816. However, when coinoculated, reduced numbers of propagules ofFusarium were found at concentrations of Fe-EDDHA lower than 10^–5 M.Higher concentrations of the siderophore fusarine produced byFod strain WCS816 were demonstrated when Fe-EDDHA instead of Fe-DTPA was used as iron source in culture media. At equal concentrations, no such differences were found in the amount of siderophore produced by WCS417r. Germ tube length ofFod was less with Fe-EDDHA than with Fe-DTPA. The reduction of germ tube length was stronger when the purified siderophore of WCS417r was added in excess to the culture media with Fe-EDDHA than those with Fe-DTPA. Therefore, the observed reduction of germ tube growth can not completely be explained by iron deprivation. It appeared that EDDHA exhibited a toxic effect for conidia ofFod strain WCS816 as well.we conclude that the observed disease reduction by Fe-EDDHA is a consequence of a limitation of iron availability forFod. This limitation is possibly intensified by the increase in number or percentage of antagonistic fluorescent pseudomonads that strongly compete for iron. The additional effect after bacterization withPseudomonas strain WCS417r in Fe-EDDHA treated carnations of cv. Pallas is likely to be due, at least partly, to a direct competition for iron between the siderophores ofFod strain WCS816 and ofPesudomonas sp. strain WCS417r.Samenvatting Verwelkingsziekte in anjers op steenwol, veroorzaakt doorFusarium oxysporum f. sp.dianthi (Fod), werd gereduceerd indien het ijzer-chelaat Fe-EDDHA in plaats van Fe-DTPA werd toegevoegd aan de nutriëntenvloeistof. Bacterisatie metPseudomonas sp. stam WCS417r had een additioneel effect bij de matig resistence cultivar Pallas maar niet bij de vatbare cultivar Lena. Toevoeging van Fe-EDDHA in plaats van Fe-DTPA aan planten als ijzerbron resulteerde op de wortels in hogere aantallen en percentages fluorescerende pseudomonaden, diein vitro antagonistisch waren ten opzichte vanFod. De verschillen waren echter alleen significant 56 dagen na planten voor de cultivar Lena en 14 en 28 dagen na planten voor de cultivar Pallas. Beide chelaten vertoonden bij verschillende concentraties geen effect op de kolonisatie van de wortel door beide microorganismen. Echter, wanneer beide micro-organismen gezamelijk werden toegevoegd nam de wortelkolonisatie doorFod stam WCS816 af bij concentraties lager dan 10^–5 M Fe-EDDHA. Er werd meer van het siderofoor fusarine doorFod stam WCS816 geproduceerd bij concentraties lager dan 10^–4 M Fe indien Fe-EDDHA in plaats van Fe-DTPA als ijzerbron aan het cultuurmedium was toegevoegd. Er werd geen effect van beide chelaten gevonden op de siderofoorproduktie door WCS417r. Indien een overmaat van het gezuiverde siderofoor van WCS417r werd toegevoegd aan Fe-EDDHA werden een sterkere afname van de kiembuislengte gevonden dan toevoeging aan Fe-DTPA. De reductie van de kiembuislengte bleek niet volledig verklaard te kunnen worden door een afname van de ijzerbeschikbaarheid. Het chelaat EDDHA heeft ook een toxisch effect op conidiën van fusarium.Wij concluderen, dat de waargenomen reductie van de verwelkingziekte door Fe-EDDHA een gevolg is van de afname van de ijzerbeschikbaarheid voorFod. Dit wordt waarschijnlijk versterkt door de ontwikkeling van een antagonistische, fluorescerendePseudomonas-populatie die sterk concurreren om ijzer. Het additioneel effect dat door bacterisatie metPseudomonas sp. WCS417r van de met Fe-EDDHA behandelde matig resistante anjers (Pallas) werd verkregen is voor een deel het gevolg van een directe concurrentie om ijzer tussen de sideroforen vanFod stam WCS816 en vanPseudomonas sp. stam WCS417r.     

同步荧光法测定色氨酸

用同步荧光法测定了玉米、小麦、花粉等样品中的色氨酸.一般氨基酸分析用氨基酸分析仪和液相色谱仪,而色氨酸在酸解样品时被分解测不出.要测定色氨酸,需要重新制备样品,改变体系,比较繁杂.在多种氨基酸中仅有色氨酸、酪氨酸和苯丙氨酸有天然荧光,色氨酸的天然荧光最强,提供了直接测定的有利条件.用4N氢氧化钠碱解样品,在105℃时保温24小时,然后稀释,调pH为10.5—11之间,定容.最后用同步光谱扫描的办法测定,即激发波长和发射波长的单色器之间固定一定的波长差(Δλ=68nm),同时扫描,得到一个同步荧光光谱.其浓度和荧光强度有良好的线性关系,测定范围是0.01—0.20μg/ml.本方法弥补了在氨基酸测定中酸解样品时,色氨酸被分解测不出的不足,而且方法比较简单灵敏.     

Nutritional response of seedling tomato plants under different lighting treatments

In order to describe the effect of complementary artificial light supply on the nutrient status of tomato seedlings, fluorescent lamps were compared to each other. Nitrogen (N), phosphorus (P), and potassium (K) concentrations were measured (mg g^?1 dry matter). Blue, red and far-red relationships were established. The N, P and K higher concentration and uptake have been found under high efficiency fluorescent lamps. Phosphorus uptake increasing was observed at high levels of irradiation. Potassium concentration is significantly higher under compact fluorescent lamps. The relationship between ratios and N, P and K extractions were used as indicators of limitation for plant. The ratio N/P and N/K present a low relation with N extraction. The ratio N/P presents a significant correlation with P extraction, also the ratios N/K and P/K with K extraction. Significant differences in constant of lineal equation have been found in P/K ratio and K extraction.     

利用荧光SSR分析中国糜子遗传多样性

分析糜子种质资源的遗传多样性,有助于了解糜子起源与进化,可为糜子优异种质发掘及资源高效利用提供理论基础。本研究利用15个糜子特异性荧光SSR标记检测来源于中国11个省(区)的132份糜子种质资源,检测到107个等位变异,每个位点等位变异数为2~14个,平均7个;基因多样性指数为0.0936~0.8676,平均0.5298;多态性信息含量为0.0893~0.8538,平均0.4864。采用遗传距离的聚类将试验材料分为4类,类群I来自东北春糜子区,类群II来自黄土高原春、夏糜子区,类群III来自于北方春糜子区,类群IV来自北方春糜子区和黄土高原春、夏糜子区。分析模型的遗传结构表明,中国糜子资源来自4个(东北地区、黄土高原、北方地区和西北地区)基因库,与基于遗传距离的聚类结果基本一致,均与材料的地理起源相关。糜子遗传变异丰富,主要存在于糜子材料间。该结果从分子水平上准确揭示了中国糜子的遗传多样性。     

原子吸收法及原子荧光法测定中华鳖及黄沙鳖中微量元素铁、锌、硒的含量

[目的]检测野生黄沙鳖、养殖黄沙鳖以及养殖中华鳖肝脏、肌肉、裙边等不同组织中铁、锌、硒的含量。[方法]采用原子吸收光度法检测铁和锌含量,并用原子荧光光度法检测硒的含量。[结果]铁、锌、硒在野生黄沙鳖、养殖黄沙鳖以及养殖中华鳖不同组织中含量差异较大,铁的含量顺序三者均为肝脏〉蛋〉肉〉裙边,锌的含量顺序三者均为肌肉〉蛋〉肝脏〉裙边,硒的含量不同组织因品种不同有所差别。不同品种间铁、锌、硒的含量也存在较大差异。[结论]总体来说,黄沙鳖中铁、锌、硒的含量均大于中华鳖,野生黄沙鳖中铁、锌、硒的含量高于养殖黄沙鳖。     

牛磺胆酸对小鼠腹腔巨噬细胞钙调素基因表达的影响

目的:观察牛磺胆酸(Taurocholate Acid,TCA)对小鼠腹腔巨噬细胞钙调素(calmodulin,CaM)基因表达的影响,探讨TCA对小鼠腹腔巨噬细胞的作用机制.方法:分离培养小鼠腹腔巨噬细胞,应用荧光定量RT-PCR技术检测TCA对小鼠腹腔巨噬细胞CaM mRNA表达的影响.结果:与LPS刺激组相比较,高剂量(15μg/mL)和低剂量(0.15μg/mL)的TCA组小鼠腹腔巨噬细胞CaM mRNA的表达均显著高于LPS刺激组(P＜0.05).结论:TCA能显著促进小鼠腹腔巨噬细胞CaM mRNA的表达.     

Potato plant response to seed tuber bacterization in the field in various rotations

The effects of a seed tuber treatment with antagonistic isolates of fluorescentPseudomonas spp. were investigated on potato plants from 1981 to 1984. The experimental plots were located in fields in short and long rotations of potato. The short rotations are characterized by serious yield reductions which are caused by unknown microbial factors. The reductions varied from 30% in 1982 to only 3% in 1983 in the 3-year rotations. A statistically significant increase in yield (four to five months after planting) of ware potatoes varying from 9 to 20% was obtained in these plots through tuber bacterization, but only in 1981. In 1982 and 1983 initially significant improvements in shoot or tuber weight of seed potatoes were no longer detectable at ware potato harvest at the end of the growing period. Seed tuber bacterization had no effect on tuber yield in long rotations. Initial colonization of basal root parts by 53×10⁴ colony forming units (cfu) of antibiotic-resistant mutants per gram of root (fresh) dropped significantly to 20×10⁴ cfu per gram after three months. The bacterization effect on tuber yield depended on the development of harmful microbial activity and of introduced antagonists during the growing period. Seed tuber bacterization is more promising for seed potatoes than for ware potatoes in short rotations, the latter being harvested two months later.Samenvatting De invloed van pootgoedbehandeling met antagonistische isolaten van fluorescerendePseudomonas-soorten op de aardappelteelt, werd onderzocht in de periode van 1981 tot en met 1984. De proefvelden maakten deel uit van zowel ruime als nauwe rotaties met aardappelen. Kenmerkend voor de nauwe rotatie is, dat de opbrengst aanzienllijk gereduceerd wordt als gevolg van de aanwezigheid van nog onbekende microbiële factoren. Deze opbrengstverlaging varieerde van 30% in 1982 tot slechts 3% in 1983 in de 3-jarige rotaties. Pootgoedbacterisatie had in deze proefvelden een significante toename van de eindopbrengst (vier tot vijf maanden na pootdatum) van consumptieaardappelen tot gevolg, die varieerde van 9 tot 20%, echter allen in 1981. In 1982 en 1983 werd het effect van bacterisatie ook in de loop van de groeiperiode onderzocht. Aanvankelijk significante toenames van zowel spruit-als knolgewicht waren aan het einde van het groeiseizoen niet meer aantoonbaar. Pootgoedbacteristie bleek geen effect te hebben op aardappel in ruimte rotaties. Aanvankelijk werden de basale wortelgedeelten gekoloniseerd door antibioticum-resistente mutanten met 53×10⁴ kolonievormende eenheden (kve) per gram wortel(vers); dit aantal liep (drie maanden na pootdatum) echter significant terug tot 20×10⁴ kve per gram. Het effect van bacterisatie op de eindopbrengst werd bepaald door de ontwikkeling van de schadelijke microbiële activiteit en de ontwikkeling van de geïntroduceerde antagonisten tijdens het groeiseizoen. Pootgoedbacterisatie in nauwe rotaties biedt meer mogelijkheden voor de teelt van pootaardappelen dan die van consumptieaardappelen, die geruime tijd later geoogst worden.     

Evaluation of fluorochromes for imaging bacteria in soil

The distribution of inoculated Escherichia coli cells and indigenous bacteria in a silt loam soil and a sandy soil was studied using fluorescence microscopy techniques. Ethidium bromide stained inoculated cells against the soil and resin background. Satisfactory results were also obtained with epifluorescence microscopy of samples stained with calcofluor white M2R (CFW) and 4′,6-diamidino-2-phenylindole (DAPI). Indigenous soil bacteria were visualized in soil thin sections, after staining with ethidium bromide, using fluorescence microscopy. The density of these bacteria was estimated to be 10⁷-10⁸ cells/cm³. Inoculated E. coli cells, stained with one of the green fluorochromes (fluorescein isothiocyanate (FITC), 5-(4,6-dichlorotriazinyl)aminofluorescein, or eosin Y), could be clearly distinguished in sandy soil thin sections. Confocal laser scanning microscopy with 3D image reconstruction was also successfully applied to characterize distribution of E. coli introduced to soil. The fate of introduced bacteria and the location of indigenous bacteria in soil can be confirmed using the microscopic techniques described in this paper.