大通县城奶牛乳样中葡萄球菌的分离与鉴定

通过细菌分离培养法对大通县城奶牛乳汁样品36份进行金黄色葡萄球菌的分离，并采用金黄色葡萄球菌常规鉴定方法血浆凝固酶试验、甘露醇发酵试验和接触酶试验进行了鉴定，36份乳样中检出金黄色葡萄球菌阳性7份，阳性率为19．7％(7／36)。     

金黄色葡菌球菌脂蛋白对M1型小鼠骨髓源巨噬细胞免疫作用的影响

本研究旨在阐明金黄色葡萄球菌脂蛋白对M1型小鼠骨髓源巨噬细胞免疫作用的影响，为金黄色葡萄球菌致病性研究提供理论参考。以金黄色葡萄球菌野生株SA113（WT SA113）和SA113 lgt：：ermB脂蛋白表达缺失菌株（SA113Δlgt株）体外感染M1型小鼠骨髓源巨噬细胞，分为3组：空白对照组、WT SA113感染组（MOI：3：1）、SA113Δlgt感染组（MOI：3：1）。采用ELISA法检测M1型小鼠骨髓源巨噬细胞中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素1β（IL-1β）、趋化因子（RANTES）和白细胞介素10（IL-10）的水平，实时荧光定量PCR检测Toll样受体2（TLR2）、Toll样受体4（TLR4）和含NLR家族Pyrin域蛋白3（NLRP3）基因的表达，免疫荧光法检测脂蛋白对M1型小鼠骨髓源巨噬细胞吞噬金黄色葡萄球菌作用的影响。结果显示，与空白对照组相比，WT SA113感染组和SA113Δlgt感染组均可显著上调M1型小鼠骨髓源巨噬细胞中TNF-α、RANTES、IL-10分泌量以及WT SA113感染组TLR2、NLRP3基因表达水平（P<0.05），而TLR4基因表达量显著降低（P<0.05）；与WT SA113感染组相比，SA113Δlgt感染组M1型小鼠骨髓源巨噬细胞中TNF-α、IL-1β、RANTES、IL-10分泌量以及TLR2（12 h除外）、NLRP3基因表达水平显著降低（P<0.05）。免疫荧光结果显示，M1型巨噬细胞对SA113Δlgt株的吞噬作用显著低于对WT SA113株的吞噬作用（P<0.05）。综上，金黄色葡萄球菌的脂蛋白在M1型小鼠骨髓源巨噬细胞中主要通过激活TLR2和NLRP3受体，诱导细胞因子TNF-α、IL-1β、RANTES和IL-10的产生和释放。     

Prevalence of antimicrobial-resistant staphylococci in nares and affected sites of pet dogs with superficial pyoderma

Currently, antimicrobial-resistant staphylococci, particularly methicillin-resistant Staphylococcus pseudintermedius (MRSP), are frequently isolated from canine superficial pyoderma in Japan. However, little is known regarding the nasal prevalence of MRSP in pet dogs. Here, we determined the prevalence of antimicrobial-resistant staphylococci in nares and affected sites of pet dogs with superficial pyoderma. Of the 125 nares and 108 affected sites of pet dogs with superficial pyoderma, 107 (13 species) and 110 (eight species) staphylococci strains, respectively, were isolated. The isolation rate of S. pseudintermedius from pyoderma sites (82/110 strains, 74.5%) was significantly higher than that from nares (57/107 strains, 53.3%) (P<0.01). Notably, the prevalence of MRSP (18/57 strains, 31.6%) in nares was equivalent to that in pyoderma sites (28/82 strains, 34.1%). Furthermore, the phenotypes and genotypes of antimicrobial resistance in MRSP strains from nares were similar to those from pyoderma sites. Our findings revealed that the prevalence of antimicrobial-resistant staphylococci in the nares of pet dogs with superficial pyoderma is the same level as that in affected sites. Therefore, considerable attention should be paid to the antimicrobial resistance of commensal staphylococci in companion animals.     

新疆部分地区生乳中金黄色葡萄球菌的分离鉴定及耐药性分析

【目的】探明新疆部分地区生乳中金黄色葡萄球菌流行情况及耐药性,为该地区生乳中金黄色葡萄球菌的监测及保障生乳质量安全提供理论依据。【方法】试验随机从南北疆规模化奶牛场采集110份生乳样品。采用增菌培养、分离纯化、革兰氏染色、生化鉴定及PCR法对奶样中金黄色葡萄球菌进行分离鉴定,并利用微量肉汤稀释法及PCR方法对金黄色葡萄球菌进行16种抗菌药物的耐药表型及耐药基因分析。【结果】从110份奶样中分离出18株金黄色葡萄球菌,分离株呈浅黄色、光滑凸起的圆形菌落,革兰氏染色镜检呈紫色、短链状排列的革兰氏阳性菌,生化试验结果符合金黄色葡萄球菌生化特点,经16S rDNA及nuc基因PCR扩增鉴定为金黄色葡萄球菌,分离率为16.36%(18/110)。药敏试验结果显示,金黄色葡萄球菌分离株对氨苄西林、青霉素及磺胺异噁唑具有较高的耐药性,耐药率分别为100%、83.33%和77.78%,而对万古霉素、复方新诺明、苯唑西林、头孢噻吩、头孢噻呋、利福昔明及环丙沙星7种抗菌药物高度敏感,敏感率分别为100%、100%、94.44%、94.44%、94.44%、94.44%和94.44%。其中有14株金黄色葡萄球菌为多重耐药菌,多重耐药率为77.78%。耐药基因检测结果显示,大环内酯类耐药基因ermB检出率最高,为50.00%,其次为β-内酰胺类耐药基因mecA,检出率为27.28%,磺胺类耐药基因Sul1的检出率为22.22%。【结论】新疆奶牛场生乳中分离的金黄色葡萄球菌的流行及耐药情况仍较严重,且存在多重耐药现象,因此,对生乳中金黄色葡萄球菌耐药性的监测有重要意义。     

猪源ST9型耐甲氧西林金黄色葡萄球菌中前噬菌体的流行状况与转导分析

本研究旨在分析猪源ST9型耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,MRSA)中前噬菌体的流行情况、结构特点和转导能力,探究前噬菌体在猪源MRSA流行克隆形成中的作用。基于全基因组信息,分析了近年来从我国多省分离的131株ST9型MRSA中前噬菌体的流行率、分型、亲缘关系和结构特征;选取含不同分型前噬菌体的菌株进行诱导,对诱导获得的噬菌体颗粒进行转导,测定转导子的耐药表型及体外适应性。研究结果显示：猪源ST9型MRSA的前噬菌体携带率为78.6%(103/131株),其中,63株携带完整前噬菌体序列,所有前噬菌体序列均不含耐药基因,仅2.9%(3/103株)的前噬菌体序列含毒力基因;前噬菌体谱型丰富,其整合酶分型主要为Sa2int和Sa4int;各型别前噬菌体结构同源性较高,完整前噬菌体可被诱导为长尾噬菌体;噬菌体颗粒可包装供体菌的aadD、tet(L)耐药基因并转导至受体菌中;转导子可获得卡那霉素、四环素耐药表型,体外生长能力与受体菌株无明显差异(P>0.05)。研究结果表明：猪源ST9型MRSA的前噬菌体携带率较高,谱型丰富,不携带耐药基因,部分噬菌体可包装供体菌的耐药基因转导至受体菌,产生的适应性代价小。     

Cd胁迫下绿豆和箭舌豌豆叶片抗氧化系统的变化

研究了Cd胁迫下绿豆（Phaseolus aureus）和箭舌豌豆（Vicia sativa）幼苗的生长,叶片内过氧化氢酶（CAT）、抗坏血酸过氧化物酶（APX）、超氧化岐化酶（SOD）、愈创木酚过氧化物酶（GPOD）和谷胱甘肽还原酶（GR）的同工酶活性,还原性谷胱甘肽（GSH）和抗坏血酸（ASC）以及Cd含量的变化。结果显示,100μmol.L-1Cd胁迫9d期间,随着Cd胁迫时间的延长,绿豆和箭舌豌豆幼苗主根的伸长量和其根系干重显著降低（P〈0.05）,根表面出现越来越明显的褐色,绿豆叶表面出现可见的褐色斑点;两种植物叶片的CAT、APX和SOD同工酶活性以及绿豆叶片的GR活性呈先升后降的趋势,而两种植物叶的GPOD活性明显增加;在箭舌豌豆叶片中,GR活性随Cd暴露时间的延长而增加,而GSH先降后升;在绿豆叶片中,GSH和ASC随Cd暴露时间的延长而降低;与此同时,两种植物叶片中Cd的含量也随Cd胁迫时间的延长而增加,和箭舌豌豆相比,绿豆叶片中Cd含量增加更多。结果表明,箭舌豌豆有较强的抗氧化能力。     

甘草总黄酮对金黄色葡萄球菌的作用研究

为了研究甘草总黄酮对金葡菌的抗菌活性以及亚抑菌浓度的甘草总黄酮对金黄色葡萄球菌α-溶血素分泌的影响。首先,采用微量肉汤稀释法测定了甘草总黄酮对6株金葡菌标准菌株的最小抑菌浓度;其次,采用溶血试验、蛋白免疫印迹试验以及荧光定量PCR试验分别在表型功能、蛋白表达和基因转录3个层次确证了其对α-溶血素表达的影响。结果表明：甘草总黄酮具有良好的抗金葡菌作用,其最小抑菌浓度范围为4~16 μg/mL,而亚抑菌浓度的甘草总黄酮能浓度依赖性地降低金葡菌α-溶血素的分泌。     

温度对奥尼罗非鱼受精卵孵化和仔鱼活力的影响

研究了温度对奥尼罗非鱼(Oreochromis niloticus×O.aureus)受精卵孵化和仔鱼活力的影响。在盐度为5不同温度(22、24、26、28、30、32和34℃)下,比较观察奥尼罗非鱼受精卵的培育周期、孵化周期、孵化率和畸形率。同时在以上不同温度条件下对初孵的奥尼罗非鱼仔鱼进行耐饥饿试验,测定其不投饵存活系数(Survivalactivity index,SAI)。结果表明:在温度为24~32℃,受精卵孵化率较高(84.3%~91%),温度高于34℃和低于22℃时,孵化率较低。温度与培育周期呈负相关关系,函数关系为y=0.3607x2-26.836x+553.5,R2=0.973。仔鱼生存适宜温度是24~30℃,最适的温度是24~26℃。温度为22℃时,SAI值分别为19.9,但是仔鱼发育的缓慢,部分仔鱼的身体色素一直没有出现,不适合仔鱼的培育。     

奶牛隐性乳房炎三种致病菌的多重PCR检测方法的建立

为建立快速并能同时检测无乳链球菌、金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌3种奶牛隐性乳房炎致病菌的方法,根据无乳链球菌16S rRNA基因、金黄色葡萄球菌NUC耐热基因、绿脓杆菌ETA基因序列并参考文献各合成一对特异性引物,通过对PCR反应各项参数的调整优化,建立多重PCR检测体系,并同时进行灵敏性试验和特异性试验。结果显示:该检测方法可以同时扩增出无乳链球菌270 bp、金黄色葡萄球菌153 bp和绿脓杆菌375 bp的特异性片段以及细菌16S rRNA 1 500 bp的通用片段,而对于其他的6种病原菌只能扩增出1 500 bp的通用片段,具有较强的特异性。三种特异性引物扩增条带与GenBank上的细菌基因序列同源性为99%。增菌培养24 h,该体系对无乳链球菌、金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌的最低灵敏度分别为8×10⁴、4×10⁴、1.5×10⁵ CFU·mL^-1。本研究建立的检测方法能够完成无乳链球菌、金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌的快速检测,对于生产上奶牛隐性乳房炎的鉴别诊断和快速检测具有重大意义。     

中国奠基群奥利亚罗非鱼遗传多态性的DNA指纹图谱

运用３３．６和３３．１５两种人源小卫星探针对中国奠基群奥利亚罗非鱼群体进行遗传多态性的ＤＮＡ指纹图谱研究。结果表明,在奥利亚罗非鱼群体中两种探针都能产生个体特异性的ＤＮＡ指纹图谱;两种探针平均检测出６２．５条条带,其中多态性条带占５８．５％,个体平均条带数为７．８１３;奥利亚罗非鱼种群内相似系数为０．７４０,遗传变异系数为０．２６０,证明奥利亚罗非鱼群体的遗传纯度极高,遗传多态性很低,但仍存在一定