葛根素的大孔树脂纯化及抗氧化性研究

主要研究了大孔树脂纯化葛根素工艺及抑菌性质。以葛根素吸附率为指标,通过正交试验确定大孔树脂纯化葛根素最佳工艺条件,即上样液浓度0.8 g·m L-1,吸附流速9 BV·h-1,乙醇浓度80%,洗脱流速4 BV·h-1。同时试验结果表明,葛根素对羟自由基具有较强清除能力,因此,葛根素具有较好的抗氧化活性。     

葛根素对松辽黑猪前体脂肪细胞成脂分化的影响

为探究葛根素对松辽黑猪前体脂肪细胞成脂分化的调控作用,在细胞诱导液中分别添加0、10、20、40、60和80 μmol/L葛根素进行成脂诱导分化,用油红O染色法和甘油三酯酶法检测脂肪细胞分化过程中脂滴聚集情况和甘油三酯含量以考察脂质沉积和分化效果,并确定葛根素的最佳添加浓度;用实时荧光定量PCR检测对照组(0 μmol/L)和最佳葛根素浓度添加组成脂标志基因细胞过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)、CCAAT-增强子结合蛋白α(C/EBPα)及成脂分化基因乙酰辅酶A羧化酶(ACC)、脂肪酸结合蛋白(FABP4)、应激蛋白(TRIB)和叉头框蛋白O1 (FOXO1)的mRNA的表达水平,用Western blotting检测PPARγ和C/EBPα的蛋白表达水平。结果表明,与对照组相比,20、40和60 μmol/L葛根素均显著增加脂滴和甘油三酯含量(P<0.05),且40 μmol/L葛根素效果最佳;实时荧光定量PCR结果表明,与对照组相比,40 μmol/L葛根素显著上调成脂标志基因PPARγ、C/EBPα及成脂分化基因ACC、FABP4、FOXO1和TRIB的表达(P<0.05);Western blotting结果显示,与对照组相比,40 μmol/L葛根素显著增加PPARγ蛋白表达(P<0.05)。综上所述,40 μmol/L葛根素能够促进松辽黑猪前体脂肪细胞的成脂分化和脂质沉积。     

HPLC测定宫衣净酊中葛根素含量

为了建立宫衣净酊中葛根素的高效液相色谱(HPLC)测定方法,应用色谱柱为安捷伦Eclipse XDB-C18(4.6mm×250mm,5μm),流动相为甲醇-水(25∶75),流速为1mL/min,检测波长为250nm,柱温为30℃。结果表明,在此色谱条件下,葛根素的线性范围为18.25μg/mL~584.00μg/mL(r=0.999 9,n=6),平均回收率为108.83%(RSD=1.03%)。说明本方法简便、准确、重现性好,可以作为宫衣净酊的质量控制方法。     

葛渣栽培平菇实验研究

为了探究葛渣栽培平菇可行性,减少葛渣对环境的影响,分别对葛渣栽培的平菇菌丝生长情况,营养价值和葛根素在平菇中生物转化做出评价。采用高效液相法,分别对葛渣及葛渣栽培出来的平菇进行葛根素的含量测定。采用国家检测标准规定的分析方法,分别测定葛渣栽培出的平菇总热量、粗蛋白、粗脂肪、粗纤维、灰分等含量。结果显示,纯葛渣平菇底料菌丝生长最好,菌丝洁白粗壮;在常规底料中科学添加一定量的葛渣,可以提高平菇中总蛋白、总热量和粗脂肪的含量;葛根素含量随葛渣替代的比例越高,含量越高,但是底料添加葛渣后其所含的葛根素不能被平菇本身生物转化。     

葛根素提取工艺及其表征的研究

通过对野葛根中葛根素的分离提纯研究,发现溶剂的浓度对葛根素的收率及酸解过程中盐酸浓度对葛根素晶体纯度的影响均非常明显。为此,对这两个因素做进一步研究,结果表明：45%乙醇抽提时收率达2%;5%盐酸酸解时纯度达95.8%。并对提取物结构进行了1H NMR1、3C NMR、MS、IR表征。为进一步研究葛根素的应用奠定了基础。     

HPLC法同时测定葛根中葛根素·大豆苷及大豆苷元含量

[目的]建立HPLC同时测定葛根中葛根素、大豆苷、大豆苷元含量的检测方法。[方法]HPLC色谱条件为:C18柱,流动相为甲醇-1%醋酸水溶液梯度洗脱,检测波长250 nm,流速1.0 ml/min,柱温30℃,进样量10μl。[结果]在测定范围内,葛根中葛根素、大豆苷、大豆苷元混合对照品的线性关系良好。[结论]该方法可为葛根的质量控制及综合开发提供参考。     

RP-HPLC法测定颈复康颗粒中葛根素的含量

[目的]采用反相高效液相色谱法测定颈复康颗粒中葛根素的含量。[方法]色谱柱为Kromasil 100-5C18(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相为无水甲醇-水-磷酸(20∶80∶0.2,V/V/V),流速为1.0 ml/min;检测波长为250 nm。[结果]阴性对照无干扰;计算回归方程为Y=4 233 801X-34 587,R为0.999 9(n=6)。结果表明,在0.063～1.254μg/ml浓度范围内,葛根素浓度与峰面积呈良好的线性关系,R=0.999 9;加样回收率为101.8%,RSD为1.09%(n=9)。[结论]该方法简便、准确、专属性强,可用于颈复康颗粒中葛根素的含量测定。     

正交试验优化葛根中葛根素的微波提取工艺

以体积分数50%的乙醇为提取剂,采用微波辅助法提取葛(Pueraria montana var.lobata)根中的葛根素,设计正交试验优化提取工艺。结果表明,优化的提取条件为料液比1∶40(m∶V,g/mL)、微波功率500W、微波处理时间5 min。此工艺条件下葛根中葛根素的提取率为3.51%。与加热回流法相比,采用微波辅助法葛根素的提取率提高了19.79%,提取时间缩短了90%。     

超声微波协同萃取葛根中葛根素工艺的研究

[目的]探究利用超声微波协同萃取葛根中葛根素的提取工艺,以期为葛根素的工业化生产提供新思路。[方法]采用单因素试验和正交试验,以葛根素得率为指标,分别考察微波功率、提取时间、乙醇浓度、料液比及浸泡时间对葛根素提取的影响。[结果]在超声微波协同作用下,葛根素的最佳提取工艺为：微波功率为250W,提取时间为25s,乙醇浓度为50%,料液比为1：20,浸泡时间为30min。在此条件下,葛根素得率为0.6376%。[结论]超声微波协同萃取葛根素具有萃取效率高、节省时间、节省溶剂、节能、污染小等优点。     

葛粉工业废水葛根素含量测定方法的比较

【目的】验证紫外分光光度法测定葛粉工业废水葛根素含量的可靠性,建立一种可信度高、操作性强、适于监测葛粉工业废水葛根素含量动态变化的测定方法。【方法】在不同浓度的葛根素标准溶液中加入已知浓度的牛血清蛋白（BSA）,检验蛋白质对紫外分光光度法测定葛根素含量的干扰;分别采用紫外分光光度法和高效液相色谱（HPLC）法测定葛粉工业废水葛根素含量,确认紫外分光光度法测定废水中葛根素含量的可靠性。【结果】在2～20μg/mL浓度范围内,葛根素浓度与其在250nm处的吸光值呈良好的线性关系,线性方程为：y=0.0648x-0.0049,相关系数（R2）为0.9995。紫外分光光度法测定葛根素的最低检出限为0.0480μg/mL,具有精密度较高、准确度良好,且不受BSA干扰的特点。紫外分光光度法与HPLC法测定结果的相对误差为5.0%,在可接受范围内。【结论】利用紫外分光光度法替代HPLC法进行葛粉工业废水葛根素含量测定具有可信、简便的特点,适用于工厂中葛粉工业废水葛根素分离纯化生产过程的实时监测。