蓝粒小麦4Ag染色体的显微分离与鉴定

本研究采用显微分离技术从蓝粒小麦(Triticum aestivum L.(2n=6x=42)×Thinopyrum ponticum Liu &Wang(2n=10x=70))根尖细胞中期分裂相中分离出具有4Ag染色体形态特征的单条染色体,对分离后的细胞进行原位杂交(FISH),结果显示细胞中所剩的和显微分离到的单条染色体均为4Ag染色体.利用Sau3A接头介导的PCR方法对分离出的单条4Ag染色体进行体外扩增,扩增的DNA片段大小约为200～2 000 bp,主要集中在250～750 bp之间.以DIG-dUTP标记的蓝粒基因组DNA为探针,与该扩增产物进行Southern杂交,结果表明显微分离出的染色体得到了有效的扩增.利用该分离染色体的PCR扩增产物为探针,对蓝粒小麦进行原位杂交,证明显微分离的染色体体外扩增片段确实来源于4Ag染色体.本研究拓宽了染色体显微分离的范围,为构建4Ag染色体文库和克隆位于该染色体上的重要农艺性状基因提供了新途径.     

Cloning and Characterization of a Family of Disease Resistance Gene Analogs from 6VS of Haynaldia villosa

In the present study, microdissection of 6VS and the cloning of the resistance gene analogs (RGA) from them were reported. The 6VS were microdissected with needle and 10 types of resistance gene analogs were obtained by PCR with degenerate oligonucleotide primer designed according to resistance genes. They were designated as Hvrgak1-Hvrgak10, GenBank accession numbers are AF387113-AF387121,AY040671- AY040672. Identity among RGAs was about 10-50%, and identity with cloned R gene from plants was 5-20%. Southern hybridization analysis results showed 3 RGAs, Hvrgak2, Hvrgak4, and Hvrgak5 were linked with wheat powdery mildew resistance. These RGAs may be used as direct entrance or probes for cloning the disease resistance genes.     

显微切割技术应用领域及研究进展

综述了显微切割技术在医学、分子病理学、刑侦及植物育种中的应用情况。     

圆果种黄麻单染色体显微分离与扩增

以圆果种黄麻(Corchorus capsularis L.)品种高雄青皮为研究材料,利用玻璃针显微分离的方法成功分离出高雄青皮的单染色体2条。对获得的单染色体采用LAM-PCR方法进行扩增,电泳结果显示:DNA片段的长度在250～3 000 bp之间。利用Southern blot杂交对扩增产物进行验证,结果表明:获得的扩增片段确实来自高雄青皮的基因组。     

欧洲山杨一号染色体显微分离、原位杂交分析及特异文库的构建

 以欧洲山杨( Populus tremula) 根尖细胞为材料, 采用玻璃针分离法, 通过显微操作器成功地分离出一号染色体。将分离到的单条染色体去蛋白、Sau3A酶切, 并在染色体DNA片段两端加上Sau3A人工接头, 进行两轮PCR扩增, 得到了200～3 000 bp的DNA扩增片段。以DIG2dUTP标记的欧洲山杨基因组DNA为探针进行Southern杂交, 结果表明显微分离出的染色体扩增片段与欧洲山杨基因组DNA同源,从而证明一号染色体DNA确实已被成功地扩增。以一号染色体第2轮PCR产物为探针进行荧光原位杂交,发现荧光信号较密集的分布于一号染色体, 但同时荧光信号也出现在其它染色体的着丝粒及端粒区域。对第2轮PCR产物进行克隆, 构建单条染色体DNA文库, 经分析, 该微克隆文库包含约3 ×10⁵ 个重组子。随机挑选160个重组子进行鉴定, 证明该文库的插入片段主要介于230～2 200 bp之间, 平均800 bp。该文库的构建为欧洲山杨1号染色体特异探针的筛选、遗传图谱的构建、重要基因的克隆等研究奠定了基础。     

簇毛麦端体6VS的抗病同源序列的克隆及分析

 本研究采用玻璃针切割法对小麦遗传背景下的簇毛麦端体6VS进行了微切割,根据已克隆抗病基因的保守域设计引物,从6VS端体DNA中扩增出10类抗病基因同源片段Hvrgak1-Hvrgak10(GenBank登录号为AF387113-AF387120,AY040671,AY040672)。并利用抗病同源序列作探针,进行与小麦抗白粉病基因的相关分析,结果表明,Hvrgak2、Hvrgak4和Hvrgak5可能与抗白粉病基因相关。这些抗病基因同源片段可以为抗病基因克隆提供切入点或是直接的探针。     

一种利用染色体显微切割和微克隆获得小麦基因探针的方法

利用染色体显微切割和微克隆技术对普通小麦钢８２－１２２（Ｔｒｉｔｉｃｕｍ ａｅｓｔｉｖｕｍ ２ｎ＝４２）染色体长臂１Ｄ染色体进行切割和ＰＣＲ扩增，提出了高分子量麦谷蛋白（ＨＭＷ－ＧＳ１）１Ｄｘ５亚基基因片段，可为获得新基因特异性探针打下一定的基础。     

小麦黄矮病抗性基因及其鉴定研究进展

小麦黄矮病是由大麦黄矮病毒(BYDV)引起的小麦主要病害之一。本文综述了小麦BYDV的主要抗性基因及其鉴定方法、微克隆和微分离的研究进展，并对其形态学标记、生化标记、细胞学分析和分子标记鉴定方法的原理及应用作了比较分析。本文最后还提出了目前研究中存在的问题及其未来研究的方向。     

漳州水仙随体染色体的分离及DNA文库的构建

以漳州水仙为材料,采用微细玻璃针分离了水仙第7号同源组的3条随体染色体,进行了LA-PCR体外扩增,Southern杂交证明水仙单染色体DNA被成功扩增.将扩增产物插入PMD18-T载体构建了5.0×105个克隆的单染色体DNA文库,为进一步研究中国水仙的起源与进化提供了有益的细胞遗传学和分子生物学依据.     

巴西橡胶树 ‘热研 7-33-97’ 单染色体显微分离与扩增

巴西橡胶树是天然橡胶的重要来源。而染色体显微分离技术对基因组研究有重要意义。本研究以巴西橡胶树‘热研7-33-97’幼叶为材料,采用酶解去壁低渗法制片,建立了微细玻璃针法分离巴西橡胶树单条染色体技术体系。成功分离出8条染色体;随机选取其中2条进行了2轮LA-PCR扩增,得到400-1800 bp之间的DNA片段,通过Southern blot杂交对LA-PCR产物进行验证,结果表明扩增片段与巴西橡胶树基因组DNA之间有同源性。从而说明单染色体DNA已被成功的扩增。这就证明利用染色体微分离、微克隆技术对巴西橡胶树基因组进行研究是可行的。为构建巴西橡胶树单染色体文库奠定了基础。