洋葱挥发油的抗真菌作用及其机理

采用砂堡培养基液体稀释培养法和薄层色谱分析法研究了洋葱挥发油抗真菌效果及机理，以期发现天然抗真菌药物，开发洋葱资源．结果表明：洋葱挥发油提取物对酿酒酵母、白假丝酵母、新生隐球菌、黑曲霉、黄曲霉、红曲霉、青霉等真菌的生长有较强的抑制作用；其最低抑菌浓度酿酒酵母和白假丝酵母为0．25％，新生隐球菌为0．50％．薄层色谱分析表明：洋葱挥发油处理后的自假丝酵母的羊毛周醇、麦角固醇的古量降低。而角鲨烯的音量增高，说明洋葱挥发油可能抑制白假丝酵母麦角周醇的早期合成.     

萝卜抗真菌蛋白Rs-AFP2基因PCR定点突变及其在大肠杆菌中的表达

根据已报道的萝卜抗真菌蛋白Rs-AFP2基因序列，结合基因及其表达调控中遗传密码的偏爱性，人工合成引物，利用PCR重叠延伸法，使编码序列区的部分核苷酸突变，采用嵌套PCR，迅速克隆到目的基因片段R -AFP,连接到pGEM-T easy载体上，转化大肠杆菌XL1菌株，筛选到阳性克隆。序列分析结果表明，PCR产物全长240bp，有一个阅读框，编码29个氨基酸的信号肽和51个氨基酸的抗真菌蛋白，与突变前的Rs-AFP2基因相比，在编码区第3号氨基酸Lys相差一个碱基（TTG→TTA)，第5号氨基酸Gln相差一个碱基（CAG→CAA），第6号稀有密切Arg相差两个碱基（CAG→CGA），但二者编码产生相同。重新合成引物，将切除信号肽的Rs-AFP2基因和Rs-AFPm基因分别克隆到pET-21b( )质粒载体上，导入大肠杆菌BL21菌株。Tricine-SDS-PAGE电泳显示工程菌中存在6KD左右的目的蛋白带；软件分析显示，突变后pETAFPm的表达产物约为突变前pETAFPo表达产物的2倍；抑菌结果表明，pETAFPm表达产物的抑菌半径大于pETAFP2表达产物的抑菌半径。这些都说明改造后的Rs-AFPm基因与Rs-AFP2基因相比，已有效的提高表达量。     

"抗真菌1号"注射液治疗犬真菌性皮肤病

为了有效防治犬真菌性皮肤病,用抗真菌1号注射液对临床138条病犬进行治疗试验,通过3次～5次,15 d～40 d治疗观察,总有效率94.11%,治愈率为82.35%,为有效防治犬真菌性皮肤病提供了理想药剂.     

宁康霉素对植物病原真菌的抑制作用

宁康霉素是由海洋细菌BAC-9912发酵获得的生物农药,对多种植物病原真菌有良好的抑制作用。本研究发现宁康霉素强烈抑制玉米纹枯病菌和苹果轮纹病菌的菌丝,可使玉米纹枯病菌菌丝枯萎和产生畸形。比较宁康霉素与农利灵和速克灵对玉米纹枯病菌的抑菌效果,结果显示宁康霉素的抑菌效果优于两种化学农药。     

植物源抗真菌肽原材料的筛选及桂皮抗菌肽提取工艺的优化

为寻找抑制霉菌的植物源抗真菌肽(AMPs)的原材料,选择了53种具有潜在抑菌特性的植物材料,以黄曲霉和黑曲霉为指示菌,用硫酸铵沉淀法提取抗菌肽,对其抑菌活性进行评定;进一步选取桂皮为原材料,从浸提液种类、料液比、浸提时间和硫酸铵饱和度4个方面进行抗菌肽提取工艺的优化.结果表明：75.47%的供试样材料含有抗菌肽,籽实及根茎类含抗菌肽的比例为86.11%,明显高于花叶类(50%).抑菌圈直径达到15 mm以上的包括大蒜、丁香、桂皮、辣椒籽、桑叶、白芨、木香等12种材料.对桂皮提取工艺进行优化,得出在浸提液为PBS,料液比为1∶5.11 g/mL,浸提时间为39.29 h,硫酸铵饱和度为81.74%的条件下抑菌效果最好,抑菌圈直径可达到33.74 mm (p<0.05).研究结果显示：抗菌肽广泛存在于植物组织中;植物本身可利用的部位中,籽实及根茎是抗菌肽分布的主要部位;提取工艺优化后,桂皮抗菌肽抑菌效果提高了21.41%.     

血散薯块根内生真菌Periconia igniaria Stdif10发酵产物的生物活性研究

Periconia igniaria Stdif10是从血散薯块根中首次分离得到的内生真菌,为了解该内生真菌的生物学活性,采用滤纸药膜法、菌丝生长速率法和带药培养基涂布法分别测定了该菌发酵产物不同溶剂萃取物的抗虫活性、抗真菌活性、抗细菌活性。结果表明,发酵产物的石油醚萃取物表现出较好的抗虫和抗菌活性。其中,对玉米象具有显著的触杀活性,处理72 h的LC_(50)值为2.295 1 mg/cm~2。石油醚萃取物对玉米象还具有较好的驱避活性,处理48 h后在3.932、7.863、15.726 mg/cm~2 3个浓度梯度下对玉米象的驱避率均大于62%。石油醚萃取物对辣椒炭疽病菌、水稻胡麻叶病菌、茶轮斑病菌、甘蓝黑斑病菌、甘蔗凤梨病菌、烟草黑胫病菌、玉米大斑病菌、金橘砂皮病菌、贡柑链格孢菌9种供试植物病原真菌具有不同程度的抑制作用,其中对辣椒炭疽病菌、烟草黑胫病菌、金橘砂皮病菌3种病原真菌具有较好的抗菌活性,处理72 h的EC_(50)值分别为0.117 3、0.071 6、0.054 7 mg/mL。石油醚萃取物对产气肠杆菌、铜绿假单孢菌、大肠杆菌、普通变形杆菌、伤寒沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、蜡样芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、炭疽杆菌10种动物病原细菌具有显著的抗菌活性,处理24 h的MIC值为0.125～0.500 mg/mL。上述结果表明,血散薯内生真菌Periconia igniaria Stdif10次生代谢产物具有显著的抗虫和广谱的抗菌活性,且石油醚萃取物活性最佳(活性物质极性较低)。     

海藻乙醇提取物抗真菌活性

采用生长速率法和孢子萌发法对福建沿海几种常见海藻的抗真菌活性进行了筛选.结果表明:孔石莼(Ulva pertusa)的乙醇提取物对链格孢菌(Alternaria brassicae),浒苔(Enterom orphasp)、沙菜(Hypneasp)、江蓠(Gracilaria verrucosa)的乙醇提取物对甜椒灰霉菌(Botrytis cinerea)的菌丝生长抑制率都在40%以上;江蓠、沙菜和蜈蚣藻(Grateloupia filicina)的乙醇提取物对香蕉炭疽菌(Gloeosporium musarum)和苹果青霉菌(Penicillium expansum)孢子萌发的抑制率都在90%以上;羊栖菜(Sargassum fusiform e)乙醇提取物对苹果青霉菌的孢子萌发抑制率也在90%以上.化学预试验法结果表明,抗菌活性成分可能为酚类、糖类、内酯或甾醇.     

昆虫抗真菌肽基因的分泌型表达及活性鉴定

 【目的】黑腹果蝇(Drosophila melanogaster)抗真菌肽Drosomycin (Drs)及其同系物Drosomycin-like C (Drs-lC)和斑腹刺螠蝽(Podisus maculiverntris)抗真菌肽Thanatin对丝状真菌具有广谱高效的抑杀作用。实现抗真菌肽基因在酵母中的高效分泌型表达，对探讨利用转基因酵母的发酵液直接进行果蔬、食品和农产品防腐保鲜的生物技术研发有重要意义。【方法】将Drosomycin基因（Drs）及其同系物基因Drs-lC和Thanatin基因分别与酵母分泌型表达载体pPICZαA重组，构建成重组表达质粒pPICZαA-Drs、pPICZαA-Drs-lC和pPICZαA–Thanatin。利用电转化将重组质粒转化毕赤酵母GS115，经表型筛选和PCR鉴定获得的重组毕赤酵母转化子，在甲醇诱导下进行抗真菌肽的分泌表达。【结果】3种抗真菌肽基因的酵母表达产物对6个供试真菌中的5个有明显的抑制作用，Thanatin同时对供试细菌有抗菌活性。【结论】Drs、Drs-lC和Thanatin抗真菌肽基因成功地转化毕赤酵母，并实现其分泌型表达。     

6种高等真菌醇提物对植物病原菌的抗菌活性研究

[目的]研究海绵胶煤炱菌、条纹炭角菌、瑞克纤孔菌、木蹄层孔菌、红缘拟层孔菌和高木蹄层孔菌的乙醇提取物对植物病原菌的抗菌活性。[方法]采用牛津杯法测试6种高等真菌乙醇提取物对姜瘟病菌、水稻白叶枯病菌、白菜软腐菌及柑橘溃疡病菌的抗细菌活性;采用生长速率法测试6种高等真菌乙醇提取物对油菜菌核病菌、小麦赤霉病菌、苹果腐烂病菌、葡萄黑痘病菌、苹果斑点落叶病菌、棉花枯萎病菌和番茄棉腐病菌的抗真菌活性。[结果]6种高等真菌的乙醇提取物对植物病原细菌具有较好的抑制活性;除海绵胶煤炱菌外,其他5种高等真菌的乙醇提取物均对植物病原真菌具有较好的抑制活性。[结论]6种高等真菌对植物病原菌具有较好的活性,可进一步用于抗菌活性成分分离和生物农药开发研究。     

核糖体失活蛋白及其在植物抗立枯丝核菌基因工程中的应用

核糖体失活蛋白(RIPs)是一类主要出现在植物中并具有r RNA N-糖苷酶活性的蛋白质,大体上分为Ⅰ型和Ⅱ型2类。介绍了RIPs在抗真菌活性、毒性和免疫原性方面的研究进展,并对其在抗立枯丝核菌植物基因工程方面的应用进行了综述。