果树的细胞育种

细胞融合及性状转换作为一种新的方法,在作物育种领域已得到应用。果树细胞育种中最重要的是细胞培养和组织培养。特别是在建立原生质培养系方面,取得了进展。     

草鱼三元病原菌融合子的构建及生物学特性

采用细胞融合技术首次将肠型点状产气单胞菌菌株和鱼害粘球菌菌株融合,构建二元融合菌株AM-1,再将AM-1与荧光假单胞菌菌株融合,构建三元融合菌株AM-2。对AM-1和AM-2菌株的形态结构、生理生化特性、致病性、抗原性、抗体效价进行分析。结果表明,AM-1活菌椭圆形,无鞭毛,死菌短杆状,AM-2菌株短杆状,有鞭毛,它们的生理生化性状介于3原始亲本菌株之间;用AM-2菌株对当年健康草鱼种进行人工感染攻毒,被攻毒草鱼种具有烂鳃病、赤皮病及肠炎病的部分症状;AM-2菌株抗原的受免草鱼种对荧光假单胞菌、鱼害粘球菌和肠型点状产气单胞菌菌株的免疫保护率分别达64.90％、68.00％、67.00%,抗体效价最高达1∶256、1∶256、1∶512。测定了AM-1和AM-2菌株及亲本DNA含量并进行了琼脂糖凝胶电泳分析,AM-1和AM-2菌株DNA含量明显高于任一原始亲本。图4表6参23     

对虾白斑综合征病毒单抗介导间接ELISA的建立

从白斑综合征病毒（WSSV）青岛株感染的克氏原螯虾（Canbarus proclarkii）中提纯病毒，用纯化病毒免疫BALB／c小鼠，采用细胞融合法获得4株阳性杂交瘤细胞，分别命名为1B1、1E4、4E6和4E5。4株单抗均为IgM。4E5株单抗在免疫转印中与37500左右的病毒蛋白条带呈阳性反应。用此株单抗作一抗，建立检测病毒蛋白的间接ELISA。该方法用于人工感染WSSV的螯虾组织样品中病毒的检测，48h后即有阳性检出，而正常螯虾组织均呈阴性。     

小鼠H-Y单克隆抗体ELISA检测方法的建立

以纯系 BAL B/ c雄性小鼠脾细胞腹腔注射免疫同系雌性小鼠 9次 ,获得的抗血清经雌、雄鼠脾细胞吸收后用于精子细胞毒性试验 ,测得 H- Y抗血清效价为 1/ 16 0。选取免疫应答最好的雌鼠脾细胞与 SP2 / 0骨髓瘤细胞融合 ,用精子细胞毒性方法筛选效价较高的细胞株制备腹水 ,建立优化的 EL ISA反应条件。优化后的 EL ISA反应条件为 :抗原4℃过夜 ,加 H- Y抗血清 37℃反应 12 0 m in,加 HRP- Ig G 37℃反应 30 min,加 TMB 2 5℃ 30 min。优化后的 EL ISA与常规 EL ISA比较 ,可以明显降低阴性吸光值 ,检测灵敏度从 1/ 32 0上升为 1/ 12 80     

卵龄及激活液中Ca2+浓度对小鼠卵母细胞电激活效率的影响

采用宁波新科CRY-3细胞融合仪及其配备的镀银电融合槽(电极宽度为0.5mm)对影响电激活效率的两个因素——卵龄及激活液中Ca2 浓度进行了比较研究。结果表明:①卵母细胞的活化率随卵龄的增加明显升高,电刺激hCG后18～19h的卵母细胞可获得较高的卵母细胞激活率(71.67%),继续增加卵龄,卵母细胞激活率、卵裂率和囊胚发育率开始下降。②使用含Ca2 的激活液可获得较高的卵母细胞激活率,但Ca2 的浓度变化对激活效果无显著影响(P>0.05)。     

苜蓿原生质培养及体细胞杂交技术的应用

阐述了植物原生质体培养和体细胞杂交技术以及苜蓿Medicago spp.体细胞胚胎发生特性,综述了该技术在苜蓿育种研究中的应用状况,同时介绍了我国苜蓿研究领域原生质体培养和体细胞杂交技术的研究进展.     

优化PEG诱导鸡血细胞融合条件的研究

为了解决聚乙二醇(PEG)诱导细胞融合效果较低的问题,试验以鸡血细胞为材料,通过优化PEG诱导鸡血细胞融合的条件来提高细胞融合率,即在融合温度为38℃和融合时间为10 min的条件下,采用双因素设计研究PEG相对分子质量(2 000,4 000,6 000)和浓度(25%、50%、65%、80%)及其互作对血细胞融合率的影响;确定最佳PEG相对分子质量和浓度后,采用相同试验设计研究融合温度(35℃、38℃、41℃)和时间(5,10,20 min)对血细胞融合率的影响。结果表明:PEG相对分子质量(F=5.36,P=0.009 2)和浓度(F=28.46,P<0.000 1)对血细胞融合率均有显著影响,且相对分子质量为4 000、浓度为50%时血细胞融合率最高;PEG相对分子质量与浓度的互作对血细胞融合率的影响不显著(F=2.42,P=0.054 7)。融合温度对血细胞融合率有显著影响(F=6.56,P=0.004 8),38℃时血细胞细胞融合率最高;但融合时间(F=0.34,P=0.720 0)及其与温度的互作(F=0.58,P=0.680 0)对血细胞融合率均无显著影响。说明P...     

聚乙二醇细胞融合技术在牛手工体细胞克隆中的应用初探

本研究分3个实验。实验1对比了不同浓度的离子霉素对牛去透明带卵母细胞孤雌激活的效果;实验2比较了手工半卵切割法去核与显微半卵切割法去核的效果;实验3对聚乙二醇（PEG）细胞融合技术在牛手工体细胞克隆的应用进行了初步探讨。结果表明,对于去透明带牛卵母细胞孤雌激活,离子霉素浓度为2．0μmol／L组的激活效果最好,其囊胚发育率（29．4％）极显著地高于浓度为5．0μmol／L的对照组和0．5μmol／L组（囊胚率分别为8．3％和9．4％,P〈0．01）;采用半卵切割法去核,手工切割的半卵存活率（85．6％）与显微操作（90．3％）差异不大,切割速率（约100枚卵／h）相仿。对双半卵与体细胞进行同步融合处理时,应用50％浓度的PEG融合率（39．3％）极显著好于45％、55％和60％的PEG（融合率分别为0％、16．2％和5．3％,P〈0．01）。     

驱蚊香草的组培陕繁

驱蚊香草又名蚊净草，为牦牛儿科天竺葵属转基因常绿草本植物。最早是由荷兰、法国的生物学家运用细胞融合技术，将香茅草中能产生香茅醛的基因转移到天竺葵中培养而成的新型植物。在自然条件下散发驱蚊物质香茅醛，达到驱蚊效果，且具有柠檬香味，由此而得名。驱蚊香草株形优美，气味芳香，具有生态驱蚊、净化空气、提神醒脑、抗菌消毒等功效，在欧洲深受欢迎。近几年，我国南方及一些大城市开始引进栽培，需求量逐渐增大。但因其花不育，不能结实，传统的扦插繁殖方法远远不能满足市场的需求，