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1.
2.
黄瓜花叶病毒山东分离物外壳蛋白基因的克隆及序列分析 总被引:7,自引:1,他引:7
对侵染烟草的黄瓜花叶病毒(CMV)山东分离物(SD1)的外壳蛋白(CP)基因进行克隆和序列分析。根据已报道的黄瓜花叶病毒外壳蛋白基因序列合成两条寡聚核苷酸引物,用免疫捕捉PCR的方法对黄瓜花叶病毒的外壳蛋白基因进行了扩增。将所得的PCR产物通过T4DNA连接酶连接到pET-22b(+)载体上,并转化大肠杆菌DH5α。序列分析表明:CMV-SD1的CP基因全长657bp,编码218个氨基酸;其核苷酸序列与黄瓜花叶病毒亚组Ⅰ的分离物有极高的同源性,达92.7%~94.9%;与亚组Ⅱ的同源性仅为59.3%~59.5%;由此将CMV-SD1分离物归属于CMV亚组Ⅰ。 相似文献
3.
采用菊薯块茎的腋芽进行生长点的剥离,通过组织培养得到了再生植株.经双抗体夹心酶联(DAS-ELISA)法对脱毒植株进行病毒鉴定表明,脱毒的成功率为60%.用无毒苗的茎段(含节)、叶片作为外植体,筛选了从启动、增殖与分化直至生根各阶段的最适培养基,建立了简单良好的再生体系.茎段增殖的最适培养基为MS+BA 1 mg·L-1+NAA 0.1 mg·L-1,愈伤组织诱导的最适培养基为MS+BA0.2 mg·L-1+TDZ 0.01 mg·L-1+NAA 0.05 mg·L-1,最适生根培养基为1/2MS+NAA 0.01 mg·L-1.平均移栽成活率达80%以上. 相似文献
4.
侵染绿花椰菜的黄瓜花叶病毒(CMV)研究 总被引:1,自引:0,他引:1
从杭州市郊菜园表现严重花叶、矮化症状的绿花椰菜病株上获得一病毒分离物C-931。汁液摩擦接种6科21种植物,C-931可侵染其中的6科19种;体外抗性测定表明C-931的稀释限点(DEP)为10 ̄(-2),致死温度(TIP)为55-60℃,25℃体外存活期(LIV)为4d;提纯病毒粒体球形,平均直径28nm;在琼脂双扩散反应中C-931能与CMV抗血清呈阳性反应;SDS-PAGE测得其衣壳蛋白亚基分子量为29kD;用CF-11纤维素柱提取受侵植物组织中dsRNA,电泳鉴定表明共有5个核酸组分,长度(kb)分别为3.3,3.0,2.2,0.9和0.35.根据上述性状,C931被鉴定为黄瓜花叶病毒,且该分离物含卫星RNA。 相似文献
5.
转CMV—CP基因番茄后代的田间抗病性 总被引:1,自引:0,他引:1
以土壤农杆菌为介导,用叶盘法转化获得的转CMV-CP基因(黄瓜花叶病毒外壳蛋白基因)番茄工程植株,通过连续选择和自交,得到R1、R2、R3、R4和R5代的转化番茄植株。1993-1994年采用人工接种和田间自然发病两种方式鉴定转化植株对CMV病毒的田间抗性。结果表明,转基因番茄植株对CMV侵染有高度抗性。人工接种R1、R2、R3、R4代转化植株的防病效果达50-73%。有50%以上的转基因植株始终 相似文献
6.
黄瓜花叶病毒丹参株系外壳蛋白基因的克隆和序列分析 总被引:1,自引:0,他引:1
从河北安国具有典型花叶症状的大田丹参叶片中分离到病毒病原 ,经过生物学接种、电镜观察和酶联免疫吸附测定表明该离物与CMV有较近的亲缘关系 (记为CMV DS)。从叶片中提取了该病毒的总RNA ,按照CMV外壳蛋白 (CP)基因前后保守区序列 ,设计合成了 1对特异引物 ,采用RT PCR法扩增了 780bp的全长CP基因的cDNA序列 ,将其克隆到pGEM T载体上 ,并进行序列分析。结果重组克隆序列长为 778bp ,含 1个开放阅读框架 (ORF) ,长度为 65 7nt,编码 2 1 8个氨基酸组成的蛋白。与国内外报道的CMV株系序列比较 ,CMV DS和亚组Ⅰ株系的核苷酸序列和氨基酸序列的同源性为 93 3%~ 99 4%和95 9%~ 1 0 0 % ;而与亚组Ⅱ株系的核苷酸和氨基酸序列同源性仅为为 78 4%~ 79 0 %和81 2 %~ 83 0 % ,表明CMV DS与CMV亚组Ⅰ的株系较亚组Ⅱ株系同源关系更密切 ,将其划归为CMV亚组IB中 ,这是首次在丹参上发现的CMV株系。 相似文献
7.
以5份不同类型的辣(甜)椒为供试材料,人工接种CMV重花叶型株系,通过DAS-ELISA方法,分别检测接种5、10、15、20、25、30d后辣椒植株中CMV含量的时序变化,同时对供试材料进行人工接种抗性鉴定,并对2种方法得到的数据进行相关性分析。结果显示:不同类型供试材料接种5~15d后的病毒含量逐渐增加,并于15d时达到最高水平,之后略有回落;通过DAS-ELISA检测得到的植株病毒含量与人工接种抗性鉴定得到的病情指数呈正相关,说明2种鉴定方法获得的结果一致。 相似文献
8.
9.
中国北方番茄主要病毒种类普查及TMV、CMV株系鉴定 总被引:3,自引:0,他引:3
1990—1994年,对中国北方15省(市)番茄4种主要病毒种类进行了普查,在3761份样本中,烟草花叶病毒(TMV)和黄瓜花叶病毒(CMV)的检出率分别为34.5%—65.7%和11.6%—62.6%,马铃薯X病毒(PVX)和马铃薯Y病毒(PVY)的检出率一般为10%—20%。与此同时,也对番茄上的TMV和CMV进行了与抗病毒育种紧密相关的株系分化研究,在333个TMV分离物中鉴定出0、1、2和1.2株系,以0和1株系为主,在绝大多数省(市)中分别占分离物的50%和30%以上;在232个CMV分离物中鉴定出轻花叶、重花叶、坏死和黄化株系,以轻花叶和重花叶株系为主,在绝大多数省(市)中分别占分离物的30%和50%以上,这一研究结果为番茄病毒病的综合防治和抗病毒育种提供了科学依据。 相似文献
10.
与黄瓜感花叶病毒病基因连锁的分子标记 总被引:1,自引:0,他引:1
本研究以黄瓜(Cucumis sativus L.)高感黄瓜花叶病毒(CMV)和高抗CMV亲本组合(HZL04-1×F-3)的F2分离群体为试材,采用极端个体分组法和AFLP技术筛选与黄瓜抗CMV基因连锁的分子标记.AFLP引物组合E22M88在抗病组和感病组间约200 bp处表现多态性.经F2单株分析,在感病亲本和感病单株中扩增出了约为200 bp的特异片段,而抗病亲本和抗病个体无此条带.该特异标记与CMV抗性基因相连锁,遗传距离为9.74 cM.测序结果显示,目标片段的大小为202 bp,并将该标记转换为了序列特征化扩增区域(SCAR)标记.提供了黄瓜材料CMV抗性鉴定的分子方法和手段,可用于分子标记辅助育种. 相似文献